Диссертация (1141404), страница 8
Текст из файла (страница 8)
[43,55]ТСХ применялась для анализа двух видов подснежников – G. krasnovii и G.nivalis.Для разделения, идентификации и количественного определения АА G.krasnovii исследователями из Пятигорского медико-фармацевтического институтав 1967 г. использовалась ТСХ на оксиде алюминия в качестве ПФ применяласьсистема бензол-этанол (30:1,5), детектирование – при помощи реактиваДрагендорфа. Было определено присутствие галантамина, а также 4-х другихамариллисовых алкалоидов неустановленной структуры [3].Горбунова Г.М. и Патудин А.В.
определяли содержание галантамина в G.nivalis, экстрагировали этанолом, НФ – щелочной силикагель КСК, ПФ –хлороформ-этилацетат-метанол (2:2:1), детектирование – парами йода [49].Лейфертова И. и Браздова в 1967 г. изучали методами ТСХ и БХ образцы G.nivalis, заготовленные в разных регионах. Обнаружено 7 АА (галантамин,ликорин и тацеттин и др.) [160]. Калашников И.Д.
исследовал АА фракцию излуковиц G. nivalis с помощью ТСХ на силикагеле с применением в качестве ПФтрех смесей: хлороформ-ацетон-диэтиламин (5 : 4 : 1); n-гексан-хлороформацетон-диэтиламин (8 : 2,5 : 3 : 0,5); толуол-ацетон-хлороформ-диэтиламин (4,5 :2,5 : 2,5 : 0,5). Реактив Драгендорфа – проявляющий реагента, установленоналичие 6 АА (в том числе галантамин и ликорин) [62].421.5.2.Высокоэффективнаяжидкостнаяхроматографияигазоваяхроматография в анализе амариллисовых алкалоидовВ последнее время метод ВЭЖХ стал одним из наиболее широкоприменяемыхванализеприродныхАА.Высокаячувствительностьиселективность данного метода стали причиной повсеместного применения.ВЭЖХ применялась многими авторами, главным образом, для исследованияфармакокинетики и метаболизма растворимых солей, например, галантаминагидробромида и его метаболитов.Так, в работе коллектива авторов из технологического университетаЭйндховена (Нидерланды) представлен метод нормально-фазовой ВЭЖХ с цельюопределения галантамина в плазме, моче и желчи.
В качестве ПФ применяласьсистема растворителей n-гексан - дихлорметан - этаноламин (500 : 500: 0,25) вкачестве элюента дало точные результаты, предел обнаружения составлял 5 нг/мл,коэффициент вариации на этом уровне составил 37,8% (n = 4) [141].Тенчева Ж. с соавт. разработали метод обращенно-фазной ВЭЖХ дляанализа галантамина и его метаболитов в моче и плазме. В качестве ПФиспользовалась смесь растворителей метанол - вода (40:60), модифицированная5·10-3 М дибутиламином (pH=7). В качестве НФ выступала колонка RP-8 фирмыMerck [176].Ли Хиаа с соавт.
был разработан метод ВЭЖХ для одновременногоопределениягалантаминаХроматографическийанализиликоринапроводиливвтравеследующихликорисаусловиях:(Lycoris).НФ–Phenomenex-С18; ПФ – ацетонитрил (А) – 0,1% трифторуксусная кислота (ТФУ)(В) с градиентным режимом элюирования; УФ-детектирование при длине волны289 нм.
На калибровочных кривых для галантамина и ликорина наблюдаласьлинейность в диапазоне от 0,5 до 10 мг/л (r = 0,9999). Предел обнаружениясоставил – 0,09 мг/л для галантамина и 0,15 мг/л для ликорина при соотношениисигнал-шум – 3 [187].43Для определения АА, полученных из культуры клеток Leucojum aestivum L.,использовалась система Waters HPLC с УФ-детектором (Waters 2487, Милфорд,США) и бинарного насоса (Waters 1525, Милфорд, США), длина волны 287 нм. Вкачестве НФ использовалась колонка Symmetry® С18 с обращенной фазой (150 ×4,6 мм, 5 мкм, Waters Милфорд, США). Элюирование проводили в градиентномрежиме: ПФ А – ацетонитрил и ПФ В – 1% буферный раствор ацетата аммония(рН 6,6 с помощью уксусной кислоты).
