Диссертация (1141398), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Вконечном итоге, для выбранного состава ЛФ, остановились на следующейметодике:73Разведение свежеприготовленного раствора ормустина:Мерной пипеткой переносят 5 мл раствора ормустина в мерную колбу на 50мл, доводят объем колбы 0,01М хлористоводородной кислотой и перемешивают.Разведение ЛФ:Содержимое флакона растворяют в 0,01М хлористоводородной кислоте,количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объёмраствора до метки тем же растворителем, перемешивают. Время между началомприготовления испытуемого раствора и измерением оптической плотности недолжно превышать 30 мин.Приготовление раствора СО:Около 125 мг (точная навеска) субстанции ормустина растворяют в 0,01 Мхлористоводородной кислоте, количественно переносят в мерную колбувместимостью 50 мл и доводят объём раствора до метки тем же растворителем,перемешивают.
Время между началом приготовления испытуемого раствора иизмерением оптической плотности не должно превышать 30 мин.Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора СО наспектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 3962 нм в кюветес толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения кислотухлористоводородную 0,01 М.Содержание ормустина Х (мг) во флаконе вычисляют по формуле 4:=D1 ∙V1 ∙00 ∙ 0,(4)где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора;D0 - оптическая плотность раствора СО;V1- величина разбавления испытуемого раствора;V1- величина разбавления раствора СО;а0 - навеска СО, в мг.Данную методику проверили на 5 образцах концентрата (табл.
10) и 5образцах лиофилизата (табл. 10).74Таблица 9 – Результаты количественногосвежеприготовленном растворе12345S25,4980,104ормустинавОптическая плотность Концентрация ормустина,растворамг/мл0,80025,5740,79625,4480,80225,6380,79425,3840,79625,448Статистические данные2SS̅∆х̅х̅ ± ∆х̅̅, %№ образца̅определения0,01080,0930,1325,498±0,130,51Таблица 10 – Результаты количественного определения ормустина в лиофилизатеОптическая плотность Концентрация ормустина,растворамг/флакон0,792126,60,788125,90,791126,40,790126,20,791126,5Статистические данные2SS̅∆х̅х̅ ± ∆х̅̅, %№ образца12345̅S126,320,2770,0770,1240,34126,32±0,340,27Так как рассчитанная погрешность определения и в свежеприготовленномрастворе ормустина, и в лиофилиазате не превышает 1%, то можно сделатьзаключение о высокой точности данного метода анализа.4.3.
Валидация метода количественного определенияВалидацию [10, 14, 41] методики количественного определения проводили всоответствии с требованиями на образцах препарата и модельных смесях,полученных в лабораторных условиях. Изучение разработанной методикипроводилосьпотакимвалидационным параметрам, какспецифичность,линейность, правильность и прецизионность (сходимость и внутрилабораторнаяпрецизионность) [98].
Протокол валидации с установленными критериями75приемлемости был составлен в соответствии с утвержденными правилами ирекомендациями.4.3.1. ЛинейностьЛинейностьпредложеннойметодикианализаопределялипутемдоказательства линейного соотношения между концентрацией действующеговещества (ормустина) в ПЛФ и величиной сигнала (значение оптическойплотности).Первоначальноизготавливалисьмодельныерастворысконцентрацией ЛВ от 80 (20 мг/мл) до 120 % (30 мг/мл) от номинальногосодержания (25 мг/мл) путем разведения ЛФ водой.
Затем определяли среднююоптическую плотность из ряда определений для каждой концентрации ипроводили статистическую обработку данных с построением и решениемуравнения регрессии вида y=a+b·x (табл. 11).Таблица 11 – Расчет линейности методики количественного определенияормустина в ПЛФКонцентрация ормустинаСреднее значениеоптической%мг/млплотности, нм8020,00,6259022,50,70310025,00,78211027,50,8612030,00,932Статистические данныеНаклон прямой (b)0,0308Отрезок на оси ординат (a)0,0094Коэффициент корреляции (r)0,9998Регрессия0,6250,7020,7790,8560,933Уравнение регрессии для данной зависимости имеет вид y=0,0308x+0,0094.О достаточно тесной линейной связи между концентрацией ормустина иоптической плотностью говорит близость коэффициента корреляции к 1 (поабсолютнойвеличине).зависимостиисследуемыхДополнительнымвеличинрегрессионной прямой (рис.
