Диссертация (1141249), страница 14
Текст из файла (страница 14)
х 100 х m х 2,5 х 100 х 100 = S обр. х m х 1000 ,S ст. х а х 100 х 25 х (100-W)S ст. х а х (100-W)Где:S обр. – среднее значение площадей пиков на хроматограммеиспытуемого раствора;97S cт. – среднее значение площадей пиков на хроматограмме РСОвитамина С или В1;а – навеска сырья, г;m – навеска стандартного образца витамина С или навеска витаминаВ1;W – потеря в массе при высушивании сырья, %.Методики были апробированы с целью их воспроизводимости иточности.
Полученные результаты представлены в табл. 10 и 11 и рис. 23Таблица 10Метрологические характеристики количественного определения аскорбиновойкислоты и витамина В1.FXSxP,%T(p,f)Δx A %Аскорбиновая кислота943,50,766952,261,7313,98Витамин В1911,00,220952,260,4974,52Результатытабл.10показывают,чтоошибкаединичногоопределения при доверительной вероятности 0,95 не превышает + 4,52 %.Отсутствие систематической ошибки доказано проведением опытовс добавлением витамина С. Результаты представлены в табл. 11№/№образца1234Таблица 11Результаты количественного определения аскорбиновой кислотыс использованием метода добавок.Найдено Добавлено Должна бытьНайденаОтносительаскорбино аскорбино найдена суммасумманая ошибка,войвойаскорбиновой аскорбиново%кислотыкислоты, кислоты мг/100й кислотымг/100гмгг сырьямг/100 гсырьясырья52,213,165,367,1+2,743,521,865,364,6-1,138,829,167,965,9-2,540,440,480,881,9+1,498Хроматограмма водно спиртового извлечения звездчатки средней истандартных растворов витамина В1 и витамина С.мин.Рис.23.
1 – РСО витаминов В1 и С2. – извлечение из звездчатки средней.Результаты табл. 11 показывают отсутствие систематическойошибки, т.к. относительная ошибка метода добавок меньше относительнойошибки единичного определения.С помощью разработанной методики были проанализированы 4партии травы звездчатки на содержание витамина С и витамина В1.Полученные результаты представлены в табл. 12Таблица 12Результаты количественного определения аскорбиновой кислотыи витамина В1№/№Площади пиковСодержаниеПлощадиСодержаниеобразцааскорбиновойаскорбиновойпиковвитамина В1кислотыкислотывитамина В111169150,0522364710,01102974250,0435389990,01183899020,0388339020,01024904850,0404429400,012999Из табл. 12 видно, что содержание витамина С в траве звездчаткиколеблется от 0,0388 % до 0,0522 %, витамина В1 от 0,0102 % до 0,0129 %.Наоснованиипроведенныхисследованийустановленоколичественное содержание витамина С и витамина В1.5.4.
Подбор условий и разработка методик определениясапонинов в траве звездчатки средней.Качественный состав и количественное содержание сапонинов втраве звездчатки средней не изучен. В литературе имеются толькосведения о присутствии сапонинов в траве звездчатки средней.Цельюданногоисследованиябыло:разработатьметодикикачественного и количественного определения сапонинов в изучаемомсырье.5.4.1. Установление присутствия сапонинов в траве звездчаткисредней.В результате проведенных исследований по подбору условий иразработке методик качественного и количественного определениясапонинов в раздел «Качественные реакции» нормативной документациибылавключенаметодикаспектрофотометрическогоопределениясапонинов в следующей редакции:«УФ – спектр поглощения раствора В, приготовленного дляколичественного определения в области от 260 до 360 нм, должен иметьмаксимум поглощения при длине волны 325 + 3 нм (сапонины).»Для обнаружения сапонинов методом хроматографии в тонком слоесорбента использованы пластинки «Сорбфил – ПТСХ – АФ – А - УФ».100Система растворителей и реактив для выявления зон адсорбции взяты излитературы [80].Методика.
На линию старта хроматографической пластинки«Сорбфил – ПТСХ – АФ – А - УФ» размером 10 х 15 см микропипеткойнаносят в первую точку 10 мкл раствора А (см. количественноеопределение), во вторую точку 20 мкл стандартного раствора эсцина.Пластинку высушивают на воздухе 10 мин и хроматографируютвосходящим способом в системе растворителей: н–бутанол - кислотауксусная ледяная - вода (5:1:4). Когда фронт растворителей пройдет 10 см,пластинку вынимают из камеры, сушат в сушильном шкафу 3 мин при100 0 С. Хроматограмму обрабатывают 10 % раствором серной кислоты в40 % этаноле. Затем нагревают в сушильном шкафу при температуре105 0 С в течение 5 минСхема хроматограммы представлена на рис.
