Диссертация (1141398), страница 12
Текст из файла (страница 12)
С этой целью отбиралислучайным образом по 10 флаконов от испытуемой серии. Каждый из полученныхрезультатов выражали в процентах от номинального содержания действующеговещества в одном флаконе – 1,0 мг (100%). Согласно ОФС.1.4.2.0008.15«Однородность дозирования», для 10 отобранных единиц анализа отклонение отноминала не должно превышать 1,5%.Из результатов, представленных в таблице 17, видно, что содержаниеормустина во флаконе для трех серий препарата находилось в пределах 99,8 –100,2% от номинала, что укладывается в допустимые нормы отклонения.83Таблица 17 – Стандартизация ПЛФ ормустина по показателю «количественноеопределение»Серия090310041204№ образца123456789101234567891012345678910Содержаниеормустина,мг/флакон124,7124,8124,7124,7124,6124,7124,8124,6124,6124,7125,1125,1124,8124,9124,7124,9124,6125,2125,1125,0125,1125,0125,1125,1124,9125,2125,0125,1125,1125,0Содержаниеормустина в % отноминального99,899,899,899,899,799,899,899,799,799,8100,1100,199,899,999,899,999,7100,2100,1100100,1100100,1100,199,9100,2100100,1100,1100Статистическиеданные̅=124,68S2 =0,006S=0,079S̅ =0,125̅±∆̅ =124,68±0,056̅, %=0,05̅=124,94S2 =0,038S=0,19S̅ =0,06̅±∆̅ =124,94±0,14̅, %=0,11̅=125,06S2 =0,007S=0,084S̅ =0,027̅±∆̅ =125,06±0,06̅, %=0,05Средняя масса и однородность по массе.
Определение средней массыпроводили согласно требованию ОФС.1.4.2.0009.15 «Однородность массыдозированных лекарственных форм» на 20 флаконах каждой серии. Взвешиваликаждую единицу в отдельности с точностью до 0,001 г. Отклонение от среднеймассы не должно превышать ±10%.Средняя масса содержимого флаконов указанных серий колебалась от 431до 449 мг (табл.
18), номинальная масса флакона составляет 441,0 мг.84Таблица 18 – Стандартизация ПЛФ ормустина по показателю «средняя масса иоднородность по массе»№ флакона1234567891011121314151617181920090313M, мгО, %436-0,9442+0,5437-0,7434-1,4439-0,2443+0,7448+1,8431-2,04400444+0,9447+1,6435-1,1439-0,244004400435-1,1439-0,2438-0,5438-0,5435-1,1Мср=440 мгСерия100414М, мгО, %433-1,8438-0,7447+1,4441+0,2441+0,2437-0,9438-0,7442+0,3431-2,3447+1,4448+1,6436-1,1435-1,3437-0,9448+1,6448+1,6445+0,9443+0,5442+0,3441+0,02Мср=440,9 мг120414М, мгО, %437-0,8431-2,2442+0,3443+0,5441+0,1438-0,6437-0,8443+0,5432-2,0447+1,4446+1,2435-1,3436-1,1437-0,8449+1,9446+1,2446+1,2444+0,7440-0,2444+0,7Мср=440,7 мгПримечание: М – масса содержимого флакона; Мср – средняя масса содержимого; О – отклонение от средней массыpH.
Определение проводили потенциометрически согласно ОФС.1.2.1.0004.15«Ионометрия». Для получения испытуемых растворов использовали водуочищенную, не содержащую углерода диоксид (pH 5,8-7,0). После добавления ксодержимому флакона 20 мл воды получали прозрачные растворы с pH=2,0-2,3.Потеря в массе при высушивании. Во всех исследуемых образцах потеря вмассе при высушивании не превышала 3%.4.4.2. Изучение стабильности готовой ЛФ ормустина при храненииКачество, терапевтическая эффективность и безопасность ЛП в процессехранения напрямую зависит от его способности сохранять свойства в пределахустановленной НД, в течение определенного срока при надлежащих условияххранения и транспортировки, т.е.
