Диссертация (1141404), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Изучение амариллисовых алкалоидов ГомЛРС подснежниковСогласно литературным данным во всех частях растений G. woronowii и G.nivalis содержатся АА. Как и другие соединения, входящие в комплекс БАС, ААГомЛРС могут служить маркерами при их идентификации и подтвержденииподлинности.784.1.1.АнализамариллисовыхалкалоидоввГомЛРСподснежниковкачественными реакциямиПоскольку основной группой БАС подснежников являются АА, мыпосчиталинеобходимымпровестикачественныереакциисовсемиобщеалкалоидными осадительными реактивами, которые нам были доступны.Для подтверждения присутствия АА в ГомЛРС двух видов подснежниковготовили извлечение по методике, представленной в Приложениях 3 и 5,проводили качественные реакции со следующими общеалкалоидными осадительными реактивами: Драгендорфа, Вагнера-Бушарда-Люголя, Бертрана, Зонненштейна, Шейблера, 1 %-ым водным р-ром пикриновой кислоты, р-ром танина.Методикаприготовленияизвлечения,содержащегоалкалоиды,дляпроведения качественных реакций (Приложение 3, 5.
«ПОДЛИННОСТЬ»Определение основных групп биологически активных веществ п. 3. Качественнаяреакция на амариллисовые алкалоиды).Таблица 4.1.1.1.Результаты качественных реакций на АА в кислых извлечениях из ГомЛРСG. woronowii и G. nivalis№ Реактив (название, состав)1.2.3.4.5.6.7.Реактив Драгендорфа (р-р иодидависмута в калия иодиде)Реактив Вагнера-Бушарда-Люголя(р-р йода в калия иодиде)Реактив Бертрана (1 % растворкремневольфрамовой кислоты)Реактив Зонненштейна (1 %раствор фосфорномолибденовойкислоты)Реактив Шейблера (1% р-рфосфорновольфрамовой кислоты)1 % водный р-р пикриновойкислотыРаствор танинаРезультатГомЛРС G. ГомЛРСреакцииworonowiinivalisОсадок кирпично++красного цветаОсадок бурого++цветаОсадок белого++цветаОсадок++желтоватого цветаОсадокжелтоватого цветаОсадок желтогоцветаОсадок белогоцвета++++++G.79Таким образом, было подтверждено присутствие АА в исследуемомГомЛРС подснежников.
Следующим этапом исследования стало определениекомпонентного состава алкалоидной фракции методом ТСХ.4.1.2. Изучение алкалоидного состава ГомЛРС подснежников методом ТСХПредварительное извлечение суммы алкалоидов ГомЛРС проводилосьсогласноследующейметодикепредставленнойвПриложении3и5«ПОДЛИННОСТЬ», Определение основных групп биологически активныхвеществ п. 1. Тонкослойная хроматография (амариллисовые алкалоиды).Для проведения ТСХ-анализа были использованы следующие ПФ:1.
Хлороформ – этилацетат – метанол (2:2:1);2. Хлороформ – этанол – ацетон (8:1:4);3. Диэтиловый эфир – метанол – диэтиламин (90:5:5)4. Бензол – метанол (4:1);5. Бензол – метанол – этилацетат (7:10:2).Наилучшего разделения зон адсорбции алкалоидов ГомЛРС подснежниковудалось достичь при использовании ПФ №3: диэтиловый эфир – метанол –диэтиламин (90:5:5). В качестве свидетелей использовались растворы СОгалантамина и СО ликорина.Методика хроматографирования представлена в Приложении 3 и 5.ХП просматривали в УФ-свете при длине волны 254 нм для обнаружениязон адсорбции. Также обрабатывали модифицированным реактивом Драгендорфа,после чего на светло-жёлтом фоне хроматограммы наблюдались зоны адсорбцииалкалоидов оранжевого цвета.Зона адсорбции галантамина с Rf= 0,58 имела голубую флуоресценцию, аликорина с Rf= 0,10 – жёлтую флуоресценцию.На хроматограмме извлечения из ГомЛРС G.
