Диссертация (1141249), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Определение сапонинов в сырье и фитопрепаратах.Излитературыизвестно,чтообщиххимическихметодовопределения сапонинов не существует, т.к. структура сапонинов оченьсложна и разнообразна. Поэтому для обнаружения сапонинов врастительном сырье пользуются реакциями, которые можно разделить натри группы (глава 1): 1) реакции основанные на физических свойствахсапонинов; 2) реакции, основанные на химических свойствах сапонинов;3) реакции, основанные на биологических свойствах сапонинов.К физическим свойствам сапонинов относится образование пены прирастворении их в воде и взбалтывании.
Ко второй группе качественныхреакций относятся реакции осаждения сапонинов и цветные реакции. Изводных растворов сапонины осаждаются гидроксидом бария и магния,солями меди и ацетатом свинца. Стероидные сапонины дают реакциюЛибермана-Бурхарда.Большинствосапониноввызываютгемолизэритроцитов крови [89, 111].Для количественного определения аларозидов в корнях аралиипредложен метод ТСХ на пластинках с закрепленным слоем силикагеля35КСК в системе растворителей: безводный хлороформ-метанол-вода(61:32:7). Выявление зон адсорбции осуществляли 20 % раствором сернойкислоты [89].Для подтверждения наличия тритерпеновых сапонинов использованметод ТСХ на пластинках Kiselgel 40 F254 фирмы Merk Darmastardt всистеме растворителей: этилацетат-метанол-диэтиламин (70:20:1).
Зоныадсорбции выявляли раствором ванилина [113].РомановаЗ.Р.использовалааналогичнуюметодикудляидентификациитритерпеновых сапонинов в первоцвете весеннем [91].Для идентификации тритерпеновых сапонинов в корнях первоцветавесеннего в Британской и Европейской фармакопеях включен метод ТСХна пластинках Kiselgel TLC F2554R в системе растворителей: уксуснаякислота-вода-н-бутанол (10:40:50).
Зоны адсорбции выявляли УФ – λ = 254[124, 127, 145].Количественноеопределениетритерпеновыхосуществляюттитриметрическими,фотометрическимиисапониновгравиметрическими,спектрофотометрическимиметодами.Титриметрическое определение оралозидов в корнях аралии манчжурской,глицерризиновой кислоты в корнях солодки описаны в литературе [111].Реакцию тритерпеновых сапонинов с концентрированной сернойкислотойиспользовалидляспектрофотометрическогоопределенияолеоноловой кислоты в препарате «Сепарал» [31].Для определения сапонинов в корневищах аралии манчжурской,выращеннойвБелгородскойобласти,былпримененспектрофотометрический метод по реакции с концентрированной сернойкислотой.
Стандарт – олеоноловая кислота [93].Дляопределенияурсоловойкислотыиспользованметодспектрофотоколориметрии. Он основан на реакции с кислотой сернойконцентрированной [98].36Аналогичнаяметодикабылаиспользованадляопределениятритерпеновых сапонинов в первоцвете весеннем и крупночашечном [91].Определениесодержаниясапониноввсырьепервоцветалекарственного проводили спектрофотометрическим методом по реакции скислотой серной концентрированной. Стандарт – эсцин.
Идентификациюсапонинов в цветках, листьях, траве и корневищах осуществляли методомТСХ на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей: н-бутанол –уксусная кислота ледяная – вода (50:40:10). Детектирующий раствор: 10 %раствор серной кислоты в 40 % этаноле [80].Подобным образом проводилось исследование количественногосодержания тритерпеновых сапонинов в траве звездчатки средней(хромато-спектрометрический метод) [59].Информацию о наличии стероидных гликозидов в растительномсырье в растительных экстрактах возможно получить методом ТСХ. Вкачестве детектирующих реагентов для сапонинов использован 1 %раствор ванилина в концентрированной серной кислоте [1, 131].Специфичным реагентом для идентификации фуростаноловыхгликозидов является реактив Эрлиха: п-диметил-аминобензальдегид вкислоте хлористоводородной концентрированной [99].Для анализа стероидных гликозидов и их сапонинов используютметод ВЭЖХ.
ИК-спектроскопию используют для установления наличиястероидных сапонинов в растительном сырье.Стероидные гликозиды в растительном сырье обнаруживаютсяразличнымиметодами.Наиболеепростымметодомкачественногоопределения сапонинов является метод определения гемолитическогоиндекса [1, 101].1.3.6 Методы определения аскорбиновой кислоты.37Описанные в литературе методы количественного определениякислоты аскорбиновой можно разделить на три группы: объемные,физико-химические и биологические [16, 64, 66, 90, 109, 116, 121, 136,155].В основе объемных методов лежит восстановление того или иногоокислителя за счет эквивалентного окисления кислоты аскорбиновой.Следует остановиться в первую очередь на методе Тильманса [6,57,149].Тильманс предложил на содержащую витамин С вытяжку действоватьраствором 2,6 – дихлорфенолиндофенолятом натрия.
