Диссертация (1141299), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Результаты ТСХ-анализа органических кислот в водных извлечениях извысушенных плодов Рябины черноплодной:1- извлечение из плодов, заготовленных на территории Воронежской области;2 - извлечение из плодов, заготовленных на территории республики Адыгея; 3 извлечение из плодов, заготовленных на территории Алтайского края; 4 извлечение из плодов, заготовленных на территории Калининградской области; 5– РСО щавелевой кислоты; 6 - РСО лимонной кислоты; 7 – РСО аскорбиновойкислоты;Анализируя данные рисунка 13, можно сделать вывод о том, что составорганическихкислотвизвлеченияхизвысушенныхплодоваронии,заготовленных в различных местах произрастания, несколько отличен.
Так, визвлечении, из плодов, заготовленных на территории Воронежской областиобнаружены 2 зоны, соответствующие по величине Rf ГСО кислоты лимонной,аскорбиновой (Rf= 0,28; 0,56, соответственно). Для остальных образцовнаблюдалось три зоны, соответствующих по величине Rf ГСО щавелевой,лимонной, аскорбиновой кислот.Таким образом, на основании данных проведенного исследования, можносделать вывод о том, что качественный состав флавоноидов и дубильных веществне зависит от места произрастания.
На качественный состав антоциановых70соединений и органических кислот оказывает влияние место произрастание, а,предположительно, тип почв, на котором произрастало растение.ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 31. В результате исследований были подобраны оптимальные условия дляхроматографического разделения антоциановых соединений, дубильных веществи органических кислот высушенных плодов рябины черноплодной.2. МетодомТСХпроведеноопределениеантоцианов,флавоноидов,дубильных веществ и органических кислот плодов Aronia melanocarpa,заготовленныхнатерриторииВоронежской,Калининградскойобласти,республики Адыгея и Алтайского края.3.
Проведена идентификация ряда индивидуальных веществ исследуемыхклассов БАВ аронии.4. Установлена взаимосвязь качественного состава органических кислот иантоциановых соединений плодов рябины черноплодной от места произрастания,а, предположительно, от типа почвы и климатических условий.5. ВрезультатепроведенногоисследованияметодомВЭЖХбылиидентифицированы основные и минорные антоцианины в плодах рябинычерноплодной сортов «Викинг», «Алтайская крупноплодная», «Вениса» и«Мичуринская».6. Показано,принадлежностичтоплодыимеютрябиныодинаковыйчерноплоднойпрофильразличнойантоцианинов.сортовойОсновнымкомпонентом антоцианов плодов аронии всех сортов является цианидин-3галактозид (от 60,6 до 71,4% от суммы антоцианинов).71ГЛАВА 4.
РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ КОЛИЧЕСТВЕННОГООПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ВРАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ ARONIA MELANOCARPA4.1. Определение суммы антоциановых соединений в плодах Рябинычерноплодной4.1.1. Подбор оптимальных условий извлечения антоцианов израстительного сырьяПри изучении литературы нами не обнаружены данные по количественномуанализуантоциановчерноплодной.высушенныхДляивысушенныхколичественногосвежесобранныхисвежесобранныхопределенияплодахплодовсуммыаронииАронииантоциановмывиспользовалиспектрофотометрический метод. Данный метод ГФ XI (ГФ XIII) изданиярекомендует для количественного определения антоцианов цветков василька,(пересчет ведется на цианидин-3,5-диглюкозид).Для наиболее точного определения количества антоцианов вплодахнеобходимо установить условия для полного их извлечения из сырья для чегоизучали влияние таких факторов, как измельченность сырья, температура,продолжительность экстракции и соотношение сырье-экстрагент.На первом этапе работы были проведены исследования по подборуоптимального экстрагента для свежих и высушенных плодов.
В качествеэкстрагентов были использованы вода, водно-спиртовые смеси с различнойконцентрацией (40%, 60%, 70%, 95%), а также водно-спиртовые смеси тех жеконцентраций с добавкой кислоты хлороводородной до содержания 1%, поданнымлитературы,позволяющейстабилизироватьокраскуантоцианов.Содержание антоцианов в извлечении определяли спектрофотометрически по72величине оптической плотности в максимуме их поглощения в диапазоне = 510540 нм.Около 1 г (т.н.) измельченного и высушенного сырья помещали в коническуюколбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляли 50 мл экстрагента.
Навескусвежего сырья отбирали из гомогенизированной массы, полученной приизмельчении свежих плодов в мельнице – «волчке». Колбу присоединяли кобратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане 90 минут. Затемколбу охлаждали до комнатной температуры, извлечение фильтровали черезбумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50мл.