woronowii и G. nivalisприсутствуют зоны адсорбции соответствующие Rf СО галантамина и ликорина,а также зоны адсорбции других АА. Зона адсорбции ликорина у G. woronowiiвыражена менее интенсивно (рис. 4.1.2.1).801,00,90,80,70,60,50,40,30,20,11234Рис.4.1.2.1. Схема хроматограммы алкалоидов ГомЛРС подснежников в системерастворителей диэтиловый эфир – метанол – диэтиламин (90:5:5)1. – извлечение из ГомЛРС подснежника Воронова2. – извлечение из ГомЛРС подснежника белоснежного3. – СО галантамина4. – СО ликорина814.1.3.
Изучение алкалоидного состава ГомЛРС подснежников методом ГХМСХроматограммы извлечений из ГомЛРС G. woronowii и G. nivalisпредставлены на рис. 4.1.3.1. Формулы идентифицированных АА двух видовподснежников представлены на рис. 4.1.3.2.ИдентификацияААпроводиласьпосопоставлениюмасс-спектрасоединения и масс-спектра эталона из библиотеки. В качестве примера на рис.4.1.3.3 приведен масс-спектр соединения №3 с временем удерживания 17,9 мин(А), эталонный масс-спектр галантамина из библиотеки (В) и их сравнение (Б).Масс спектры полностью совпадают, можно сделать вывод, что соединение №3 –галантамин.
Аналогичным образом были идентифицированы все АА. В таблице4.1.3.1 представлены основные ГХ-МС данные: время удерживания, основныепики масс-спектра, относительное содержание для каждого соединения.В ходе ГХ-МС анализа было идентифицировано 5 АА в ГомЛРС G.woronowii и 10 АА в ГомЛРС G. nivalis. АА G. woronowii относятся к подгруппамгалантамина, тацеттина, ликорина. АА G. nivalis относятся к подгруппамтирамина, гемантамина, нарциклазина, тацеттина, ликорина.А4132582Б59871031624Рис 4.1.3.1. ГХ-хроматограммы извлечений из ГомЛРС –(А) подснежника Воронова 1 – галантамин, 2 – тацеттин, 3 – галантин, 4 –ликорин, 5 – (1α,2β)-9,10-диметокси-3,12-дидегидро-галантан-1,2-диол;(Б) подснежника белоснежного 1 – трисферидин, 2 – исмин, 3 – микелалбин, 4 –6α-дезокси-6-метокси-кривеллин, 5 – тацеттин, 6 – 11-гидрокси-виттатин, 7 –дигидрогемантидин, 8 – дигидроэпинаталензин, 9 – ликорин, 10 – 3-эпимарконин.Таблица 4.1.3.1.Данные ГХ-МС извлечений из ГомЛРС G.
woronowii и G. nivalisСоединениеRT,мин1.трисферидин15,82.исмин15,93.галантамин17,94.микелалбин19,4m/z999 (223), 269 (222), 169 (138), 224 (155),111 (110), 164 (110), 225 (15), 226 (1)999 (238), 449 (257), 239 (163), 168 (149),196 (139), 110 (19), 258 (78), 211 (70), 226(70), 240 (18)999 (287), 905 (286), 606 (42), 414 (216),379 (174), 305 (115), 301 (44), 275 (244),210 (43), 288 (179)999 (281), 929 (280), 379 (252), 299 (251),269 (262), 263 (219), 282 (161), 253 (57),264 (31), 283 (20)Относительноесодержание, %G.G.woronivalisnowii–1,05–1,20–28,984,15–835.6α-дезокси-6метокси-кривеллин20,96.тацеттин21,421,67.11-гидроксивиттатин22,18.дигидрогемантидин22,29.дигидроэпинаталензин22,310.Галантин22,411.