Диссертация (1141249), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Это позволяет применять в качестве контроля испытуемыйраствор без реактива и тем самым исключить влияние окрашенныхсопутствующих веществ, а, следовательно, исключить стадию очистки отэкстрактивныхвеществ.Дляполученияболеевоспроизводимыхрезультатов реакцию комплексообразования целесообразно проводить всреде 40 – 60 % этанола [36, 111].2.2.4. Экстрактивные вещества.Содержание экстрактивных веществ в сырье определяли последующей методике: около 1 г (точная навеска) измельченного сырья,проходящего сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещают вконическую колбу вместимостью 200-250 мл, прибавляют 50 мл 70 %этанола, колбу закрывают пробкой, взвешивают (с погрешностью + 0,01 г)и оставляют на 1 час.
Затем колбу соединяют с обратным холодильником,48нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 2 часов. Послеохлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой,взвешивают и потерю в массе восполняют растворителем. Содержимоеколбы тщательно взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтрв сухую колбу вместимостью 150-200 мл, 25 мл фильтрата пипеткойпереносят в предварительно высушенную при температуре 100-1050 С допостоянной массы, затем охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на днекоторого находится безводный хлорид кальция и немедленно взвешивают[21].
Содержание экстрактивных веществ в процентах (Х) в пересчете наабсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:m x 50 x 100 x 100Х= _________________ , гдеm1 x 20 x (100 – W)m – масса сухого остатка, в г;m1 – масса навески, в г;50 – объем колбы, мл;2.2.5. Количественное определение сапониновспектрофотометрическим методом.Количественное определение содержания сапонинов проводили пометодике,предложеннойД.А.Борисовойдлясырьяпервоцветалекарственного [80].2.2.6. Определение влажности сырья.Определение влажности в объектах исследования проводили всоответствии с методикой ОФС ГФ XI «Определение влажностилекарственного растительного сырья» [21].49Методика. Аналитическую пробу сырья измельчают до размерачастиц около 10 мм, перемешивают и берут навеску массой около 3 г,взвешеннуюспогрешностью+г.0,01Навескупомещаютвпредварительно высушенный и взвешенный бюкс и помещают в нагретыйдо 100-1050 С сушильный шкаф.
Первое взвешивание проводят через 2часа. Высушивание осуществляют до постоянной массы. Постоянная массасчитается достигнутой, если разница между двумя последующимивзвешиваниями после 30 мин высушивания и 30 мин охлаждения вэксикаторе не превышает 0,01 г.Влажность сырья (Х) в % рассчитывают по формуле:Х = (m – m1) x 100 , гдеmm – масса сырья до высушивания, гm1 – масса сырья после высушивания, г2.2.7. Определение золы общей.Определениезолывобъектахисследованияпроводиливсоответствии с методикой ОФС ГФ ХI «Определение золы» [21].Методика. Около 3-5 г измельченного лекарственного растительногосырья (точная навеска) помещают в предварительно прокаленный и точновзвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, равномернораспределяя вещество по дну тигля.
Затем тигель осторожно нагревают,давая сначала веществу сгореть или улетучиться при возможно болеенизкой температуре. Сжигание оставшихся частиц угля надо тоже вестипри возможно более низкой температуре; после того, как уголь сгоритпочти полностью, увеличивают пламя.50При неполном сгорании частиц угля остаток охлаждают, смачиваютводой или насыщенным раствором аммония нитрата, выпаривают наводяной бане и остаток прокаливают.Прокаливание ведут при слабом красном калении (около 5000 С) допостоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенкамитигля.
По окончании прокаливания охлаждают в эксикаторе и взвешивают.Содержание общей золы в % (Х) в абсолютно сухом сырьевычисляют по формуле:Х = m1 x 100 x 100 , гдеm2 x (100 – W)m1 – масса золы, гm2 – масса сырья, гW – потеря в массе при высушивании сырья, %2.2.8. Определение золы, нерастворимой в 10 %хлористоводородной кислоте.Определение золы, нерастворимой в 10 % хлористоводороднойкислоте в объектах исследования проводили в соответствии с методикойОФС ГФ ХI изд. «Определение золы, нерастворимой в 10 %хлористоводородной кислоте» [21].К остатку в тигле, полученному после прокаливания растительногосырья, прибавляют 15 мл 10 % раствор кислоты хлористоводородной,тигель накрывают часовым стеклом и нагревают 10 мин на кипящейводяной бане.
