Диссертация (1141299), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Встремлении получить более точную характеристику антоцианидинов и ихгликозидов начали превращать эти соединения в летучие производные путемреакциитриметилхлорсиланаигексаметилдисилазана.Силанизированныесоединения могут быть использованы с помощью газовой хроматографии или всочетании с масс-спектрометрией [7,27].Мeтoд рекомендуется для получения препаратов и для идентификации.Недостаткамиегосчитаютсянебольшаяпроизводительностьгазохроматографической колонки и возможность разрушения антоцианов привысоких температурах (210-250 °С), которые применяются для приведениясиланизированных антоцианов в летучее состояние.1.7.4.
Масс-спектрометрия45После гидролиза, охлажденную смесь антоцианов подкисляют солянойкислотой до рН=3 и экстрагируют этилацетатом. После отгонки этилацетатаостаток анализируют на газовом хроматографе с масс-спектром (рис. 8).Рис. 8. Масс-спектры продуктов гидролиза антоцианов1.7.5.Высокоэффективная жидкостная хроматографияВ настоящее время исследование антоциановых пигментов методом ВЭЖХявляется наиболее популярным. Наиболее часто применяемыми сорбентамиявляются : Сепарон SGХ С18, Силасорб С 18, Диасфер-110-С18 и др.
Дляприготовления элюэнтов используют ацетонитрил и воду, также к этой смесивозможно добавление муравьиной кислоты или кислоты уксусной. Приувеличениисодержанияацетонитрилавподвижныхфазахудерживаниеантоцианов с двумя углеводными радикалами уменьшается быстрее, чеммоногликозидов. При увеличении содержания ацетонитрила (более 11%)происходит уменьшение селективности их разделения вплоть до инверсии временудерживания [21,22,,25,26,27,28,29].Основной проблемой при анализе сложных смесей является необходимостьидентификации каждого компанента, требующая либо больших затрат рабочеговремени, либо использования труднодоступного оборудования. Применениестандартных веществ в этих случаях также проблематично по той же причине[25].1.7.6. Спектрофотометрия в УФ-, ИК- и видимой области спектра ванализе антоцианов46Спектрофотометрические методыанализаизбирательном поглощении электромагнитноговеществомислужатдляисследованияоснованы наизлучениястроения,определяемымидентификациииколичественного анализа светопоглощающих соединений.
В основе определений,связанных с измерением поглощения электромагнитного излучения, лежит законБугера-Ламберта-Бера,связывающийоптическуюплотность(функция)сконцентрацией вещества. В наиболее применяемой форме этот закон записываютв виде:А= εlс,где А - оптическая плотность; Е - удельный или молярный коэффициентпоглощения; l- длина оптического пути; с - концентрация вещества.Кривая зависимости поглощения (А или Е) от длины волны называетсяспектром поглощения вещества и является его специфической характеристикой.Определение проводят на приборах - спектрофотометрах, позволяющихопределять как окрашенные, так и бесцветные соединения по их избирательномупоглощению.Для анализа окрашенных соединений применяют более простые приборы фотоэлектроколориметры.Природа полос поглощения в видимой и ультрафиолетовой областях связана сразличными электронными переходами в поглощающих молекулах и ионах(электронные спектры поглощения).Современная аппаратура позволяет получить УФ-спектры в области 190-380нм, видимые – от 380 до 780 нм [9].В качестве растворителя для определения подлинности и количественногосодержания чаще использую подкисленный метанол.
Максимумы поглощенияпри этом растворителе в ультрафиолетовой области около 275 нм, а в видимой –между 465 и 550 нм, в зависимости от вида антоциана [9].Инфракрасная спектроскопия использована для подтверждения метильных игидроксильных групп. Абсорбционная полоса ацильных групп ацилированных47антоцианов очень характерна. Поэтому большое значение этот метод имеет дляацилированных антоцианов, особенно для их отличия от неацилированныхантоцианов. Присутствие карбоксильной группы характеризуется абсорбционныммаксимумом.Спектры шести основных антоцианидинов исследованы в области от 4000 до700 см-1, при этом использовались бромид калия.
Характерные пики получаются вобласти от 2000 до 1380 см-1. Главная полоска при 1637 см-1 вызвана двойнойсвязью кислородного цикла, который сопряжен с бензольным ядром. Некоторыеполоски в этом диапазоне характерны для бензольного ядра.
