Диссертация (1141249), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Флавоноид с молекулярной массой 933.OHO9OHOOHOHOOHOOOHOHHOOHOHMr 595Mr 59573I)4,5,7-тригидрокси-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-Dглюкопиранозил) флавонII)2-(4-гидроксифенил)-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-Dглюкопиранозил)-5,7-дигидрокси-4Н-1-бензопиран-4-онРис. 15. Флавоноид с молекулярной массой 5958OHOHOOHHOOOHOOHHOOHOOOOOHHOHOOHOHMr 757Mr 757I)4',5,7-тригидрокси-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-Dглюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил) флавонII)2-(4-гидроксифенил)-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-Dглюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил)-5,7дигидрокси-4Н-1-бензопиран-4-онРис.
16. Флавоноид с молекулярной массой 757Согласно данным литературы [74] в траве звездчатки среднейсодержится витексин и его изомер сапонаретин. Следовательно, можно74предположить, что при фрагментации ионов пика с временем удерживания1,43 и фрагментации пика с временем удерживания 1,76 в одном случаеполучается флавоноид витексин, а в другом – изомер сапонаретин.В результате проведенных исследований из травы звездчатки среднейвыделен и установлен химический состав 5 флавоноидных соединений:4,5,7-тригидрокси-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил(1→6)-3-О-метил-β-D-глюкопиранозил) флавон; 4,5,7-тригидрокси-8-(β-Dглюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил)флавон;4,5,7–тригидрокси-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-Dглюкопиранозил) флавон; витексин и, предположительно, сапонаретин[57].4.3.Количественноеопределениефлавоноидоввтравезвездчатки средней.В гомеопатической и народной медицине в лечебных целяхиспользуют траву звездчатки средней [26, 67, 74].
В то же время в научноймедицине звездчатку среднюю практически не используют по причинеотсутствиянормативнойдокументации.Разработкеивнедрениюнормативной документации мешает отсутствие полных данных похимическому составу звездчатки. Эти сведения немногочисленны искудны. Так, в одной из работ сообщается, что в траве звездчатки среднейсодержатся тритерпеновые сапонины, витамины С и К, флавоноиды(витексин, сапоницитин и др.), высшие ароматические спирты [74]. Вдругой работе указано, что в траве звездчатки содержатся сапонины,витамины Е и С, каротин, соли калия и хлора [67].
Относительносодержания флавоноидов в литературе имеются немногочисленные ипротиворечивые данные. В одной из работ указано, что звездчаткасодержит флавоноиды [26]; в другой работе [118] при исследовании75лекарственной флоры советского Дальнего Востока в разных видахзвездчатки указано на присутствие флавоноидов без указания ихкачественного состава и количественного содержания. Горина Я.В.,исследуя некоторые виды рода звездчатки, сообщает о следовыхколичествах флавоноидов или об их отсутсвии [19].В связи с противоречивыми данными, были проведены специальныеисследования для установления качественного состава флавоноидов всоставе травы звездчатки средней.
Методом ВЭЖХ впервые выделено 3неизвестных ранее флавоноидных соединения и с помощью МСустановленоих химическое строение:1. 4,5,7-тригидрокси-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил-(1→6)-3-О-метил-β-Dглюкопиранозил) флавон; 2. 4,5,7-тригидрокси-8-(β-D-глюкопиранозил(1→6)-β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил) флавон; 3. 4,5,7 –тригидрокси-8-(β-D-глюкопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозил) флавон.Подтверждено присутствие в звездчатке средней флавоноидоввитексина и сапонеритина, что дало нам возможность установитьколичественное содержание флавоноидов в траве звездчатки средней [57].Учитывая изложенное выше, целью данного исследования было:подобрать условия, разработать методику количественного определенияфлавоноидов в траве звездчатки средней, заготовленной в разных областяхРоссии.
На разных стадиях вегетации и различных органах растения:корнях, стеблях, листьях и цветках с семенами.Объектами исследования служили: трава, стебли, листья, корни,цветки и семена однолетнего или двулетнего растения.Для количественного определения флавоноидов нами примененспектрофотометрическийкомплексообразованияметодсхлоридомпослепроведенияалюминия,которыйреакциивызываетбатохромный сдвиг 1 полосы поглощения флавоноидов с 330-350 нм до390-410 нм. Это позволяет применять в качестве контроля испытуемый76раствор без реактива и тем самым исключить влияние окрашенныхсопутствующих веществ [36].
В качестве стандартного вещества выбранлютеолина-7 гликозида, дифференциальный спектр поглощения которого салюминияхлоридомдифференциальнымвпредлагаемыхспектромпоглощенияусловияхсовпадаетфлавоноидовсзвездчаткисредней.Спектр поглощения продуктов реакции флавоноидов с алюминияхлоридом.122Рис. 17 1 - стандарт раствора лютеолина-7 гликозида2 – флавоноиды, извлеченные из травы звездчатки среднейДля расчета содержания флавоноидов был использован удельныйпоказатель поглощения, взятой из нормативной документации [Полынигорькой настойка ФСП № 003336/01-290411]. Он равен 401.Для установления оптимальных условий экстракции флавоноидовбыли исследованы такие условия как измельченность сырья, типэкстрагента, соотношение сырье-экстрагент, температурный режим, времяи кратностьэкстракции. Полученные результаты представлены в табл.
