Диссертация (1141299), страница 13
Текст из файла (страница 13)
1 – 1:10, 2 – 1:20; 3 – 1:30; 4 – 1:40; 5 – 1:50; 6 – 1:6076Следовательно, максимальный выход антоцианов в извлечение наблюдаетсяпри следующих соотношениях сырье – экстрагент: для высушенного сырья - 1:40,для свежего – 1:25.4.1.2 Определение суммы антоциановых соединений в плодах аронииСравнивая между собой плоды аронии разных сортов, можно сделать вывод оразличиях в количестве (а, скорее всего, и в качественном составе) извлекаемых ваналогичных условиях экстрактивных веществ.
Этот факт, предположительно,можно связать с действием таких факторов как: сортовые особенности, различныеусловия произрастания (влажность, температура, освещенность, тип почв и т.д.)[88].На следующем этапе было проведено количественное определение содержаниясуммы антоциановых соединений в плодах аронии различных сортов [90].Объектами изучения служили образцы свежесобранных и высушенных плодоврябины черноплодной, заготовленных на территории Воронежской области,Алтайского края, республики Адыгея и Калининградской области в периодсентябрь - октябрь 2014г.Полученные результаты представлены в таблице 10:Таблица 10.
Количественное содержание антоцианов в плодахРябины черноплодной3,7±0,0111,3±0,011Сорт «Вениса»Калининград-скаяобластьСорт«Викинг»РеспубликаАдыгея4,60±0,015Сорт«Алтайскаякрупноплодная»Алтайский крайСорт«Мичуринская»ВоронежскаяобластьАнтоцианыГруппаБАВСвежесобранныеплоды, сорт«Мичуринская»ВоронежскаяобластьСодержание БАВ,%0,98±0,003 1,53±0,03477Анализируя данные таблицы 10, можно сделать вывод о том, что наибольшееколичество антоцианов содержат свежесобранные плоды аронии.Сушканезначительно снижает содержание антоциановых соединений в плодах.Образцы сорта «Мичуринская» лидируют по содержанию данной группысоединений (содержание антоцианов в нем превышает более, чем в 2 разасодержание в других образцах).4.1.3.
Расчет основных параметров валидации используемых методикСогласно ОФС «Валидация фармакопейных методов», каждая разрабатываемаяметодика подлежит валидации. Валидация аналитического метода - это процесслабораторного изучения его пригодности для получения результата с достаточнойточностью и прецизионностью. Валидация фармакопейных методов проводитсяна этапе подготовки НД на новые лекарственные средства или при пересмотре ихв дальнейшем. Основная цель валидации - подтверждение обоснованности выбораметода для определения показателей и норм качества фармацевтическойпродукции по каждому разделу НД [60].Для методик определения количественного содержания действующих веществв качестве основных валидационных характеристик выступают: подлинность,прецизионность (сходимость, воспроизводимость), специфичность, линейность,аналитическая область методики.Намибылаопределенаирассчитанапрецизионность(сходимость,воспроизводимость) методик количественного определения антоцианов в плодахрябины черноплодной следующими методами: спектрофотометрией с расчетомсодержанияповеличинеудельногопоказателяпоглощения(Ɛ)испектрофотометрией с применением в качестве стандартного образца кобальтасернокислого.
Кроме того, был установлен предел количественного определения.Определение прецизионности аналитических методовПрецизионность аналитического метода характеризует степень близостинезависимых результатов индивидуальных испытаний, полученных в конкретныхустановленных условиях. Прецизионность зависит только от случайных факторов78и требует знания истинного значения измеряемой величины. Она выражаетсявеличиной относительного стандартного отклонения (коэффициентом вариации),доверительныминтерваломилиотносительнойошибкойопределения.Экспериментальные показатели прецизионности - повторяемость (сходимость) ивоспроизводимость.Повторяемость(сходимость)характеризуетстепеньсогласованностирезультатов измерений (испытаний), полученных одним и тем же методом, наидентичных образцах, в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором,на одном и том же оборудовании, в пределах короткого промежутка времени.При определении сходимости выполняли 6 параллельных определений в однихусловиях на одном и том же оборудовании.
Полученные данные представлены втаблице 11:Таблица 11. Результаты определения показателя сходимость при анализе АЦ вплодах рябины черноплоднойСпектрофотометрия с расчетомСпектрофотометрия с применениемсодержания по величине Ɛв качестве стандартного образцакобальта сернокислогоСоотношениеОтносительноеСоотношениеОтносительноесырье:экстрагентстандартноесырье:экстрагентстандартноеотклонение, %1:2501,5отклонение, %1:2502,4На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что величинаотносительного стандартного отклонения для всех выполненных измерений неболее 3%, что соответствует требованию к методикам количественногоопределения.Воспроизводимость характеризует меру совпадения результатов измерений,полученных одним и тем же методом на идентичных образцах, в разныхлабораториях, разными операторами, на разном оборудовании.79При определении показателя воспроизводимость для спектрофотометрическойметодикиисследованияпроводилина разныхприборах–СФ-2000испектрофотометре Hitach U1900.Для этого проводили 6 параллельных определений при анализе 100%концентрации,позволяющейстатистическирассчитатьэтипараметры.Результаты представлены в таблице 12.Таблица 12.
Результаты определения показателя воспроизводимость прианализе антоцианов плодов рябины черноплоднойСпектрофотометрия с расчетомСпектрофотометрия с применениемсодержания по величине Ɛв качестве стандартного образцакобальта сернокислогоHitachi U1900СФ-2000Hitachi U1900СФ-20001,51,62,42,5На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что приопределениисходимостиивоспроизводимостирезультатоввеличинаотносительного стандартного отклонения для спектрофотометрии не превышает 2% при расчете содержания по величине Ɛ и 3% соответственно при использованиив качестве стандартного образца кобальта сернокислого.Установление предела количественного определенияКроме основных валидационных параметров был установлен такой показатель,как предел количественного определения.Предел количественного определения - параметр количественного определениядля низших уровней содержания веществ в пробе образцов.