К содержимому тигля прибавляют 5 мл горячей воды,обмывая часовое стекло. Жидкость фильтруют черезбеззольный фильтр,перенося на него остаток с помощью горячей воды. Фильтр с остаткомпромывают горячей водой до отрицательной реакции на хлориды в51промывной воде. Фильтр переносят в тот же тигель, высушивают,сжигают, прокаливают, как указано выше и взвешивают.Содержание общей золы в % (Х) в абсолютно сухом сырьевычисляют по формуле:Х = (m1 – m) x 100 x 100 , гдеm2 x (100 – W)m1 – масса золы, гm2 – масса сырья, гm – масса золы фильтра (если золы последнего более 0,0002 г), гW – потеря в массе при высушивании сырья, %.2.2.9.
Статистическая обработка.Статистическуюобработкурезультатовпроводилипутемвычисления средних арифметических изучаемых показателей и ихстандартных отклонений. Существенность различий средних величиноценивали по критериям Стьюдента и Вилкоксона – Манна-Уитни приР<0,05 [21].2.2.10.
Морфолого – анатомическое исследование.Исследованиеморфологическихианатомо-диагностическихпризнаков осуществлялось в соответствии с требованиями общихфармакопейных статей: «Трава» и «Техника микроскопического имикрохимического исследования лекарственного растительного сырья».Из сырья готовили продольные и поперечные срезы.
Проводилисьгистохимические реакции с раствором флороглюцина и соляной кислотой,раствором Судана III и раствором Люголя. Измерения проводились с52помощью окуляр – микрометра. Исследования и фотоснимки выполнялисьна микроскопах «Ломо Микмед – 1» (окуляр 7 x и объективы: 3,7 x, 10 x,20 x, 40 x) и «Микмед-6» (окуляр 10 x и объективы: 4 x, 10 x, 40 x, 100 x) спомощью цифровой фотокамеры Canon Digital IXUS 80 IS; обработкаснимков проводилась с использованием программы Microsoft Office PictureManager [54, 58].53ГЛАВА3.ИССЛЕДОВАНИЕДИАГНОСТИЧЕСКИХАНАТОМОПРИЗНАКОВТРАВЫ ЗВЕЗДЧАТКИ СРЕДНЕЙ.3.1.
Изучение анатомического строения травы звездчаткисредней.В соответствии с приложением к приказу Минздравмедпрома России№ 335 от 29.11.1995 г. (Приложение 2) звездчатка средняя входит впереченьгомеопатическихлекарственныхсредств,разрешенных кприменению в России. Однако в России отсутствует нормативнаядокументация на сырье звездчатки средней. Для создания нормативнойдокументации на траву звездчатки средней необходимо исследоватьанатомо-диагностические признаки данного растения. В литературеимеются данные о морфолого-анатомическом изучении звездчаткисредней [19]. Однако имеющиеся сведения мы не могли использовать дляразработки фармакопейной статьи, так как в представленной литературеотсутствуют качественные микрофотографии, анатомо-диагностическиепризнаки разработаны недостаточно для травы звездчатки средней.В этой связи, целью нашего исследования на данном этапе было:изучение анатомо-диагностических признаков травы звездчатки средней(листьев, стеблей, цветков и семян).
Для включения результатовисследования в нормативную документацию на данное сырье.Для микроскопического исследования небольшие кусочки стебляпомещают в холодную воду и выдерживают около суток, затем помещаютв смесь этанол-глицерин (1:1) на 3 суток. Размоченные объектывыравнивают скальпелем так, чтобы они имели строго поперечноесечение. Затем делают срезы постоянных микропрепаратов [54, 63].54Изготовление срезов микропрепаратов. Поверхность кусковвыравнивают и приступают к срезу бритвой, смачивая поверхность среза илезвие бритвы водой и глицерином.
Первый срез отбрасывают и затемготовят несколько тонких срезов, из которых для препарата выбираютлучшее с помощью микроскопа под малым увеличением.Для получения постоянных микропрепаратов используют способзаключения в глицерин - желатиновую смесь, который проводятследующим образом: срезы помещают на предметное стекло в 1-2 каплихлорал гидрата для просветления, накрывают покровным стеклом инагревают на горелке. После этого срезы переносят в смесь вода-глицерин(2:1).Приготовление глицерин-желатоновой смеси. Отвешивают 1 гжелатина, 6 мл воды и 7 мл глицерина.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
