Диссертация (1141299), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Аликвотув 1,5-2 мл полученного экстракта центрифугировали при 15000 об/мин в течение10 мин [117].При определении профиля индивидуальных антоцианов использоваласьсистема ВЭЖХ «Agilent 1100» с диодно-матричным спектрофотометрическимдетектором (ДМД) и времяпролетным масс-спектрометрическим детектором«Agilent 6200 series» (ВЭЖХ-МС/TOF).В качественном антоцианиновом составе всех исследуемых плодов не былонайдено статистически значимых различий. Типичная хроматограмма одного изобразцов представлена на рис.10.Рисунок 10. Хроматограмма извлечения из плодов аронии черноплодной сорта«Вениса» при λ=520 нм. 1 – Цианидин-3-галактозид, 2 – Цианидин-3-глюкозид, 3– Цианидин-3-арабинозид, 4 – Цианидин-3-ксилозид.63Параметрыудерживания,массымолекулярныхионовиндивидуальныхантоцианов и их фрагментов в плодах аронии различных сортов представлен втабл.4:Таблица 4. Результаты ВЭЖХ-МС анализа индивидуальных антоциановыхсоединений плодов рябины черноплодной различных сортов№1.2.К’* ESI-MS+АнтоцианинЦианидин-3-галактозид 3.03Цианидин-3-глюкозид3.543.
Цианидин-3-арабинозид 4.194.Цианидин-3-ксилозид5.76Детектируемый ион449.10[M]+287.05[M – галактоза**]+449.10[M]+287.05[M – глюкоза]+419.09[M]+287.05[M – арабиноза]+419.09[M]+287.05[M – ксилоза]+* К’ – коэффициент емкости**Здесь и далее: молекулярная масса моносахарида минус 18 Да (молекулаводы, теряющаяся при образовании гликозидной связи)В масс-спектрах, идентифицированных нами индивидуальных антоцианиноваронии в различных соотношениях присутствовали фрагменты агликонов.Профильантоцианиновванализируемыхобразцах(в%отсуммыантоцианинов) представлен в таблице 5.Таблица 5.
Состав индивидуальных антоцианов в извлечениях из плодоврябины черноплодной различных сортовСорт плодовСостав индивидуальных антоцианиноваронии(в % от суммы антоцианинов)Цианидин-3- Цианидин-3- Цианидин-3- Цианидин-3галактозидглюкозидарабинозидксилозид64«Викинг»62.83.329.04.9«Алтайская60.63.630.55.3«Вениса»63.82.326.37.6«Мичуринская»71.42.822.13.7крупноплодная»Все обнаруженные антоцианины являлись гликозидами цианидина. Во всехисследуемых сортах аронии преобладал цианидин-3-галактозид (60,6-71,4%).Относительное содержание цианидин-3-арабинозида было в 2-3 раза меньше, чемцианидин-3-галактозида.
Относительное содержание остальных антоцианинов (3ксилозида и 3-глюкозида цианидина) составило от 6.5 до 9.9%. Существенныхразличий в содержании индивидуальных антоцианинов (в % от суммы) междуплодами аронии четырех изученных нами сортов выявлено не было.3.2. Изучение флавоноидов плодов Рябины черноплодной методомтонкослойной хроматографииДля качественной идентификации флавоноидов в плодах аронии использовалиметодтонкослойнойхроматографиинапластинкахмарки«Sorbifil».Элюирование проводили в системе: этилацетат – кислота муравьиная – вода(10:3:2). Высота подъема фронта растворителя – 8 см.
В качестве стандартныхобразцов использовали 0,05% растворы ГСО рутина, кверцетина, лютеолина-7гликозида. Исследуемое спиртовое извлечение из сырья наносили на пластину вколичестве 10 мкл. Детектирующим реагентом служил 2% спиртовой растворалюминия хлорида, при обработке которым флавоноиды проявлялись в видеголубыхпятен,святящихсяпредставлены на рисунке 11:вУФ-свете[100].Полученныерезультаты65Рис.11. Результаты ТСХ-анализа флавоноидов в спиртовых извлечениях извысушенных плодов Рябины черноплодной:1- извлечение из плодов аронии, заготовленных на территории республикиАдыгея; 2- извлечение из плодов аронии, заготовленных на территорииВоронежской области; 3- извлечение из плодов аронии, заготовленных натерритории Алтайского края; 4 –извлечение из плодов аронии, заготовленных натерритории Калининградской области; 5- 0,05% раствор РСО рутина; 6 - 0,05%раствор РСО лютеолин – 7- гликозида; 7- 0,05% раствор РСО кверцетина;Анализируя данные рисунка 10, можно сделать вывод о том, что нахроматограмме извлечений из всех анализируемых образцов плодов аронииобнаруживается 3 зоны, дающих характерное для флавоноидов свечение в УФсвете.