29).подтверждениемявляетсяграфическоелинейностиизображениеОптическая плотность76y = 0.0308x + 0.00940.9250.8250.7250.625202224262830Содержание ормустина, мгРисунок 29 – График регрессивной прямой4.3.2. ПравильностьДля доказательства правильности аналитической методики проводиликоличественное определение АФИ в модельных смесях, отличающихся толькосодержанием действующего вещества (метод плацебо), в диапазоне концентраций100 – 150 мг/флакон (80-120 %).
Оценивали результаты анализа путем сравненияполученного результата с ожидаемым значением величины (концентрация ЛВ,мг/флакон).Наоснованииданныхпредставленныхвтаблице12методикуколичественного определения можно считать правильной, т.к. отклонения отсреднего значения входят в доверительный интервал средних результатованализа.77Таблица 12 – Результаты исследования правильности методики количественногоспектрофотометрического определения ормустина в ПЛФКонцентрация,%8090100110120̅99,89Масса ормустина, мг№ пробыОтклик, %найденноенавесказначение1100,6100,8100,2299,599,499,9399,899,699,81112,8112,799,912112,3111,799,973113,0113,3100,271125,7125,399,682124,7124,699,923125,1124,999,841138,0137,799,782137,5136,799,423137,5137,7100,151150,0149,899,872150,2150,6100,273150,0149,899,87Статистические данныеSS2S̅∆х̅х̅ ± ∆х̅̅, %0,2560,0660,0660,1499,89±0,140,144.3.3.
Cходимость и промежуточная (внутрилабораторная) прецизионностьДляизучениясходимостисравнивалирезультаты,полученныеводинаковых условиях, а именно с использованием одного и того жеспектрофотометра, одним и тем же исследователем, в короткий промежутоквремени (табл. 13). Так как для СФМ метода анализа коэффициент вариациисоставил менее 1%, то изменчивость вариационного ряда незначительна и можносделать вывод о сходимости предложенной методики анализа.Определение внутрилабораторной прецизионности производилось двумясотрудниками на одном спектрофотометре с целью показать, что аналитическаяметодика обеспечивает получение согласующихся результатов независимо отизменений внешних условий при использовании однородных проб (табл. 14).78Таблица 13 – Сходимость аналитической методики количественного определенияормустина в ПЛФсерия№ образца1234567Статистические данные1004ормустин, мг/флакон125,07125,1124,82124,95125,02124,96125,08̅SS2S̅∆х̅х̅ ± ∆х̅̅, %125,00,09850,00970,02970,09125,0±0,090,07Таблица 14 – Результаты определения промежуточной прецизионностиормустин, мг/флаконИсследователь 1Исследователь 21125,07125,22125,1124,963124,82124,94124,95125,055125,02125,146124,96125,17125,08124,93Статистические данныесерия№ образца1004№̅SS2S̅∆х̅х̅ ± ∆х̅̅, %1125,00,09850,00970,02970,09125,0±0,090,072125,040,11360,01290,03430,11125,04±0,110,09Присравнениирезультатовопределенияtтеор.tпракт.2,179содержания0,7ормустина,полученных двумя сотрудниками в разные дни видно, что различия междусредними значениями и стандартными отклонениями результатов 1-го и 2-госотрудников случайны.
Результаты теста Стьюдента для сравнения двухнезависимыхвыборок(t(95%;12)=2,179>0,7)систематических ошибок в методике.указываютнаотсутствие794.3.4. СпецифичностьСпецифичность методики количественного определения оценивалась сиспользованием трех модельных смесей. При этом содержание ВВ в смесяхоставалосьнеизменным,аварьировалитолькоколичествомсубстанцииормустина (табл.
