Диссертация (1141249), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Или основаны навосстановлении Fe+(III) до Fe+(II) [144].В литературе можно встретить применение потенциометрическоготитрования [41, 108, 130, 138].Компаманцев В.А. с соавторами использует в качестве титрантакомплекс Fe+(III) с 1,10 – фенантролином, который отличается высокойстабильностью. Описанный в работе метод позволяет проводить анализ вмутных и окрашенных растворах [41].Был разработан метод потенциометрического титрования дляопределения кислоты аскорбиновой в таблетках.
Титрант - растворсульфата Tl (3+). Конец титрования определяют, используя платиновыйиндикатор. В качестве электрода сравнения - насыщенный каломельныйэлектрод. Коэффициент вариации при определении ≤ 0,33 %. Вмногокомпонентных глазных каплях и порошках кислоту аскорбиновуюможно определять амперометрическим методом [70]. Этот метод основаннаспособностикислотыаскорбиновойдегидроаскорбиновой кислоты [94].окислятьсянаанодедо41Для определения кислоты аскорбиновой также используют методполярографии [109].
Анализ водных растворов Успенская Н.М. проводилана фоне буферной смеси Бриттона – Робинсона (катализатор фона – Li)[108].Более современным способом определения кислоты аскорбиновойявляется ВЭЖХ [32,55,71,134,139,140]Определение кислоты аскорбиновой в биологических жидкостяхмлекопитающих методом ВЭЖХ с электрохимическим детектированиемпредставленывработеIgbalZ.[139].Диапазонопределяемыхконцентраций 0,5 – 5,0 мкг/мл, воспроизводимость – 1,49 %.Использование метода ВЭЖХ в контроле качества кислотыаскорбиновой можно найти в работе Никуличева Д.Б.
и др. [32].Существует еще биологический метод количественного анализакислоты аскорбиновой. В практике применяют метод профилактическихдоз или метод лечебных доз [71]. Основным его недостатком являетсядлительность. Помимо этого он требует больших финансовых затрат, таккак в течение продолжительного времени нужно содержать подопытныхживотных и обслуживающий персонал.Выводы к I главе.1. Обзор литературных источников показал, что трава Звездчаткисредней является перспективным лекарственным растительным средством,широко используемым в народной медицине. Наличие в литературесведений о целебных свойствах Звездчатки средней позволяет считатьцелесообразным исследование данного вида сырья.2. Согласно данным литературы химический состав Звездчаткисредней изучен недостаточно.
Методы анализа основных действующихвеществ изучаемого нами сырья в доступной литературе описанынедостаточно,чтовзначительнойстепениосложняетоценку42доброкачественностиизучаемоговида сырьяивведением еговофицинальную медицинскую практику.3. Из обзора литературы можно сделать вывод, что для определениякислоты аскорбиновой существуют разнообразные химические, физикохимическиеибиологическиеметодыанализа.Некоторыетитриметрические методы определения обладают рядом недостатков.Спектрофотометрический метод не может быть использован из-заокрашенности исследуемых растворов.
Некоторые методы сложны висполнении и недостаточно чувствительны.4. На основании изложенного выше следует, что изучениехимическогосоставаиразработкаметодиканализаосновныхдействующих веществ травы Звездчатки средней с использованиемсовременных методов анализа с последующим внедрением их внормативную документацию является актуальной проблемой.43ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1 Объекты исследованияОбъектами исследования служили образцы сырья (трава звездчаткисредней) и приготовленные настойки гомеопатические матричныеизсвежего и высушенного сырья из травы звездчатки средней.2.2. Методы исследования2.2.1.
Анализ аминокислотного составаКачественное определение аминокислот в водных извлечениях изсырья осуществляли с помощью нингидриновой реакции [68]. Равныеобъемы исследуемых извлечений смешивали со свежеприготовленным0,1% водным или спиртовым раствором нингидрина, осторожно нагревалии при охлаждении наблюдали появление сине – фиолетового окрашивания,что свидетельствует о наличии в извлечении аминокислот.Качественный состав аминокислот устанавливали с помощью методахроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ). Хроматографированиепроводили на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей: н-бутанол– уксусная кислота – вода (4:1:2). Зоны адсорбции выявляли с помощьюнингидринового реактива [68].Качественный состав и количественное содержание аминокислотисследовали на аминокислотном анализаторе в стандартных условиях.Аминокислотный анализ водорастворимых фракций проводили нааминокислотном анализаторе фирмы «Хитачи» модель 835, на стальнойколонке (04 х 15 см), заполненной катионообменной смолой марки 2619(Hitachi Custom Ion-Exchange Resin).
Разделение аминокислот проводилосьв трех буферных системах натрий-цитратных буферных растворов: 0,18 Н44рН 3,25; 0,3 Н рН 3,9; 1,6 Н рН 4,75. Нингидриновый реактив готовили сиспользованием метилового эфира этиленгликоля. Цитратные буферныерастворы подавали в колонку по стандартной программе со скоростью 32мл/час.
