Диссертация (1141404), страница 14
Текст из файла (страница 14)
woronowii, G. nivalis иСО галантамина, СО ликорина с тропеолином 000-II имеют максимумпоглощения при длине волны 484 нм.Для количественного определения АА в ГомЛРС G. woronowii, G. nivalisнами использовалась следующая методика:Аналитическую пробу сырья растирают в ступке до кашицеобразногосостояния. Точную навеску около 10 г измельченного сырья помещают в колбувместимостью 100 мл, приливают 10 мл 95% этанола, 10 мл 10% растворааммиака и 40 мл хлороформа. Экстракцию проводят при встряхивании налабораторном шейкере в течение 1 часа. Поскольку в ходе экстракции образуетсяэмульсия, смесь центрифугируют в течение 15 мин при 3500 об/мин, верхнийводный слой экстрагируют ещё два раза порциями хлороформа по 40 мл в течение1 часа. Полученные хлороформные экстракты объединяют, растворительотгоняют под вакуумомК полученному остатку прибавляют 10 мл воды, 5 мл 1 % раствора кислотысоляной, перемешивают и помещают в делительную воронку вместимостью 50мл, прибавляют 10 мл хлороформа, 1 мл 1 % раствора тропеолина 000-II и87встряхивают в течение 3-5 минут, отделяют хлороформное извлечение ифильтруют через фильтр с 3 г безводного натрия сульфата, смоченного 5 млхлороформа, в мерную колбу вместимостью 25 мл.
Экстракцию повторяют ещедва раза 10 и 5 мл хлороформа, встряхивая в течение 2-3 минут, хлороформныйслой отбирают и фильтруют через тот же фильтр в ту же колбу. Хлороформноеизвлечение в мерной колбе доводят тем же растворителем до метки, тщательноперемешивают и измеряют оптическую плотность полученного раствора придлине волны 484±2 нм в кювете с толщиной слоя жидкости 10 мм. В качествераствора сравнения используется хлороформ.Параллельно проводят измерение оптической плотности раствора СОгалантамина и ликорина: около 0,01 г СО галантамина/ликорина (точная навеска)растворяют в 25 мл хлороформа в мерной колбе объемом 100 мл, доводятхлороформом до метки (раствор А). 1 мл раствора переносят в мерную колбу на100 мл, доводят хлороформом до метки (раствор Б).
2 мл раствора Б СОгалантамина/ликорина переносят в делительную воронку вместимостью 50 мл,затем добавляют 8 мл хлороформа, 10 мл воды, 5 мл 1 % раствора кислотысоляной, 1 мл 1 % раствора тропеолина 000-II, встряхивают в течение 3-5 минут,отделяют хлороформное извлечение и фильтруют через фильтр с 3 г натриясульфата безводного, предварительно смоченного 5 мл хлороформа, в мернуюколбу вместимостью 25 мл, далее проводят извлечение хлороформом дважды (10и 5 мл), как указано выше.Приготовление 1 % раствора тропеолина 000-II. 0,1 г растертого впорошок тропеолина 000-II растворяют в воде очищенной при нагревании наводяной бане, охлаждают, доводят водой очищенной до 100 мл.Расчет содержания суммы АА в ГомЛРС G. woronowii проводится впересчете на галантамин, а в ГомЛРС G.
nivalis в пересчете на ликорин.Содержание суммы АА в пересчете на галантамин/ликорин в процентах Xвычисляют по формуле:=··· 25 · 100· 25 · (100 −)=··· 100· (100 −)88где:– оптическая плотность испытуемого раствора;– оптическая плотность раствора СО галантамина/ликорина;– масса ГомЛРС, взятого для определения в граммах;– масса СО галантамина/ликорина в граммахСумма АА в ГомЛРС G. woronowii в пересчёте на галантамин составила0,215±0,005 %, а в ГомЛРС G. nivalis в пересчёте на ликорин – 0,182±0,004 %.Метрологические характеристики методики количественного определения суммыАА представлена в таб. 4.1.4.1.Таблица 4.1.4.1.Метрологические характеристики методики количественного определения суммыАА в ГомЛРС двух видов подснежников (n = 5, f = 4, P = 95%, T(f,P) = 2,7764)ОбъектХSΔXE,%ГомЛРС G.
woronowii0,2151,9·10-50,00430,00190,0052,50ГомЛРС G. nivalis0,1821,3·10-50,00350,00160,0042,414.2. Изучение флавоноидов ГомЛРС подснежниковВ настоящий момент о флавоноидах семейства Amaryllidaceae и родаGalanthus известно мало. В семействе наиболее часто встречаются два агликона –кверцетин и кемпферол, а также их гликозиды [146, 157]. Наряду с «обычными»,характерными для абсолютного большинства растений гликозидами кверцетина(рутин, изокверцитрин, авикулярин, гиперозид) и кемпферола (астрагалин), средиэтих растений встречаются более сложные по своей структуре гликозиды –софорозиды кемпферола (3-софорозидо-7-глюкозид, 3-софорозид). У некоторыхпредставителей семейства обнаружены также ксилозиды кемпферола, гликозидыизорамнетина (3-арабинозидо-7-глюкозид, 3- и 5-глюкозиды) [64]. Среди другихклассов флавоноидов у представителей семейства обнаружены халконы, флавоны,изофлавоноиды, хромоны [168, 188], С-глюкозиды флаванонов (6,8-ди-C-89глюкозилнарингенин) [156].