После соответствующихразведений (для высушенного сырья 1:15; для свежего – 1:50) пробуанализировали на спектрофотометре «Hitachi U-1900». О количестве антоцианов,перешедших из сырья в извлечение, судили по величине оптической плотности вхарактерном для антоцианов максимуме поглощения [90,91]. Результатыопределений представлены в таблице 8:Таблица 8. Оптическая плотность извлечений из плодов аронии, полученных сприменением различных экстрагентовКонцентрацияэтанола, %ОптическаяОптическая плотностьплотность извлечения извлечения из свежегоиз высушенногосырья**сырья*0.680.43400.430.35600.350.31700.160.21950.510.16Вода0.862.1040+1%НСI0.832.0960+1%НСI0.842.1070+1%НСI0.172.1195+1%НСI0.862.12Вода+1%НСIПеред спектрофотометрированием пробу разбавляли:* - в 15 раз; ** - в 50 раз.73На основании результатов данного этапа исследования было установлено, чтоэкстрагирующая способность нейтральных спирто-водных смесей снижается сувеличением концентрации спирта в экстрагенте.
Закономерность сохраняетсяпри переходе от высушенного к свежему сырью, несмотря на существенныеотличия в механизме извлечения, связанные со структурой измельченногорастительного материала. Максимальной извлекающей способностью срединейтральных экстрагентов и для свежего, и для высушенного растительногосырья обладает спирт этиловый с концентрацией 40% [94,122].Извлечение не подкисленной водой достаточно эффективно для высушенногосырья, но наименее эффективно – для свежего.При одинаковых условиях экстракции одним и тем же нейтральнымэкстрагентом из свежего сырья извлекается примерно в 2 – 3 раза большеантоцианов, чем из высушенного.При экстрагировании антоцианов из сырья подкисленными экстрагентамиможноотметитьконцентрацииотсутствиеспиртавзависимостиэкстрагентеэффективности(исключениемизвлеченияявляетсяотрезультат,полученный при экстракции 95%-ным подкисленным этанолом из высушенногосырья).
Можно предположить, что на извлечение антоцианов в большей степенивлияет кислотное составляющее экстрагента. Высказанное предположениеподтверждается данными по извлечению антоцианов из сырья подкисленнойводой.Надо отметить, что и в случае подкисленных экстрагентов из свежего сырьяизвлекается антоцианов значительно (в 8-10 раз) больше, чем из высушенного.Подобные отличия могут быть связаны с разным механизмом извлеченияантоцианов из сырья.
Из высушенного измельченного сырья они извлекаются засчет десорбции и диализа через клеточные мембраны; из свежего – пооблегченному механизму - за счет вымывания из разрушенных при измельченииклеток.74В следующей серии экспериментов была исследована эта зависимость влияниестепени измельчения высушенного растительного сырья на процесс извлечения изнего антоцианов.В работе использовали три различных фракции высушенных измельченныхплодов аронии с размером частиц0.1 – 0.25 мм; 0.25 – 0.5 мм и 0.5 – 1.0 мм.Результаты извлечения из них антоцианов представлены в табл 9:Таблица 9.
Зависимость оптической плотности извлечений из плодов аронии отстепени измельченности растительного сырьяФракцияизмельченныхвысушенных плодоваронии, ммОптическая плотность извлеченияЭтанол 40%*0.5-1.00.680.430.2-0.50.520.840.1-0.20.530.98Этанол 40%подкисленный**Перед спектрофотометрированием пробу разбавляли:* - в 15 раз; ** - в 50 раз.На основании данных таблицы можно сделать вывод о том, что оптимальнойстепенью измельчения при использовании нейтрального этанола являетсяфракция 0.5-1.0 мм. Дальнейшее измельчение нецелесообразно.В случае использования подкисленного экстрагента с уменьшением размерачастиц сырья степень извлечения возрастает.
Оптимальный результат получен дляфракции 0.1-0.2 мм.На следующем этапе было подобрано оптимальное время экстрагирования 40 %этанолом для высушенного и свежего сырья Аронии черноплодной. Анализпроводили с использованием следующих временных интервалов: 5мин., 10мин.,30мин., 60мин., 90мин. Результаты исследования представлены на рис.14, покоторымможносделатьвыводотом,чтооптимальнымвременемэкстрагирования в случае высушенного и свежего сырья является время 60 мин.75Рис14.
Изменение оптической плотности 40% спиртовых извлечений из плодоваронии в зависимости от времени экстрагирования антоцианов из высушенного исвежего сырья.Наоснованиивыбранныхпараметровэкстрагированияустанавливалиоптимальное соотношение сырье - экстрагент при проведении извлечения.Результатыопределенияантоциановыхсоединенийвизвлеченияхизвысушенного и свежего сырья представлены на рис. 15:Рис.15. Результаты определения оптической плотности 40% спиртовыхизвлечений из высушенного и свежего сырья при различном соотношении сырье– экстрагент.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