177Таблица 1Зависимость полноты экстракции флавоноидов из травы звездчаткиот условий экстракции.Условия экстракцииСодержание флавоноидов, %Образец 1Образец 2Образец 3Измельченность сырья70,2170,31150,3250,35930,4100,58820,4600,62010,4550,617ЭкстрагентВода0,1090,217Этанол 25 %0,2110,310Этанол 40 %0,3780,403Этанол 70 %0,4580,591Этанол 95 %0,4710,619Соотношение сырье - экстргент1:300,4370,5901:500,4690,6211:1000,4460,6041:2000,4410,602Время экстракции, мин150,1580,212300,2780,313450,4380,598600,4680,623900,4660,6241200,4630,422Температурный режимБез нагревания0,1500,2110Водяная баня 40 С0,2300,3100Водяная баня 60 С0,4120,5430Водяная баня 80 С0,4410,6210Водяная баня 100 С0,4650,6250,3330,4010,6910,7170,7120,2460,3190,5110,6970,7210,5830,7170,7010,6970,2470,4090,6880,7170,7160,7150,2370,3410,5940,6930,719Из табл.
1 следует, что оптимальными условиями экстракцииявляются: измельченность сырья 2 мм, экстрагент 95 % этанол,соотношение сырье-экстрагент 1:50, температура экстракции 100 0С на78кипящей водяной бане, время экстракции 60 мин при двукратномизвлечении.Полученные результаты были использованы при составленииметодики.Методика. Около 2 г (точная навеска) сырья, измельченного доразмера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм,помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 60 мл95 % этанола, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают накипящей водяной бане в течение 45 минут.
После охлаждения под струейхолодной воды фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбувместимостью 100 мл так, чтобы сырье не попало на фильтр. К шроту вкруглодонную колбу прибавляют 40 мл 95 % этанола и нагревают собратным холодильником на кипящей водяной бане 15 минут.
Извлечениепосле охлаждения фильтруют в ту же мерную колбу через тот же фильтр.Круглодонную колбу и фильтр промывают 10 мл 95 % этанолом и доводятобъем раствора в колбе 95 % этанолом до метки, перемешивают (растворА).В две мерные колбы вместимостью 25 мл отмеривают по 2,5 млраствора А. В первую колбу добавляют 5 мл 2 % спиртового раствораалюминия хлорида, во вторую колбу отмеривают 5 мл 95 % этанола.
В обеколбы добавляют по 0,1 мл уксусной кислоты и доводят объем раствора95% этанолом до метки, перемешивают.Через 30 минут измеряют оптическую плотность содержимогопервой колбы при длине волны 396 ± 2 нм в кювете с толщиной слоя 10мм, используя в качестве раствора сравнения содержимое второй колбы.Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7гликозид и абсолютно сухое сырье (Х) в процентах вычисляют поформуле:79Х = D x 100 x 25 x 100, гдеE1 % 1 cм x а x 2,5 x (100 – W)D – оптическая плотность испытуемого раствора;Е1%1см – удельный показатель поглощения продуктов реакциилютеолин-7-гликозида с алюминия хлоридом, равный 401;W – потеря в массе при высушивании, %;a – навеска сырья, гПримечание.
Приготовление 2% спиртовогораствора алюминия хлорида. 2 г алюминияхлорида растворяют в 90 мл 95 % этанола вмерной колбе вместимостью 100 мл. Послерастворения полученный раствор доводят тем жеэтанолом до метки, перемешивают.Методикабылаапробированасцельюеёточностиивоспроизводимости. Полученные результаты представлены в табл. 2Таблица 2Метрологические характеристики методики определенияфлавоноидов в траве звездчатки средней.fХ¯, мгS х¯Р, %Т (p,f)∆x¯А±%964511,79952,2626,65± 4,13Из табл.
2 видно, что ошибка единичного определения придоверительной вероятности 0,95 не превышает ± 4,5 %.Отсутствие систематической ошибки доказано применением опытовс добавкой лютеолин-7-гликозида.80Таблица 3Результаты количественного определения флавоноидов сиспользованием метода добавки лютеолин-7-гликозида.Найденасуммафлавоноидов,мг/100гсырьяДобавленолютеолин7гликозида,мгДолжнабытьнайденасуммафлавоноидовилютеолина-7гликозида, мг/100 гсырьяНайдена суммафлавоноидов илютеолина-7гликозида,мг/100 г сырья1468234702693- 1,32612152764773+ 1,23720180900881- 2,24350263613631+ 2,9№п/пОтносительнаяошибкаРезультаты табл. 3 показывают отсутствие систематической ошибки.В табл. 4 представлены результаты количественного определенияфлавоноидов в образцах травы звездчатки средней, заготовленной вразных регионах России.Таблица 4Результаты количественного определения флавоноидов в травезвездчатки средней.Номер образца123123111Место заготовкиМосковская обл.Московская обл.Московская обл.Пермский крайПермский крайПермский крайТамбовская обл.Рязанская обл.Кировская обл.Содержаниефлавоноидов, %0,4680,6120,7200,3140,3620,4510,6260,2980,22381Результаты табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