Нингидриновый реактив подавали со скоростью 20 мл/час. Послевыходаизаналитическойколонкиразделенныеаминокислотысмешивались с нингидриновым реактивом в смесительном блоке всоотношении 2:1. Реакция аминокислот с нингидриновым реактивомпроходила за 4 мин при 1000С в реакционной бане. Колориметрическоеопределение окрашенных комплексов, образующихся в результате реакциис нингидрином, проводится непрерывно и одновременно при двух длинахволн. Первичные амины образуют пурпурную окраску, измеряемую придлине волны 570 нм, а вторичные (пролин и оксипролин) образуютсоединения желтой окраски, измерение которых проводят при длиневолны 440 нм [81].2.2.2. Анализ углеводного составаКачественноеопределениесвязанныхсахаровпроводиливочищенном водном извлечении реакцией Бертрана.
Смешивали равноеколичество извлечения и жидкости Фелинга и нагревали на кипящейводяной бане. В извлечении выпал красно – оранжевый осадок меди (I)оксид, что говорит о присутствии в извлечении свободных сахаров.Определение связанных сахаров проводили тоже реакцией Бертрана.После проведения гидролиза кислотой серной разведенной на кипящейводяной бане, реакция дает положительный результат.Присутствие углеводов было доказано с помощью хроматографии втонком слое сорбента. Анализ проводили на пластинках «Сорбфил» всистемерастворителей:изопропанол–вода(4:1).Вкачестве45детектирующихреагентовиспользовали:антроновыйреактив,резорциновый реактив и дифениламиновый реактив.Для качественного и количественного определения свободныхуглеводов использовали метод прямофазной ВЭЖХ при следующихусловиях: Luna 100 – 5 NH2 4,6 х 250 mm (5мм) или аналогичной сподвижной фазой: ацетонитрил – вода (70:30) при скорости потока1 мл/мин, при комнатной температуре с рефрактометрической детекцией.Сбор и обработка хроматограмм осуществлялась с помощью программы«Эко/хром».
Отношение пиков и расчет концентраций проводили повнешнему стандарту, содержащему смесь трех анализируемых углеводов(глюкоза, фруктоза и сахароза) и глицерина в концентрации 10 г/л.Для анализа связанных углеводов водное извлечение гидролизовали1 М раствором хлористоводородной кислоты при 100 0С в течение 2,5часов.Содержаниесвязанныхуглеводовопределялиметодомкапиллярного электрофореза, используя прибор Applied Biosistem 273 T.Обработка электрофореграмм осуществлялась с помощью той жепрограммы что и свободных сахаров. Отношение пиков и расчетконцентраций по внутреннему (глюкозамин) и внешнему (смеси 5анализируемых углеводов) стандарту в концентрации 1 г/л [86].2.2.3.
Методы анализа флавоноидов.БАВ флавоноиды в растительном сырье обнаруживают в водных илиспиртовых извлечениях. Наиболее часто для установления наличияфлавоноидов используют такие качественные реакции:- цианидиновая проба: к исследуемому раствору прибавляютхлористоводородную кислоту концентрированную и магниевую илицинковую пыль).46- к исследуемому раствору прибавляют 2 % раствор алюминияхлорида. Появляется желто-коричневое окрашивание.- к раствору прибавляют 10 % раствор натрия гидроксида.Появляется желто-коричневое окрашивание [111].Дляобнаруженияфлавоноидовврастенияхиспользуютхроматографию в тонком слое сорбента. Наиболее часто используютпластинки «Сорбфил» и систему растворителей: н-бутанол – уксуснаякислота – вода (4:1:2). В качестве хромогенных реагентов применяют:пары аммиака, 10 % спиртовой раствор щелочи, 2-5 % раствор алюминияхлорида, диазотированную сульфаниловую кислоту [89].Исследование химического состава флавоноидных соединенийпроводили методами ВЭЖХ/МС.Прижидкостнаяанализеизвлеченийхроматографияиспользована/МС.Проводятультраэффективнаяанализметодомультраэффективной жидкостной хроматографии /МС на хроматографеWaters Acquility с тандемным квадрупольным МС – детектором TQD(Waters).
Подвижная фаза А (ПФ А). Смесь: вода – ацетонитрил (95:5:0,1) смуравьиной кислотой.Подвижная фаза В (ПФ В). Ацетонитрил с муравьиной кислотой(100:0,1). Хроматографируют испытуемый раствор 2, приготовленный какуказано выше, в следующих условиях:- объем пробы 1 мкл;- колонка 0,21 х 5,0 см Acguility UPLC BEH C18 (1,7 мкм);- температура колонки 350 С;- скорость потока 0,5 мл/мин;- градиентный режим хроматографирования формируется путемсмешивания подвижных фаз А и В по следующей схеме:47Время, минПФ А,%ПФ В,%09553,060403,1955- МС детекция в режиме позитивных ионов;- параметры детектора: напряжение на капилляре – 3 кВ; напряжениена конусе – 55 В; температура капилляра 4500 С; температура источника1200 С; скорость потока осушающего газа 800 л/ч, скорость потока газа вконусе 50 л/ч и сканирование в диапазоне масс от 100 до 1000 ед [57].Дляколичественногоопределенияспектрофотоколориметрическийкомплексообразованиясметодхлоридомфлавоноидовприменяютпослепроведенияреакцииалюминия,которыйвызываетбатохромный сдвиг 1 полосы поглощения флавоноидов с 330 – 350 нм до390 – 410 нм.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
