Диссертация (1141398), страница 8
Текст из файла (страница 8)
ТРО, расчет вели по формуле 2:ТРО =к−ок×100%,(2)где Vк и Vо – средний объем опухоли (мм3) в контрольной и опытной группах,соответственно.2. УПЖ, расчет вели по формуле 3:УПЖ =Пк−ПоПк×100%,(3)где Пк и По – средняя продолжительность жизни мышей (дни) в контрольной иопытной группах, соответственно.473. Извлечение (% случаев) – количество животных, проживших 90 днейбез признаков опухолевого процесса.2.2.5.
Статистическая обработка результатов анализаСтатистическую обработку данных, полученных в ходе выполненияисследований, проводили с помощью пакета программы Microsoft Office Excel2007 на основании ОФС.1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатовхимического эксперимента».48РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯПАРЕНТЕРАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ОРМУСТИНА3.1.
Изучение растворимости субстанции ормустинаЧтобы пройти через мембрану клетки, АФИ должна обладать определеннойлипофильностью и растворяться в липидном материале мембраны. Кроме того, посвоим физико-химическим свойствам вещества могут быть полярными илинеполярными, кислыми или основными [30]. Для АФИ со слабо кислыми илиосновными свойствами рН жидкостей ЖКТ и крови будут контролироватьрастворимость препарата в организме и, таким образом, скорость абсорбции черезмембраны [142].Так как субстанция ормустина медленно и умеренно растворима в воде (100мг в 10 мл) с целью возможности повышения растворимости сравнивалирастворяющуюспособностьразличныхрастворителей,разрешенныхдляприменения в инъекционных ЛФ.На данном этапе в качестве растворителей, способствующих повышениюрастворимости субстанции, использовали растворы маннита, ВМС (Kollidon 12PF,Kollidon 17PF, декстран 7000, ПЭГ-1500, Kollisolv PEG-400), органической(лимонная) и неорганической (хлористоводородная) кислот, сахара (лактоза)(табл.
3).Оказалось, что повышение растворимости субстанции ормустина более чемв 1,5 раза обеспечивается явлением солюбилизации [32] при добавлении маннитаи таких ВМС, как Kollidon 17PF, декстран 70000. Более значимого повышениярастворимости – в 2 и более раза удалось достичь только с применениемлимонной и хлористоводородной кислот.
Причем, при растворении ормустина врастворе 0,1 М хлористоводородной кислоты происходит образование соли (рис.12) [135, 153].49Таблица 3 – Изучение растворимости АФИ ормустина в различных растворителях№п/п1.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.Растворительвода для инъекцийраствор маннита 5 %раствор Kollidon 17PF 2 %2 % раствор декстрана 70000раствор маннита 5 %2 % Kollidon 17PF0,2 % раствор лимонной кислоты2 % раствор лимонной кислоты4 % раствор лимонной кислоты6 % раствор лимонной кислотыраствор лимонной кислоты 2 %6% лактозыраствор лимонной кислоты 2 %4% лактозыраствор Kollidon 17PF 10 %0,1 % лимонной кислотыраствор Kollidon 12PF 10 %0,1 % лимонной кислотыраствор Kollisolv PEG-400 10 %0,1 % лимонной кислотыраствор ПЭГ-1500 10 %0,1 % лимонной кислотыраствор 0,1 М хлористоводороднойкислоты3,93,53,53,6Концентрацияормустина врастворе, %1,01,71,81,73,61,62,92,42,32,21,52,02,52,52,02,02,02,23,11,63,21,73,11,83,21,82,02,5рНраствораРисунок 12 – Схема образования гидрохлорида ормустинаДля окончательного выбора растворителя из двух кислот (лимонной и 0,1 Мхлористоводородной) проводили исследования биологической активности двухполученных растворов на лабораторных животных.
Оказалось, что введение в50состав раствора лимонной кислоты в концентрации 2–6% вызывает гибельлабораторных животных, связанную с гемолитической реакцией. В связи с этим, вкачестве растворителя ормустина выбрали 0,1 М раствор хлористоводороднойкислоты.3.2.Выборметодарастворенияормустинаврастворе0,1Мхлористоводородной кислотыПосле выбора растворителя для субстанции ормустина изучали влияниеразличных методик интенсификации растворимости [137] – нагревание наводяной бане при 60оС, обработка УЗ [58], перемешивание на магнитной илипропеллерной мешалке с целью уменьшения времени растворения и недопущениязначительного снижения концентрации действующего вещества в растворе (рис.13 и 14).Для определения скорости растворения ормустина в 100 мл 0,1 Мхлористоводородной кислоты растворяли 2,5 г субстанции, после полученияпрозрачного раствора определяли содержание действующего вещества вСредгяя скоростьрастворения, г/минполученных растворах.10.50нагреваниеобработка УЗперемешиваниепропеллерноймешалкойперемешиваниемагнитноймешалкойРисунок 13– Влияние различных методик на скорость растворениясубстанции ормустина51Содержание ормустинав растворе, %32.521.510.50нагреваниеобработка УЗперемешивание перемешиваниепропеллерноймагнитноймешалкоймешалкойРисунок 14 – Влияние различных методик на содержание ормустина в растворепосле полного растворенияНаиболее быстро со скоростью 0,7±0,1 и 0,89±0,05 г/мин процессрастворения проходит при нагревании на водяной бане и обработке УЗ,соответственно.Однакоприменениенагреваниянецелесообразноиз-зазначительного снижения (на 20%) концентрации действующего вещества врастворе по сравнению с теоретическим содержанием.