от стабильности. На основании результатов85исследования стабильности устанавливают срок годности ЛП, осуществляютвыбор первичной упаковки и определяют условия хранения [17, 51, 75].В процессе работы наработано несколько серий ПЛФ ормустина,заложенных на хранение при двух температурных режимах (4 оС и минус 18 оС).Мониторингстабильностиданныхсерийосуществлялсяпосрокамустановленным в ГФ: первый год – сразу после производства и через каждые 3мес; второй и третий год – через каждые 6 мес.Во время всего срока хранения трех серий не наблюдалось изменений в ЛФпо таким параметрам как описание, подлинность, прозрачность и цветностьраствора, аномальная токсичность и стерильность. Результаты определенияпараметра «средняя масса и однородность по массе» для исследуемых серий,представленные в таблице 19, указывают на незначительное увеличение данногопоказателя в процессе хранения за счет поглощения влаги, но при этом средняямасса укладывается в допустимый предел.
После хранения в течение полугодамасса увеличилась на 0,2–0,4 %, в течение 1 года – на 0,5-0,7%, а в течение 2 летмасса возрастает на 1,0-1,2%. Анализ представленных данных по остальнымпараметрам показал отсутствие значимых изменений показателей качества,введенных в проект НД при обоих режимах хранения. Следовательно, данныйпрепарат можно хранить при температуре 4 оС в течение 1,5 лет. Изучениестабильности препарата в процессе хранения продолжается.Таблица 19 – Изучение стабильности серий ПЛФ ормустина после получения и в процессе храненияСерия09031004Режимхранения, оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оССрок хранения,мес369121824369121824рНИзомерный состав2.02.12.12.12.02.12.12.12.12.02.12.12.12.12.12.02.02.02.12.02.12.12.02.12.12.178.88 : 21.1278.76 : 21.2478.81 : 21.1978.91 : 21.0978.92 :21.0878.83 : 21.1778.99 : 21.0178.76 : 21.2479.07 : 20.9378.80 : 21.2079.01 : 20.9978.85 : 21.1579.05 : 20.9578.91 : 21.0979.04 : 20.9678.85 : 21.1578.91 : 21.0978.81 : 21.1978.88 : 21.1278.76 : 21.1478.92 : 21.0878.99 : 21.0178.92 : 21.0878.94 : 21.0679.03 : 20.9778.99 : 21.01Количественноеопределение, мг/флакон124.7124.8124.8124.8124.8124.7124.8124.7124.8124.8124.8124.8124.8125.0124.9125.0124.9124.9125.0125.0125.0124.9124.9124.9125.0124.9Средняя масса,мг/флакон440.0440.2440.2441.7441.5441.6441.8443.0442.9443.5443.6444.8444.8440.9441.7441.8442.5442.6443.1443.0443.7443.6444.8444.7445.9446.1871204минус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оСминус 18 оС4 оС3691218242.12.12.12.12.12.12.12.12.12.02.12.12.178.96 : 21.0479.05 : 20.9579.12 : 20.8878.97 : 21.0378.92 : 21.0879.02 : 20.9878.99 : 21.0179.09 :20.9178.91 : 21.1979.01 : 20.9978.87 : 21.1378.96 : 21.0478.93 : 21.07125.1125.0125.1125.1125.1125.1125.0125.0125.1125.1125.1125.1125.1440.7441.6441.6442.4442.3443.1443.0443.8443.7444.8444.8445.7445.9Заключение по главе 4В результате проведенных исследований в качестве одного из методовопределенияподлинностиразработанметодТСХ-анализа.Подобраныоптимальные условия хроматографирвания и выбраны две системы растворителейдля идентификации ормустина и Kollidon 17PF в составе ПЛФ: н-бутонол: ЛУК:вода в соотношении 12:3:5 и пропанол-2: аммиак водный – 3:2.
