Диссертация (1141302), страница 25
Текст из файла (страница 25)
На каждом уровне концентрации ФСпроводилипо3 определения.Критерииправильностиспектрофотометрической методики определяются величиной относительной172ошибки среднего результата, которая не должна превышать 2,0 %, ихарактеризоватьсяотсутствиемзначимойсистематическойошибки.Результаты анализа оценивали, сравнивая полученные данные с ожидаемымзначениемвеличинысодержанияпророксанавмодельнойсмеси.Полученные данные приведены в таблице 29.Таблица 29– Результаты оценки правильности методики количественногоспектрофотометрического определения содержания пророксана втаблеткахМетрологическиеНайденоПроцент отСодержание№характеристики среднегономинальногопророксана в пророксанап/презультата анализа присодержанияпробе, мгмг%оценке правильности7017,057,09 100,54 m=2127,087,07 99,88 f=2037,036,88 97,81 ̅,%=100,33828018,018,15 101,71 S =1,73628,007,90 98,78 S=1,31838,008,07 100,82 ̅ =0,2889019,109,24 101,52 P,%=9529,009,06 100,66 t(p,f)табл.=2,09039,079,01 99,35 t(p,f) выч.=1,175100110,019,86 98,48 Δх=0,601;210,0010,02 100,21 ε,%=0,599310,0210,15 101,31110111,1011,23 101,14211,1211,41 102,57311,1011,29 101,72120112,0212,19 101,40212,0012,04 100,34312,0012,11 100,89130113,0013,10 100,77213,0312,95 99,42313,0012,71 97,76Как видно из данных, приведенных в таблице 29, относительнаяошибка среднего результата (ε = 0,599 %) не превышает 2,0%; результатылежат внутри доверительного интервала среднего результата анализа (±Δx),который составил 100,337 ± 0,601, и приближаются к истинному значению.173Численноезначениекоэффициентанормированныхотклоненийt(коэффициента Стьюдента), рассчитанное по результатам анализа, составило1,41.
Табличное значение коэффициента Стьюдента при 95 % доверительнойвероятности и степени свободы f = 20 равно 2,09, т. е. t выч. < t табл. (95 %,20), что позволяет считать, что результаты, полученные нашим методом,являются правильными и не отягощены систематической ошибкой.Сходимостьметодикиопределяливодинаковыхусловияхсиспользованием одного и того же прибора и одним и тем же специалистом вкороткий промежуток времени на 1 образце таблеток пророксана в 9повторностях с использованием навесок таблеточной массы, содержащей0,01 г ФС. Для полученных значений была проведена статистическаяобработка, результаты которой представлены в таблице 30.
Относительнаяошибкасреднеговероятности95 %результатадлясоставила0,95%.проанализированныхПридоверительнойобразцовпророксанадоверительный интервал результата отдельного определения (среднее ± Δx)составил 10,074±0,096 мг соответственно. Численное значение коэффициентаСтьюдента t (p, f), рассчитанное по результатам анализа составил 1,895.Общие результаты валидации данной методики приведены в таблице 1приложения 8.Такимобразом,былапредложенаметодикаколичественногоопределения содержания основного действующего вещества в лекарственномпрепарате«Пророксан,таблеткипролонгированногодействиягастроретентивные, 60 мг» с помощью спектрофотометрии.
По результатамэксперимента установлено, что данная методика обладает специфичностью,обеспечена приемлемой правильностью, сходимостью и линейностью какпри нормальных рабочих концентрациях, так и в экстремальных точкахдиапазона концентраций.174Таблица 30 – Результаты определения сходимости аналитической методикиколичественного спектрофотометрического определениясодержания пророксана в таблетках№ п/пНайденоМетрологические характеристики среднегопророксана, мгрезультата анализа при оценке сходимости110,289m=9; f=829,999̅,%=10,074S2=0,014; S=0,11739,967̅ =0,039410,048P,%=9559,919t(p,f)табл.=2,31610,193t(p,f) выч.=1,895710,096Δх=0,096810,015ε,%=0,955910,192При анализе высвобождения пророксана из таблеток в качестве средырастворения использовали 0,05 М солянокислый буфер с рН 1,2.