Ликорин22,822,912.13.3-эпимарконин(1α,2β)-9,10диметокси-3,12дидегидро-галантан1,2-диол23,822,9999 (70), 775 (42), 666 (75), 350 (314), 341(44), 330 (82), 261 (258), 211 (45), 181(113), 313 (173),999 (247), 891 (42), 812 (44), 808 (70), 620(45), 618 (71), 331 (297), 291 (115), 201(188), 181 (167)999 (181), 910 (269), 860 (227), 834 (115),806 (287), 720 (243), 648 (43), 643 (225),555 (42), 555 (44)999 (42), 944 (319), 788 (56), 694 (149), 574(211), 529 (71), 506 (77), 476 (43), 452(258), 451 (256)999 (303), 464 (186), 367 (211), 367 (259),305 (44), 301 (226), 293 (115), 282 (43), 275(258), 270 (201)999 (242), 982 (243), 349 (317), 244 (200),184 (125), 268 (174), 316 (143), 162 (140),127 (41), 123 (45)999 (226), 780 (227), 358 (44), 280 (18), 242(28), 287 (212), 186 (147), 268 (162), 155(119), 144 (111)999 (44), 852 (42), 831 (201), 651 (245), 463(70), 278 (139), 232 (128), 228 (115), 202(43), 199 (127)999 (242), 887 (243), 404 (303), 284 (199),302 (186), 244 (148), 228 (85), 304 (80), 286(70), 268 (68)–1,406,7856,20–2,15–1,93–2,71–37,3821,7826,59–2,62–5,08Галантамин, ликорин и тацеттин – АА двух видов подснежников,содержащиеся в наибольшем количестве.
Галантамин (28,98%), галантин (37,38%)и ликорин (21,78%) – основные АА ГомЛРС G. woronowii (в сумме 88,14%).Извлечение, полученное из ГомЛРС G.nivalis содержало тацеттин (56,20%) иликорин (26,59%) в достаточно больших количествах (в сумме 82,79%). Тацеттини ликорин присутствуют в обоих извлечениях из ГомЛРС.84NOHOOOOOONHOHN1. трисферидин2. исминO3. галантаминOONHOHHNNHOOOHOO4.
микелалбинOHOOO5. 6α-дезокси-6-метоксикривеллин6. тацеттинOOHOOHOHOOOHONONO7. 11-гидрокси-виттатинNOOH8. дигидрогемантидин9. дигидроэпинаталензинOHOOHOHONOONOONOOOO10. галантин11. ликорин12. 3-эпимарконинOOHOHON13. (1α,2β)-9,10-диметокси-3,12-дидегидро-галантан-1,2диолРис. 4.1.3.2. Формулы идентифицированных АА двух видов подснежников.85А286100Б5021617442063 70 77 8355655570779110391103115150165141 150165128 135128115187 194 201211185 194 2012112702562562302702441745024423021642100287405060708090100110120130+EI Scan (17.8-17.9 min, 32 Scans) podsnejnik_voronova.D140150160170180190200210220230240Head to Tail MF=932 RMF=932250260270280290300Galantamin287100ВOHO42O50N775551916570040 50 60(mainlib) Galantamin70948090244128103216174115141150230165121187201211226270256100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300Рис.
4.1.3.3. Идентификация соединения №2. А-Масс-спектр соединения №1, Вмасс-спектр галантамина из библиотеки, Б- сравнение масс-спектров.4.1.4. Количественное определение суммы амариллисовых алкалоидов вГомЛРС подснежников методом СФМС целью определения аналитической длины волны, при которой следуетпроводить измерение оптической плотности, нами были сняты УФ-спектрыпоглощенияокрашенныхворанжевыйцветхлороформныхизвлеченийкомплексов АА с тропеолином 000-II извлечений из ГомЛРС G. woronowii, G.nivalis и СО галантамина и ликорина.
УФ-спектры поглощения снимали винтервале длин волн от 450 нм до 550 нм. Результаты исследований представленына рис. 4.1.4.1.864312Рис. 4.1.4.1. УФ-спектры поглощения комплексов АА с тропеолином 000-IIв интервале длин волн 450-550 нм. Обозначения:1 – СО галантамина;2 – СО ликорина;3 – хлороформное извлечение из ГомЛРС G. woronowii;4 – хлороформное извлечение из ГомЛРС G. nivalis.Установлено что, продукты взаимодействия АА G.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