При использованиимешалок потери достигали 15%, а средняя скорость растворения составила лишь0,16 и 0,35 г/мин при применении пропеллерной и магнитной мешалок,соответственно.Представленные данные указывают на то, что использование УЗ втехнологическом процессе получения ЛФ позволяет значительно снизитьпродолжительность растворения субстанции и при этом обеспечивает сохранениеконцентрации активного вещества практически на исходном уровне.
Болеебыстрое растворение действующего вещества под действием УЗ связано с тем,что под действием ультразвуковых микропотоков происходит интенсивноеперемешивание слоев жидкостей у самой поверхности, кроме того, в результатекавитационной эрозии и дробления твердых частиц значительно увеличиваетсяповерхность контакта между растворителем и растворяемым веществом [50].
В товремя как интенсификация растворения субстанции с помощью перемешивания52на магнитной и пропеллерной мешалках лишь незначительно ускоряет процессрастворения, а нагревание приводит к снижению концентрации действующеговещества более чем на 20% от первоначального.3.3. Изучение влияние ультразвуковой обработки на изомерный составормустинаСубстанцияормустинапредставляетсобойсмесьдвухизомеров(неактивного и активного).
От стабильности изомерного состава зависитпротивоопухолевая активность разрабатываемого препарата. При этом 10 г АФИрастворяли под действием УЗ и исследовали влияние времени и температуры, прикоторых происходит растворение, на изомерный состав ормустина (табл. 4).Таблица 4 – Влияние УЗ на изомерный состав ормустинаТемпература, оСо+20±2 С+15±2 оСВремя воздействия, мин0224802256Соотношение изомеров1:279,75 : 20,2579,77 : 20,2379,89 : 20,1179,81 : 20,1979,83 : 20,1780,11 : 19,89Из данных, представленных в таблице 5 видно, что непродолжительноевоздействие УЗ (до 48 мин при +20±2 оС) практически не влияет на изомерныйсостав ормустина и содержание второго изомера находится в пределах нормы(20,0-24,0%).
Поэтому можно сделать вывод о целесообразности применения УЗ втехнологии получения ПЛФ ормустина.3.4. Изучение стабильности раствора ормустина в процессе храненияИзучение стабильности 2,5% раствора ормустина в процессе храненияпроводили в течение 5 суток. При этом свежеприготовленный раствор ормустинахранили при комнатной температуре (22°С) и в холодильнике (4°С). Вопределенные промежутки времени (после приготовления, через 3 ч, через 6 ч,через 24 ч, через 48 ч, через 72 ч и через 120 ч) оценивали внешний вид растворов53и контролировали содержание действующего вещества в растворе (рис.
15) и pHраствора.Содержание ормустина,мг/мл272523214°С22°С1917150102030405060708090 100 110 120Время, чРисунок - 15. Изменение содержания ормустина в растворе в процессехраненияЗавсевремяэкспериментаненаблюдалосьвнешнихизменений(прозрачный, светло-желтый раствор), а также изменения pH (2,1-2,2). Ноконцентрация раствора за 5 суток упала на 12,5 и на 37% при хранении вхолодильнике и при комнатной температуре соответственно. Поэтому с цельюувеличения срока хранения раствора необходимо введение стабилизаторов илипроведение лиофилизации данной ЛФ.3.5. Изучение влияния формообразователей на стабильность ормустина враствореПоскольку 2,5% раствор ормустина нестабилен при хранении, дляповышения срока хранения ЛФ необходимо проводить её лиофилизацию. В связисэтим,изучаливлияниевведениявсоставраствораормустинаформообразователей.
Формообразователи в процессе сублимационной сушкиотвечают за формирование пористой лиофильной массы и, в то же время,обеспечивают отсутствие значимого снижения содержания действующего54вещества в растворе во время проведения технологических операций (какминимум в течение 3 ч).При изготовлении модельных составов 2,5 г. субстанции ормустинарастворяли в 100 мл раствора 0,1 М хлористоводородной кислоты под действиемУЗ.
К раствору ЛВ добавляли одно или смесь ВВ: Kollidon 12PF и 17PF, лактозу,маннит, лимонную кислоту в различных концентрациях и фильтровалиполученные растворы.Время растворения, минМАННИТ 4%22ЛАКТОЗА 4%16KOLLIDON 12PF 4%+ ЛАКТОЗА 2%15KOLLIDON 12PF 6%+ ЛИМОННАЯ КИСЛОТА 0,1%25KOLLIDON 12PF 10%25KOLLIDON 17PF 6%17КОНТРОЛЬ12051015202530Рисунок 16 – Влияние формообразователя на время получения прозрачногораствора% потерь ормустина за 3 чманнит 4%лактоза 4%Kollidon 12PF 4%+ лактоза 2%Kollidon 12PF 6%+ лимонная кислота 0,1%Kollidon 12PF 10%Kollidon 17PF 6%контроль02468101214Рисунок 17 – Влияние формообразователя на стабильность ормустина в растворе55Все растворы были прозрачные, светло-желтого цвета.
pH сразу послерастворения и через 3 ч оставалось постоянным и составляло для всех растворов2,0-2,1. Результаты измерений, представленные на рисунках 16 и 17, указывают нато, что добавление в состав модельного раствора в качестве сорастворителя иформообразователя 6% Kollidon 17PF значительно снижает потерю действующеговещества с 7,3% до 1,4% в процессе приготовления концентрата. В растворе,содержащем смесь 6% Kollidon 12PF и 0,1% лимонной кислоты, наблюдалинебольшое снижение потери ормустина, тогда как добавление 10% Kollidon 12PFили смеси 4% Kollidon 12PF с 2% лактозой наоборот приводило к ускорениюразрушения действующего вещества в 1,5 раза.