Метод разработан для анализа продуктовбиосинтеза – галантамина, ликорина и норгалантамина [155].Кая Г.И. с соавт. разработали надежный метод ВЭЖХ-УФ метод дляопределения галантамина и ликорина в Galanthus trojanus A.P. Davis, Özhatay иGalanthus cilicicus Baker. АА извлекали с использованием колонок наполненныхдиатомовой землей (Extrelut). Хроматографическое разделение проводили сиспользованием изократического режима элюирования, с ПФ – трифторуксуснаякислота-вода-ацетонитрил (0,01: 92,5: 7,5), скорость потока 1 мл/мин, детектордиодно-матричный [159].Берковым С.
соавт. был разработан и валидирован ГХ-МС метод дляколичественногоопределениягалантаминавразличныхрастительныхисточниках: луковицах и листьях Narcissus confusus Pugsley; луковицах Narcissuspseudonarcissus сорта “Carlton”; листьях и в культуре клеток in vitro L. aestivum.Образцы (50 мг) экстрагировали метанолом (1 мл) в течение 2 ч, а затем аликвотыэкстрактов силилировали и анализировали с помощью ГХ-МС. Калибровочнаякривая была линейной в диапазоне 15-800 мкг галантамина в образце, чтопозволяло анализировать пробы с содержанием галантамина 0,03-1,54%.
Помнению авторов, аналитический метод, разработанный в данном исследовании,является простым, чувствительным и более информативным, чем обычныеаналитические методы (ГХ, ВЭЖХ и ЯМР), и может использоваться для контролякачества растительного сырья в фармацевтической промышленности [120].МетодГХ-МСпозволяетпроводитькачественныйанализААсиспользованием библиотеки полных масс-спектров.
Таким образом, можноопределять алкалоидный профиль в объекте, не имея в наличии всех стандартных44образцов алкалоидов [121]. Так в метанольных экстрактах из луковиц, листьев иплодов Pancratium canariense Ker Gawler, методом GC-EI-MS было определеноприсутствие 31 АА, в том числе галантамина, ликорина и гемантамина [178].1.5.3.
Спектрофотометрия в анализе амариллисовых алкалоидовПрименение метода прямой спектрофотометрии для определения АА в ЛРСограничено небольшой величиной коэффициента удельного поглощения и,зачастую, невысоким содержанием.Разработанхромато-фотоколориметрическийметодколичественногоопределения галантамина в листе унгернии Виктора (ФС 42-1520-80) и ликоринав листьях унгернии Северцева (ФС 42-1257-82), основанный на способностиокрашенного комплекса алкалоида с тропеолином 000-II поглощать в видимойобласти спектра [105, 106]. В ГФ X на лекарственную форму галантаминагидробромида для количественного определения используется метод УФспектрофотометрии [50].Предложенный Тохтабаевой Г.М. метод количественного определениягалантамина в листьях нарцисса (Narcissus) сорта “Fortune” представляет собоймодификацию метода определения галантамина в листе унгернии Виктора;отличия заключаются в стадии экстракции (размер частиц, экстрагент, времяэкстракции), одновременном хроматографировании испытуемого и стандартногообразца галантамина на одной хроматографической пластинке (в случае унгернииВиктора применяется калибровочный график) и стабилизации хлороформногораствора окрашенного комплекса этанолом.1.6.
Стандартизация сырья и препаратов подснежниковСуществует целый ряд аспектов при стандартизации сырья [96] и НГМ[102],которыенеобходимоучитыватьприразработкенормативнойдокументации. НГМ – важнейшая форма гомеопатической продукции и основадля получения ГомЛС.