Изучениеспектровпоглощенияпророксана,растворенноговсреде0,1 Мхлористоводородной кислоты и 0,05 М солянокислого буфера, не выявилозначимых отличий (рисунок 1, приложение 9). Однако, при проведении теста«Растворение» с помощью on-line системы количество ФС пророксана,высвободившейся из исследуемых таблеток, определяли при длине волны325±2 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм .При измерении оптической плотности используемого при проведениитеста «Растворение» в качестве стандартного раствора пророксана сконцентрацией, равной 100% количеству ФС, высвобождившейся в средурастворения из таблеток, при 231±2 нм и 277±2 нм величина оптическойплотности,определяемаяспомощьюуказанногоспектрофотометра,находится в области значений, выходящих на предел чувствительностиприбора, что указывает на необходимость работы с образцами с более низкойконцентрацией.
Поскольку использование замкнутой проточной on-lineсистемы не предусматривает возможности прямого разбавления проб, в связис этим измерение оптической плотности ФС в пробах осуществляли при325±2 нм, где величина оптической плотности ниже. Так как при 277±2 нм175линейность зависимости оптической плотности от концентрации пророксанав растворе сохраняется в широком диапазоне концентраций от 0,014 мг/мл до0,092 мг/мл, то наблюдаемое пропорциональное увеличение концентрации ивеличины оптической плотности на протяжении всего спектра поглощения вобласти от 220 до 350 нм будет сопровождаться линейностью зависимостиоптической плотности от концентрации пророксана в растворе, в том числе ипри 325±2 нм.
Таким образом, в зависимости от типа испытания(«Количественноеопределение»,«Однородностьдозирования»,«Растворение») количественное определение пророксана в таблетках спомощью УФ-спектрофотометрии возможно проводить при использованиидвух рекомендованных длин волн - 277±2 нм и 325±2 нм.5.5.3. Разработка аналитической методики количественногоопределения примесей в плавающих таблетках с пролонгированнымвысвобождением пророксанаПри проведении контроля качества полученных таблеток и для оценкивлияния условий технологического процесса проводили анализ стабильностиФС пророксана в таблетках, а также полупродукте (грануляте), для чего вних определяли количественное содержание примеси 3-фенилпирролидина спомощью метода ВЭЖХ.Использование подвижной фазы, содержащей ион-парный реагент наоснове алкилсульфоната 1-гептилсульфоната натрия, обусловлено егоспособностью модифицировать поверхность колонки и обеспечивать наличиена ее поверхности заряда, таким образом, улучшая процесс сорбциипророксана, который представляет собой соль слабого органическогооснования.
Подкисление подвижной фазы, в свою очередь, способствуетподдержанию пророксана в ионизированном состоянии и его удерживаниюна модифицированной ион-парным реагентом неподвижной фазе, а такжеобеспечивает стабильность ФС при проведении анализа.176Для определения рабочей длины волны получены спектры поглощения3-фенилпирролидина и пророксана с концентрацией веществ 0,0025 и0,1 мг/мл.Полученныехарактеризуютсяспектрыодинаковымипредставленныенапоглощениямаксимумамирисунке 18.фенилпирролидиновогоиспытуемыхНаличиефрагментарастворовпоглощения,чтоивструктурепророксанаобъясняетналичиемаксимумапоглощения при 190±2 нм. В то время как в спектре поглощения 3фенилпирролидина отмечается наличие четкого максимума при длине волны190 нм и отсутствие поглощения при других, наиболее аналитическизначимых для пророксана длинах волн (231±2 нм, 277±2 нм, 306±2 нм).Поэтому детектирование решено проводить при длине волны 190 нм.Для количественного определения примеси точную навеску порошкаизмельченных таблеток или гранулята растворяли в 0,1 М растворехлористоводородной кислоты, раствор приготавливали в соответствии с п.2.4.5.