У всех антоциановдва абсорбционных максимума - около 1580 см-1 и 1520 см-1, которые имеютбольшую или среднюю интенсивность. Абсорбция метильных групп пеонидинапроисходит при 1464 см-1, петунидина - при 1460 см-1 и мальвидина - при 1464 см1. При некоторых исследованиях не установлена полоска, относящаяся кметильной группе. Абсорбция, полученная вне посредственной инфракраснойобласти, вызвана валентным вибрированием связи С-С в бензольном ядре.В области 1650 см-1 у всех антоцианов есть полоска (минимум), обусловленнаядвойнойсвязьюбензольногоядра.Ацилированныеантоцианыимеютхарактерный для этих соединений минимум при 1620 см-1Ацилированные антоцианы легко отличаются в инфракрасном спектре отнеацилированных по абсорбции валентных вибраций эфирной карбоксильнойгруппы.
Например, полоска находится при 1720 см -1 при ацилировании кофейнойкислотой, при 1690 см-1 п-кумаровой кислотой.Гликозидирование антоцианидинов приводит к попучению сложных спектров,которые трудно интерпретируются. Спектры пепаргонидин-3,5-дигликозидов посравненню с 3-гликозидами содержат дополнительные пики при 1440 см-1, 1330см-1 и 1271 см-1 [33].Ядерно-магнитная резонансная спектроскопияЯдерно-магнитный резонансный спектр был использован при идентификациимальвидин-3-(-6-н-кумароил)-гликозида,полученногоизвинограда,при48идентификациин-кумароил-глюкозидовиэфировсахаров,полученныхсинтетическим путем, а также для определения места связи этерификацииацилированных антоцианов.
Этот метод использован и для ацилированныхуксусной кислотой антоцианов, а также для измерения химического смещения ихпротонов.1.8 Методы количественного определения антоциановМетоды количественного определения антоцианов представляют интерес приизучении динамики накопления антоцианов при созревании фруктов и овощей, икинетики их разрушения при технологической переработке сырья и храненииготовойпродукции[119].Сэтойточкизрениясозданныеметодыколичественного определения антоцианов можно разделить на две группы:•методы определения антоцианов в свежем сырье;•методы определения антоцианов после переработки сырья и храненияполученного продукта.Эти методы основываются на следующих фактах: антоцианы имеютабсорбционный максимум около 510-550 нм.
Он очень удален от максимумадругих фенольных соединений, причем ближе всего расположен максимумфлавонолов (350-380 нм). Во многих случаях на максимум антоцианов илисоответствующего продукта количественно и позиционно могут влиять другиесоединения, например, хлорофилл; абсорбция антоцианов во многом зависит отрН раствора; антоцианы обесцвечиваются сернистой кислотой; антоцианы быстроразрушаются перекисью водорода; на положение максимума влияют видрастворителя и образование комплексов с некоторыми металлами [61].Определение антоцианов после обесцвечивания растворовПо методам, разработанным на основе этого принципа, берут две параллельныепробы, в одной из которых антоцианы обесцвечиваются диоксидом серы илиразрушаются добавлением пероксида водорода.Определение антоцианов на хроматограмме с помощью денситометра49Согласно этому методу антоцианы разделяются с помощью тонкослойнойхроматографии и снимают денситограммы в проходящем или отраженном свете.Перед тем как помещать хроматограммы в денситометр, их обрабатывают парамисоляной кислоты для перехода антоцианов в ионную форму.Полярографическое определение антоциановУстановлено, что антоцианы необратимо редуцируются на капающем ртутномэлектроде, давая катодные волны, интенсивность полуволны которых зависит отрН раствора.
Число полученных волн в меньшей степени зависит от структуры,чем от концентрации антоцианов. Для растворов, у которых концентрацияантоциана находится в итервале 1*10- 4 – 8*10- 4 М, зависимость междуконцентрацией антоциана и высотой полярографической волны являетсялинейной.Полярографический метод имеет преимущества при изучении комплексовантоцианов с металлами.1.9 Лекарственные препараты из лекарственного растительного сырьяК экстракционным лекарственным средствам растительного происхождения,производство которых сосредоточено на крупных фармацевтических предприятиях, относятся настойки, экстракты, максимально очищенные препараты ипрепараты индивидуальных веществ.
Основной стадией их получения являетсяэкстрагирование лекарственного растительного сырья.К лекарственнымпрепаратам аптечного изготовления, имеющим малые сроки хранения, могут бытьотнесены так же настои.1.9.1 НастойНастой — жидкая недозированная лекарственная форма, предназначенная длянаружного и внутреннего применения, представляющая собой водное извлечениеиз мягких частей растений (листьев, травы, цветов и пр.) или водный растворэкстрактов-концентратов [49].50Реже настои приготовляют из плотных частей растений, в этом случаерастительное сырье содержит летучие соединения (эфирные масла) или вещества,разрушающиесяпридлительномнагревании.Настойсодержит,кромебиологически активных веществ, примеси или балластные вещества (сахара,слизи, танин и пр.).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