Сравнение Rf зон флавоноидов в исследуемом и стандартных образцахпозволило сделать вывод о наличии в плодах аронии рутина, кверцетина илютеолин-7-гликозида.Покачественномусоставуфлавоноидовобразцы,заготовленные в разных регионах, различий не имели.3.3. Изучение дубильных веществ плодов Рябины черноплодной методомтонкослойной хроматографииСледующей группой исследуемых БАВ являлись дубильные вещества.Дубильные вещества - высокомолекулярные, генетически связанные между собойприродныефенольныесоединения,обладающиедубящимисвойствами.66Дубильные вещества широко распространены в растительном царстве, обладаютвяжущим вкусом, характерным для плодов аронии.Анализ проводили на пластинах марки «Sorbifil».
Высота подъема растворителя8 см. В качестве стандартных образцов использовали спиртовой раствор танина игалловой кислоты. Исследуемую вытяжку наносили в виде водного раствора(1:10) в количестве 10 мкл.Элюирование проводили в системе: этилацетат- кислота муравьиная – вода(8:1:2). После элюирования пластины высушивали в сушильном шкафу дополного исчезновения запаха растворителя. В качестве детектирующегореагента использовали спиртовой 1% раствор железоаммонийных квасцов [95,96,97].
Дубильные вещества проявлялись в виде пятен черно-синего цвета нажелтом фоне пластины. Полученные данные представлены в табл.6 и на рис.12:Таблица 6. Элюирующие системы, используемые для определения дубильныхвеществ плодов аронии№ п/п1234567891011Состав элюентан-бутанол – кислота уксусная – вода (10:3:7)н-бутанол – кислота уксусная – вода (4:1:2)н-бутанол – кислота уксусная – вода (40:12:28)Вода – кислота муравьиная – этилацетат (5:10:85)Этилацетат – кислота муравьиная – вода (80:10:10)Хлороформ – вода – спирт этиловый (60:30:20)Диэтиловый эфир – кислота уксусная – гексан –этилацетат (20:20:20:40)Этилацетат- кислота муравьиная – вода (8:1:2)Этилацетат- кислота муравьиная – вода (8:1:1,5)Этилацетат- кислота муравьиная – вода (8:1:1)Этилацетат- кислота муравьиная – вода (8:1:0,5)Полярность6,426,006,424,555,145,83,245,65,385,14,8767Рис.12.
Результаты ТСХ-анализа дубильных веществ в водных извлечениях извысушенных плодов Рябины черноплодной:1- извлечение из плодов аронии, заготовленных на территории республикиАдыгея; 2- извлечение из плодов аронии, заготовленных на территорииВоронежской области; 3- извлечение из плодов аронии, заготовленных натерритории Алтайского края; 4 – извлечение из плодов аронии, заготовленных натерритории Калининградской области; 5- РСО кислоты галловой; 6- РСО танина;В ходе анализа на пластине для всех четырех образцов были обнаружены двачерно-синих пятна, одно из которых соответствовало по значению Rf кислотегалловой (Rf=0,89).
Второе пятно идентифицировано не было.3.4. Изучение органических кислот плодов Рябины черноплодной методомтонкослойной хроматографииВ различных органах растений органические кислоты содержатся в видекомплекса и распределены неравномерно: в плодах и ягодах преобладаютсвободные кислоты, в листьях содержатся главным образом связанные кислоты[55]. Именно поэтому на следующем этапе представлялось интересным провестиопределение и разделение суммы органических кислот плодов аронии наотдельные компоненты методом тонкослойной хроматографии.Для качественной идентификации органических кислот в плодах арониииспользовали метод тонкослойной хроматографии на пластинках марки «Sorbifil».68Элюирование проводили в системе: Этилацетат – кислота уксусная – кислотамуравьиная – вода (100:11:11:25). Высота подъема фронта растворителя – 8 см.
Вкачестве стандартных образцов использовали ГСО щавелевой, аскорбиновой,лимонной кислот. Исследуемое водное извлечение из сырья наносили на пластинув количестве 20 мкл. Детектирующим реагентом служил спиртовой растворбромкрезолового зеленого 0,2% [95,97]. Пластинки высушивали в сушильномшкафу до исчезновения запаха растворителя. При этом органические кислотыпроявлялись в виде пятен желтого цвета на синем фоне пластинки. Общий видполученной хроматограмы представлен на рисунке 13:№ п/п1Таблица 7. Элюирующие системыСостав элюентан-бутанол – кислота уксусная ледяная – водаПолярность5,72(5:0,5:2)2н-бутанол – кислота уксусная ледяная – вода (4:1:5)7,263н-бутанол – кислота муравьиная (3:1)4,434н-бутанол – кислота муравьиная – вода (250:25:297)7,255Этилацетат – кислота муравьиная (4:1)4,726Этилацетат – кислота муравьиная - вода (3:1:1)5,887Этилацетат – кислота уксусная – кислота5,62муравьиная – вода (100:11:11:25)8Гексан – диэтиловый эфир (8:2)0,349Хлороформ – спирт этиловый (9:1)4,1269Рис.13.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