В подснежнике кавказском обнаружены гликозидыкверцетина – гиперозид и рутин [179]. Флавоноидный состав G. woronowii и G.nivalis в доступной литературе не описан. На основании этого была поставленазадача провести идентификацию и определить содержание данной группы БАС вГомЛРС G. woronowii и G. nivalis.На ВЭЖХ-хроматограмме G. woronowii наблюдается 5 интенсивных пиков(рис. 4.2.1).n1QBA127DMP-300315-530-Mar-2015 13:36:011: Scan ES+2962.90e810.94%10000.00DMP-300315-510010.0020.001: Scan ES+3176.36e73.45%6.479.8800.00DMP-300315-510.0020.001: Scan ES+2874.75e73.44%10026.5417.477.11 9.8800.00DMP-300315-517.5610.0023.5520.001: Scan ES+3031.97e75.858.09%10028.402.2900.00DMP-300315-510.00AU5.0e-2 1.332.5e-20.00.0014.382.6418.5222.7125.5620.002: Diode Array360Range: 5.276e-26.428.06 10.9010.0020.00TimeРис.
4.2.1. ВЭЖХ-хроматограмма ГомЛРС G. woronowii в режиме PS.90В режиме PS наблюдается пик фрагмента МИ с m/z 303 у 2-х соединений сRT=5,8 мин и RT=8,1 мин. Предположительно, компоненты – производныекверцетина.n1n130-Mar-2015 13:36:01QBA127QBA127DMP-300315-5 649 (5.908) Cm (638:654-(558:614+671:741)) DMP-300315-5265.715.72e6 100100%3.46%26.3310.0917.9522.3310.0020.0010.0020.005.8610028.72%30.001: Scan ES+4655.22e721.2100.00DMP-300315-5649.068.101000%10.18DMP-300315-5 888 (8.083) Cm (885:903-(914:974+822:877))1001: Scan ES+6493.95e68.4200.00DMP-300315-5465.0030-Mar-2015 13:36:015.84303.082.506.34e500.00DMP-300315-513.4310.0017.6422.5020.008.0926.4628.8730.001: Scan ES+3031.97e7%10030.001: Scan ES+4878.99e6%2.29196.3700.00DMP-300315-5487.125.0e-2 1.33629.950200400600AU412.45884.0280010001479.62120014002.5e-20.0m/z0.0014.38 18.52 22.7110.002.6420.006.4227.6030.002: Diode Array360Range: 5.293e-28.06 10.9010.0020.00Time30.00Рис.
4.2.2. ВЭЖХ-хроматограммы и спектры флавоноидов, производныхкверцетина, в ГомЛРС G. woronowii в режиме PS.Пик с RT=8,1 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z 464,6([M+Na]+ m/z 487, рис. 4.2. 2), а в режиме NS МИ m/z 462,6 (рис. 4.2.5). Для этогопика характерна структура гиперозида (таб. 4.2.2, №1).Пик с RT=5,8 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Na]+ m/z 649 (рис. 4.2.3), а в режиме NS m/z 625 (рис. 4.2.5). Предположительно, данный пик –кверцетин-3-галактозил-(1→6)-галактозид или кверцетин-O-софорозид (таб. 4.2.2, №2).Пик фрагмента МИ с m/z 317 в режиме PS соответствует 2-м соединениям сRT=6,5 и RT=9,9 мин.
Предположительно, компоненты – производныеизорамнетина или рамнетина. Пик с RT=6,5 мин в режиме PS соответствует МИ[М+Н] m/z 641 ([M+Na]+ m/z 663, рис. 4.2. 3), а в режиме NS m/z 639 (рис. 4.2.5). Влитературе для этого пика описывается несколько возможных структур –91например,изорамнетин-3-галактозил-(1→6)-галактозидилиизорамнетин-O-софорозид (таб. 4.2.2, №3).n1n130-Mar-2015 13:36:01QBA127QBA127DMP-300315-5 1088 (9.903) Cm (1080:1094-(1111:1155+1013:1074)) DMP-300315-5316.726.29e510010030-Mar-2015 13:36:011: Scan ES+5018.82e69.87%21.922.4000.00DMP-300315-5%501.0410.00DMP-300315-5 708 (6.445) Cm (699:717-(732:794+625:686))316.7910000.00DMP-300315-52.14e61003.597.89 10.96%4.0e-2%AU809.47Рис.20.003.452004004.2.3.600800100012001400m/zВЭЖХ-хроматограммы26.5417.4710.0020.006.421.332.0e-20.00.00и30.001: Scan ES+3176.36e79.8800.00DMP-300315-5663.05016.39 19.98 24.1610.006.47479.0730.001: Scan ES+6639.77e6%1290.731004.62020.006.45100687.90 863.4425.986.1611.6715.54 19.758.342.6430.002: Diode Array360Range: 5.293e-28.06 10.9010.00масс-спектры20.00Time30.00флавоноидов,производных изорамнетина или рамнетина, в ГомЛРС G.
woronowii в режиме PS.Пик с RT=9,9 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z 479 ([M+Na]+501, рис. 4.2.3), а в режиме NS m/z 477 (рис. 4.2.5). Для данного пика в литературеотсутствуют структурные формулы, но принимая во внимание предложеннуювыше структуру, можно сделать предположение о следующей структуре– 3-О-βD-галактозид изорамнетина (таб.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