Это минимальнаяконцентрация аналита в образце, которая может быть определена с приемлемойточностью в условиях анализа. Выражается концентрацией аналита в образце.Согласно требованиям НД [60] предел количественного определения неотносится к параметрам, подлежащим определению при проведении валидацииметода количественного определения действующих веществ.80Согласно проекту ОФС «Валидация фармакопейных методов» [60] дляинструментальныхметодовнижнейграницейопределенияявляетсяконцентрация, дающая сигнал в 10 раз превышающий фоновый (соотношениесигнал - помеха 10:1). Фоновый сигнал измеряют, анализируя контрольныепробы, не содержащие действующих веществ (например, раствор плацебо в томже разведении).Для этого эксперимент проводили в 6 параллельных пробах с минимальнойконцентрацией.
В качестве плацебо использовали тот экстрагент (этанол),которым проводили извлечение антоцианов из сырья. Результаты определенияприведены в таблице 13.Таблица 13. Результаты установления предела количественного определенияантоцианов плодов рябины черноплодной методомСпектрофотометрия с расчетомСпектрофотометрия с применением всодержания по величине Ɛкачестве стандартного образцакобальта сернокислогоФон0,002ОптическаяСоотношениеплотностьсырьё:экстрагент0,021:20ФонОптическаяСоотношениеплотностьсырьё:экстрагент0,021:200,002По данным таблицы, антоцианы СФ методом можно определить в растворах сконцентрацией 1:20.Таким образом, в результате проведенных исследований было проведеносравнение спектрофотометрических методик с расчетом содержания по величинеудельного показателя поглощения и с применением в качестве стандартногообразца кобальта сернокислого.
Показано, что обе методики могут бытьиспользованыдляанализасодержанияАЦврастительныхобъектах.Установлено, что спектрофотометрическая методика расчета содержания поудельному показателю преломления обладает более высокой чувствительностьюи равнозначным пределом количественного определения АЦ, т.е. может бытьиспользована для количественного содержания антоцианов в плодах аронии.814.1.4 Исследование возможности интенсификации процесса экстрагированиясуммы антоциановых соединений из плодов рябины черноплоднойКнастоящемувременинакопленбольшойопытпоиспользованиюмикроволнового излучения в различных отраслях промышленности, в науке,технике, медицине и быту [70,72].
Однако в отечественной литературе этомувопросу посвящено не так много работ, в то время как за рубежом аспектыприменения микроволн обсуждаются достаточно активно. При этом в ряде работубедительно показано, что микроволновое электромагнитное излучение являетсянаиболее эффективным методом, позволяющим существенно интенсифицироватьизвлечение ряда биологически активных веществ из природных материалов,сохраняя их свойства, что гарантирует получение безопасной в экологическомотношении продукции [117,120].Поскольку антоцианы относятся к полифенольным соединениям, которыемогут окисляться под действием разных факторов, необходимо было исследоватьустойчивость антоцианов при их извлечении в разных условиях.Контроль содержания антоцианов в извлечениях проводили спектральнымметодом в характерной для них области поглощения (λ=510-550 нм).В качестве основных способов, которые могут повлиять на степень извлеченияантоцианов из высушенных плодов рябины черноплодной были выбраны:1.
Нагревание на кипящей водяной бане, t=90оС);2. Воздействие СВЧ-излучения;Извлечение антоцианов из плодов аронии проводили с использованием ранееразработанной нами методике [87]. Воздействие СВЧ-излучения обеспечиваливыдерживанием экстракционной емкости в бытовой микроволновой печи втечение различных отрезков времени. Полученные водно-спиртовые вытяжкианализировали на содержание антоцианов спектрофотометрическим методом,предварительноразбавляяихдослабо-розовогоокрашиванияраствора.Полученные кинетические кривые извлечения антоцианов из сырья представленана рис.16,17:82Рис.16. Изменение оптической плотности 40% спиртовых извлечений извысушенных плодов аронии в зависимости от времени экстрагирования привоздействии СВЧ-излучения.Рис.17.
Изменение оптической плотности 40% спиртовых извлечений изсвежесобранных плодов аронии в зависимости от времени экстрагирования привоздействии СВЧ-излучения.Из рисунка 16 видно, что кривая извлечения антоцианового комплекса имеетволнообразный вид, что может быть связано со ступенчатым чередованиемвоздействия излучения на выход данной группы биологически активных веществ.Данный эффект может объясняться цикличностью магнетрона, лежащего в основеработы СВЧ-печи.
После 85 секунды воздействия наблюдается резкое снижение83оптическойплотности,чтосвидетельствуетоснижениисодержанииантоциановых соединений в извлечении из высушенных плодов аронии. Данноеснижение может объясняться как частичным разрушением антоцианов подвоздействием излучения, так и изменением состояния растительного сырья(например, его переизмельчением под действием СВЧ-колебаний) с образованиемновой развитой поверхности, на которой возможна вторичная адсорбция ужевышедших в извлечение антоцианов.Анализируя рисунок 17, необходимо отметить, что кривая извлеченияантоцианового комплекса имеет вид прямой с 5 по 20 секунду. К 25 секунденаблюдается снижение содержания антоциановых соединений в полученномизвлечении,связанное,вероятно,затруднениями,касающимисявыходаантоцианов из вакуолей клеточного сока, в которых содержится данная группаБАВ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