Их получают из сырья различного происхождения, побольшей части растительного. Важным параметром при получении НГМ из45ГомЛРСявляетсяточнаяхарактеристикавидасырья,атакжееготехнологического состояния. Большей частью, в гомеопатии применяется свежеесырье, которое по общепринятым правилам приготовления НГМ позволяет витоге получать ГомЛС с широким спектром БАС [18, 20, 95].Свежее сырье подснежников представляет собой надземную часть растениявместе с подземными органами (целое растение).
Свежее ГомЛРС содержиткомплекс БАС, входящий в состав растений в их естественном состоянии, и неподвергшийся воздействию ферментов, которое в значительной степени влияет нахимический состав ГомЛРС [66, 102].Качество НГМ во многом зависит от качества ГомЛРС, времени и местасбора, концентрации этилового спирта и других технологических аспектов.Существенные различия в компонентном составе НГМ сказываются нафармакологическом действии ГомЛС. НГМ должны быть произведены согласноОФС «Настойки гомеопатические матричные» [97].
Следует еще раз подчеркнуть,что заготовку свежего ГомЛРС производят в строго определенные фазы роста иразвития, соблюдая при этом сроки и технологию сбора. Целые растения(надземные части с подземными органами) собирают в период цветения. ГомЛРСподснежников в зависимости от климатической зоны начинают заготавливать вмарте-апреле (в более южных районах в конце февраля). Следует отметить, чтодля нужд фармацевтической промышленности от G.woronowii заготавливалитолько подземные органы – луковицы, которые собирали также во время цветенияв марте. В анализе ГомЛРС, используемого в гомеопатической практике,действуют аналогичные приемы, что и для традиционного сырья: исследуютвнешние признаки и микроскопию, проводят химические реакции и применяютфизико-химические методы.
В качественном и количественном анализе большуюроль играют физико-химические методы, в частности хроматография иоптические методы анализа, позволяющие определять основные компонентыкомплекса БАС в ГомЛРС [65, 91, 111].В нашей стране до последнего времени практически отсутствовали методыконтроля качества НГМ, что в значительной степени являлось следствием46недостаточногопроведенияэкспериментальныхисследований.Основныепринципы и положения гомеопатии находят отражение в гомеопатическихфармакопеях Германии, Франции, Великобритании, Индии, США и др. Кнастоящему моменту в РФ зарегистрировано около 30 фармакопейных статей(ФС) на НГМ.
К критериям подлинности относятся качественные реакции наосновные группы БАС, испытания методом ТСХ и др. Иногда дополнительнопроводят количественное определение БАС. В ЧФС на НГМ приводится описаниеЛРСсуказаниемегосостояния(свежесобранное,замороженноеиливысушенное), метода получения НГМ. Кроме того, основными показателямикачества исследуемых НГМ являются: органолептические показатели (внешнийвид, цвет, запах), плотность, содержание спирта, сухой остаток, тяжелые металлы,микробиологическаясильнодействующиечистота,илирадионуклиды.ядовитыевещества,ДляНГМ,предусмотреносодержащихпроведениеиспытания на D4 [88, 92, 97, 101].В последнее время появляются новые физико-химические методы контролякачества ЛС, позволяющие анализировать высокие разведения НГМ. Так в работе[100] обсуждаются возможности аналитического контроля лазерным методомряда высоких, а также сверхвысоких разведений ЛС.
Потенциально метод можетиспользоваться в лабораторном анализе качества и производственных экспрессиспытаниях ЛП высоких разведений.Основной группой БАС и ГомЛРС и НГМ подснежников являютсяизохинолиновые АА, главные из которых – галантамин и ликорин. СодержаниеАА является основным показателем качества, который должен контролироватьсяпри стандартизации НГМ подснежников [22, 124].В настоящее время подснежники не используются в качестве сырьевыхисточников АА. Примерами получения субстанции галантамина природногопроисхождения служат производства галантамина гидробромида из луковицунгернии Виктора (Ungernia victoris Vved. ex Artjush.) на предприятии ОАО«Узхимфарм» им.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