Срок годности растворов таких образцов составлял 24 ч. Однако, припроведении количественного определения методом внешнего стандарта, атакже определении критериев пригодности хроматографической системы вкачестверастворителяацетонитрил:0,1 Мнамирекомендованохлористоводороднаякислота.применениеЭтосмесиобусловленонеобходимостью использования для идентификации примеси 3-ФП еестандартного образца. 3-ФП практически не растворим в воде и малорастворим в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, но при этомрастворяется в ацетонитриле.
Извлечения пророксана из таблеточной массыили гранулята, полученные с помощью ацетонитрила, имели короткий срокхранения (не более 30 мин.). На рисунке 68 А приведены хроматограммы0,1 мг/мл раствора пророксана, на которых видно, что в полученныхрастворахсовременемпротекаетпроцессдеградациипророксана,сопровождающийся увеличением содержания примесей и площади их пиковна хроматограммах.
Добавление 0,1 М хлористоводородной кислоты кацетонитрилу в соотношении 1:1 позволяет предотвратить разрушение ФС и177сохраняет стабильность раствора до 24 ч, что подтверждается отсутствиемизменений на хроматограммах в течение суток (рисунок 68 Б).АБ0ч2ч3ч5ч24 чРисунок 68– Хроматограммы 0,1 мг/мл раствора пророксана, полученногорастворениемФСвацетонитриле(А)исмесиацетонитрил:0,1 М хлористоводородной кислоты 1:1 (Б).178Для разработанной методики выявлены специфичность, линейность ипараметры пригодности хроматографической системы. Для доказательстваспецифичности методики растворы плацебо и модельной смеси, содержащейпророксан с добавлением 3-фенилпирролидина, хроматографировали ввыбранных ранее условиях. Концентрация пророксана в растворе составила0,1 мг/мл, а 3-фенилпирролидина – 0,1 мг/мл. Хроматограммы растворовплацебо, пророксана 0,1 мг/мл и модельных смесей таблеточной массы с 3фенилпирролидиномприведенынарисунках69-71.Идентификациюпримесей проводили путем сопоставления времен удерживания пиков,полученныхнахроматограммаханализируемыхпробсвременамиудерживания пиков стандартного образца примеси 3-фенилпирролидина ипророксана в растворе модельной смеси.Рисунок 69 – Хроматограмма извлечения из таблеток пророксана–плацебо.Рисунок 70– Хроматограммамодельнойсмеситаблеточнойсодержащей пророксан (концентрация ФС - 0,1 мг/мл).179массы,Рисунок 71– Хроматограмма раствора модельной смеси таблеточноймассы,содержащейпророксансдобавкой10 мг 3-фенилпирролидина (концентрация ФС и примеси - 0,1 мг/мл).Линейная зависимость площадей пиков от концентрации пророксана и3-фенилпирролидина была подтверждена в диапазоне концентраций от0,000175 мг/мл до 0,0003 мг/мл, коэффициенты корреляции составили неменее 0,999 (рисунок 72).17500Площадь пика15000y = 4E+07x + 46,262R² = 0,999125001000075005000y = 2E+07x + 67,321R² = 0,9992500000,00010,00020,00030,0004Концентрация (С), мг/млРисунок 72 – Зависимость площади пика пророксана () и 3-ФП () от ихконцентрации в растворе.Пригодностьэффективностикоэффицициентухроматографическойхроматографическойасимметриисистемыколонкипика(попророксана,оценивалипикупопророксана),относительномустандартному отклонению, рассчитанному для площадей пиков в 5180параллельных измерениях и относительному времени удерживания 3фенилпирролидина.
По результатам исследования эти параметры должныимели следующие значения: эффективность хроматографической колонки, рассчитанная попику основного вещества, 71923; фактор асимметрии пика основного вещества 0,73, примеси –0,75; разрешение между пиками 3-ФП и основного вещества не менее11; относительное стандартное отклонение не более 1,5 %; относительное время удерживания 3-ФП (не менее 0,80 минотносительно времени удерживания пророксана).Таким образом, подобранные условия анализа позволяют проводитьразделение примеси 3-ФП, присутствующего в ФС пророксана, в ФС илекарственной форме.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