15).Таблица 15 – Состав модельных смесей растворов ормустина для оценкиселективности методики количественного определенияСоставкомпонентовМодель №1Модель №2Модель №3ВовсехОрмустин, мгKollidon 17PF, мг0,1 M HCI, мл1001251503005исследуемыхмодельныхсмесяхtтеор>tпракт.Показателистатистических данных (табл. 16) указывают на незначительное расхождениимежду истинным значением искомой величины и ее средним значением, а такжеоб отсутствии системной ошибки анализа. Данная методика позволяет достоверноопределить содержание ормустина в ПЛФ в присутствии ВВ.Таблица 16 – Определение содержания ормустина в модельных смесяхРаствор СОИсследуемые образцыМодельнаясодержаниесодержаниеоптическаяоптическаясмесьормустина,ормустина,плотностьплотностьмгмг0,61998,90,627100,210,6261000,62399,50,630100,60,62299,40,779124,50,784125,320,7821250,782125,00,778124,40,781125,60,936149,70,943150,830,9381500,939150,20,934149,40,938150,0Статистические данные̅SS2̅S∆̅tпрактε, %99,720,676 0,4570,3020,840,930,84124,60,367 0,1350,1640,462,440,37150,02 0,531 0,2820,2380,660,080,444.4.
Стандартизация парентеральной лекарственной формы ормустина4.4.1. Показатели качества парентеральной лекарственной формы ормустинаВ соответствии с требованиями ГФ XIII для составления проекта НД наготовую ЛФ «Ормустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций125 мг» определяли показатели, по которым следует контролировать качестводанного препарата при получении и в процессе хранения. Для стандартизацииПЛФормустинавыбраныследующиепоказателикачества:описание,подлинность, средняя масса и однородность по массе, прозрачность и цветностьраствора, pH раствора, отсутствие механических включений, изомерный состав,посторонние примеси, количественное определение, потеря в массе привысушивании, пирогенность, аномальная токсичность и стерильность.Описание.
По внешнему виду все наработанные серии препарата представляютсобой пористую массу белого цвета с желтоватым оттенком.Подлинность.1. СФМ-анализ (методика представлена в разделе 2.2.3.1). В области от 350 до450 нм ЭСП растворов, приготовленные для количественного определенияормустина в ПЛФ, имели максимум поглощении при длине волны (396±2) нм.2. ТСХ-анализ (методика описана в разделе 4.1). При использовании системын-бутанол: ЛУК: вода (12:3:5) после насыщениями порами йода в йодной камере,на линии старта хроматограммы наблюдали желтое пятно Kollidon 17PF на уровнеСО-2. После обработки пластинок раствором нингидрина и подсушивания всушильном шкафу проявлялись фиолетовые пятна ормустина на уровнесоответствующего СО-1 (Rf=0,42). При использовании системы этанол 95%:аммиак водный (3:2), после детектирования парами йода, на хроматограмменаблюдали желтое пятно Kollidon 17PF на уровне соответствующего CO-2(Rf=0,78). После детектирования раствором нингидрина и подсушивания всушильном шкафу проявлялись фиолетовые пятна на уровне CO-1 (Rf=0,61).3.
ВЭЖХ-анализ (методика приведена в разделе 2.2.3.1 и 2.2.3.5). Нахроматограммеиспытуемогораствора,приготовленногодляопределенияизомерного состава, наблюдались два последовательно элюирующихся пика:82неактивный изомер 1 (время выхода 8,0-9,0 мин) и активный изомер 2 (времявыхода 11,3-12,8 мин).Количественное определение. Содержание ормустина в ПЛФ осуществлялиметодом СФМ с использованием раствора СО (методика представлена в разделе4.2).Однородность дозирования. Испытание на «однородность дозирования»проводили путем количественного определения содержания ормустина поотдельности в каждом отобранном образце препарата.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