Разработан ивалидирован метод количественного спектрофотометрического определенияормустина в составе ПЛФ. Для стандартизации готовой ПЛФ ормустинаподобраны показатели качества. Установлено, что ВВ входящие в состав ЛФ непоглощают в диапазоне 350-450 нм. В целях установления срока годности ПЛФсогласнотребованиямфармакопеипроводилиопределениевыбранныхпараметров на трех сериях, хранившихся при двух температурных режимах (+4 оСи -18 оС). За два года не наблюдалось значительных изменений в показателях приобоих режимах хранения.
Поэтому для данной ЛФ в раздел условия хранения впроекте НД на готовую ПЛФ «Ормустин, лиофилизат для приготовления растворадля инъекций 125 мг» установлено требование: хранить в защищенном от светаместе при температуре от 2 до 8 оС.89ГЛАВА 5. ОЦЕНКА ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ГОТОВОЙПЛФ ОРМУСТИНА5.1. Определение терапевтической дозы готовой ПЛФ ормустинаИзучениепротивоопухолевойактивностиготовойПЛФормустинапроводили в опытах in vivo на мышах в лаборатории экспериментальнойхимиотерапии и в лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапииопухолей НИИ ЭДиТО ФГБУ «НМИЦ онкологии им.
Н.Н.Блохина» МинздраваРоссии.Терапевтическуюдозупрепаратаопределялиприоднократномвнутривенном введении готовой ПЛФ в различных дозах мышам с асцитнымивариантами лимфолейкозов P-388 и L-1210.Препаратвводиливдозах50-175мг/кг.Поданнымграфиковпредставленных на рисунках 30-32 видно, что ПЛФ дозозависимо ингибируетрост изучаемых лейкозов. В дозах 50-100 мг/кг на обоих моделях наблюдалсяпостепенный рост показателя УПЖ (с 70% до 242% для L-1210 и с 90% до 178%для P-388) и излечения животных в опытных группах. Максимальное УПЖ (174%у мышей с лимфолейкозом P-388 и 346% у мышей с L-1210) и излечениеживотных (33,3% у мышей с лимфолекозом P-388 и 66,7% у мышей с L-1210)достигнуто при однократном внутривенном введении в дозе 125 мг/кг.
В болеевысоких дозах наблюдалось проявление токсичности, гибель испытуемыхнаблюдалась в 22,2-25% случаях.90УПЖ, %Доза, мг/кг175150P-388135L-1210100500050100150200250300350Рисунок 30 – УПЖ (%) мышей с лейкоцитарной лейкемией P-388 (асцитнаяопухоль) и лейкоцитарной лейкемией L-1210 (солидная опухоль)35302520%излечение15гибель1050050100125135150175Доза, мг/кгРисунок 31 – Излечение и гибель мышей с лейкоцитарной лейкемией P-3889180706050излечение30гибель%4020100050100125135150175Доза, мг/кгРисунок 32 – Излечение и гибель мышей с лейкоцитарнойлейкемией L-1210На основании выше изложенных данных в качестве терапевтической дозывыбрана доза 125 мг/кг и именно её применяли в дальнейших исследованиях приисследовании противоопухолевой активности изучаемой ЛФ на различныхопухолевых моделях.5.2. Противоопухолевая активность ормустина на различных солидныхопухолевых моделяхОпределение противоопухолевой активности готовой ПЛФ ормустинапроводили при однократном внутривенном введении в дозе 125 мг/кг мышам ссолидными опухолями (карциноме легкого Льюиса LLC, раке шейки матки РШМ5 и меланоме B-16).Таблица 20 – Противоопухолевая активность ПЛФ ормустина при однократномвведении мышам с солидными опухолямиПараметрТорможение ростаопухоликарцинома легкогоЛьюиса LLC93,0%Опухолевая модельрак шейки маткиРШМ-5излечение 100%меланома B-1684,0-91,0%92По данным таблицы 20 видно, что ормустин проявляет высокуюпротивоопухолевую активность в ряду солидных опухолей.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