Данный методположен в основу количественного определения кислоты аскорбиновой вплодах шиповника в статье ГФ ХI издания [21]. Основным недостаткомметодаТильмансаявляетсято,чтовещества,содержащиесульфгидрильную группу глютатиона и цистеина, танины и некоторыедругие также восстанавливают 2,6 - дихлориндофенолят натрия, поэтомурезультаты могут быть завышены. С другой стороны, если в испытуемомобъекте часть витамина С содержится в виде дегидроаскорбиновойкислоты,котораябиологическиактивна,торезультатполучитсязаниженный, так как дегидроаскорбиновая кислота не будет титроватьсяреактивом Тильманса. К недостаткам данного метода еще нужно отнестинеустойчивостьреактиваТильмансаиокраски,появляющейсявоттитрованном растворе.Помимо метода Тильманса в литературе описан йодометрическийметод [122, 124, 147].
Он был применен в 1928 году Сцент-Георги приколичественном определении кислоты аскорбиновой [147]. Данный методиспользуется и в нормативно-технической документации [20, 21]. Нойодное титрование тоже имеет недостатки. Йод в кислой средевосстанавливает кроме кислоты аскорбиновой танины, эфирные масла,пектины, жиры и др. Поэтому йодное титрование не может бытьиспользовано для анализа кислоты аскорбиновой в растительном сырье ипрепаратах из него.38Влитературетитрометрическийавторами[148]методопределенияописанразработанныйкислотыимиаскорбиновойвлекарственных препаратах в виде таблеток и инъекций, который основанна окислении аскорбиновой кислоты смесью КВrО3 и КВr в присутствии КIи последующим титрованием продукта реакции 0,1 Н растворомтиосульфата натрия. Точность определения по сравнению со стандартнымсоставляет 105,80 ±1,08 %.В другой статье авторы рассматривают определение кислотыаскорбиновой в готовых лекарственных формах, основанное на прямомвизуальном титровании кислоты аскорбиновой цирийаммонийсульфатом вприсутствии хлоргидрата хлорпромазина в смеси с серной и фосфорнойкислотами в качестве окислительно – восстановительного индикатора.Относительное стандартное отклонение метода ± (0,0111706 – 0,12539).Показанохорошеесовпадениерезультатованализасданнымипотенциометрического титрования [119].Предложенный метод пригоден для анализа капсул, сиропов,таблеток.
При этом окрашиванию не мешает наличие примесей лимонной,винной, борной, янтарной кислот, а также присутствие катионов Сu + (II),Mg+ (II), Zn+ (II). Метод позволяет определять от 1 мг/мл до 50 мг/млконцентрацию кислоты аскорбиновой.Титрометрический метод, предложенный Beltagy A. с соавторами,основан на взаимодействии кислоты аскорбиновой с хлористым йодом ипоследующим оттитровыванием выделившегося йода йодатом калия.Метод может быть использован для определения содержания кислотыаскорбиновойлекарственныхвтаблетках,инъекционныхрастворах.прапаратахминеральныхвеществ,Наличиеввитаминов,консервантов и других вспомогательных веществ не мешает определению.Водный раствор для анализа должен содержать 50 – 150 мг кислотыаскорбиновой [122].39Dwivedi R.K.
с соавторами описывают йодометрический методмикроопределения кислоты аскорбиновой в лекарственных формах сприменением BrCl в качестве окислителя. Выделившийся йод титруютраствором тиосульфата натрия в присутствии крахмала. Точность ± 0,5 %.Данный метод не дает возможности определения кислоты аскорбиновойпри наличии примесей [126].В литературе так же описывается метод титрования йодом вацетатном буфере в присутствии ЭДТК для определения содержаниякислоты аскорбиновой в 15 различных фармацевтических препаратах(«Олиговит» и др.) [137].В научной работе авторы предлагают метод анализа в исходномвеществе и витаминах с использованием фентиазинов в качествеиндикаторов при окислительном определении.
Метод основан наспособности фентиазинов образовывать окрашенные соединения приокислении в кислой среде такими окислителями как Се+(IV), VO3-, Cr2O72-,BrO3-, хлорамин Т. Метод позволяет определять кислоту аскорбиновую вколичестве 1 – 500 мг. Ошибка метода составляет ± 1 %.Использовать хлорамин Т в присутствии подкисленного KI икрахмала; или подкисленного KBr и метилового красного предлагаетVerma Krishna K. c cоавторами [153]. А в другом литературном источнике– в присутствии гексаметилентетрамина в среде ацетон – вода.Содержание кислоты аскорбиновой в этом случае определялось вфармацевтических препаратах и фруктах (апельсинах, лимонах, виноградеи др.) [154].Vaidya S. с соавторами предлагают быстрый и точный методопределения витамина С с метионином, основанный на титрованиирастворов и экстрактов раствором фенилйодоацетатом в присутствиикрахмала – KI, или метилового красного – KBr [152].40Определение кислоты аскорбиновой при наличии производныхпиразолона (антипирина, амидопирина, анальгина) проводят путемтитрования сульфатом Cu в среде NaOA в присутствии роданида аммонияи мурексида.
Относительная погрешность способа не превышает 0,17 %[95,150].Изфизико-химическихфотоколориметрический,методовобычноиспользуютэкстракционно-фотометрический,УФ–спектрофотометрический в сочетании с хроматографией в тонком слоесорбента [32,35,50,92, 123,119,120].Известные методики фотоколориметрического определения кислотыаскорбиновой основаны на реакции окисления-восстановления с 2,6дихлорфенолиндофенолятомнатрияилисжелтымфосфорномолибденовым гетерокомплексом [135,142].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