24101СХЕМА ХРОМАТОГРАММЫ▲1▲2Рис. 24. 1. - извлечение из травы звездчатки средней2. - 0,015 % раствор эсцина в 95 % этаноле5.4.2.Разработкаметодикиколичественногоопределениясапонинов в траве звездчатки средней.Количественноеопределениесапониновпроводилиспектрофотометрическим методом, в основе которого лежит способностьсапонинов давать окрашивание с кислотой серной концентрированной.102При снятии спектров поглощения продуктов реакции стандартаэсцина и извлечения из травы звездчатки средней с кислотой сернойконцентрированной на регистрирующем спектрофотометре Cary – 50установлено, что максимум поглощения находится при длине волны 325нм. Результаты представлены на рис.
25.Спектры поглощения сапонинов с кислотой сернойконцентрированной21Рис. 25. 1 - 0,015 % раствор эсцина в 95 % этаноле2 - извлечение из травы звездчатки среднейИз рис. 25 следует, что максимумы спектров поглощения раствораэсцина и извлечения из травы звездчатки средней совпадают.Выбор рабочих концентраций осуществляли путем построениякалибровочного графика стандарта эсцина. С помощью калибровочногографика установили, что калибровочная кривая зависимости междуконцентрацией и оптической плотностью носит линейный характер впределе концентраций от 0,00025 до 0,001 %. Наименьшее определяемоеколичество эсцина 0,0025 мг/мл.103Установленотакже,чтомаксимумоптическойплотностианализируемого раствора достигается через 20 мин и сохраняетсянеизменным в течение 20 мин.Удельный показатель поглощения продуктов реакции эсцина скислотой серной концентрированной 222,45 нами взят из литературы [13].Оптимальные условия экстракции сапонинов из сырья были изученыпутем анализа: степень измельченности сырья, экстрагент, соотношениесырья и экстрагента, температура и время экстракции.Результаты представлены в табл.
13.Таблица 13Зависимость извлечения тритерпеновых сапонинов из травызвездчатки от условий экстракции.Условия экстракцииСодержание тритерпеновых сапонинов,%Измельченность сырья72,1752,9333,5423,7613,730,53,70ЭкстрагентЭтанол 25 %1,87Этанол 50 %2,83Этанол 70 %3,75Этанол 95 %1,55Соотношение сырье - экстргент1:503,771:1003,451:2003,131:2502,97Время экстракции, мин151,77302,74453,46603,78104901203,753,76Температурный режимБез нагреванияВодяная баня 40 0СВодяная баня 80 0СВодяная баня 100 0СОткрытый огонь1,812,963,593,793,47Кратность экстракцииОднократный 60 минДвукратный 45 мин 15 мин3,613,77Из табл.
13 видно, что оптимальными условиями экстракцииявляются: экстрагент – 70 % этанол; соотношение сырья и экстрагента –1:50; измельченность сырья – 2 мм; температурный режим экстракции –кипящая водяная баня; время экстракции – 60 мин, (двукратно: 45 и 15мин).Для очистки извлечения применен метод смены растворителей иколоночная хроматография с оксидом алюминия.Полученные результаты были использованы для создания методикиколичественного определения сапонинов в траве звездчатки.Количественноеопределение.Аналитическуюпробусырьяизмельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметромотверстий 2 мм.Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают вкруглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 60 мл70 % этанола, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают накипящей водяной бане в течение 45 мин.
Извлечение охлаждают ифильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 млтак, чтобы сырье не попало на фильтр. В колбу с сырьем опять отмеривают40 мл 70 % этанола, присоединяют к обратному холодильнику и нагреваютна кипящей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения извлечение105фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу и доводят объемраствора в колбе 70 % этанолом до метки, перемешивают (раствор А).2 мл раствора А помещают в выпарительную чашку и выпариваютдосуха на кипящей водяной бане.
Сухой остаток помещают в стекляннуюколонку диаметром 1 см и длинной 25 см с 3 г алюминия оксида.Выпарительную чашку промывают 5 мл воды и помещают раствор в ту жеколонку. Когда раствор пройдёт через колонку, выпарительную чашку сэлюентом ставят на кипящую водяную баню и выпаривают элюент досуха.Сухой остаток количественно перенося 96 % этанолом в мерную колбувместимостью 25 мл. Объем раствора в колбе доводят 96 % этанолом дометки и перемешивают (раствор Б)В пробирку с притертой пробкой отмеривают 2 мл раствора Б,осторожно по стенке пробирки прибавляют 8 мл кислоты сернойконцентрированнойоптическуюиперемешивают.плотностьполученногоЧерез30раствораминутсизмеряютпомощьюспектрофотометра при длине волны 325 ± 5 нм в кювете с толщиной слоя10 мм.
В качестве раствора сравнения используют смесь 2 мл 96% этанолас 8 мл кислоты серной концентрированной.Содержание сапонинов (Х) в пересчете на эсцин и абсолютно сухоесырье вычисляют по формуле:D × 100 × 25 × 10 × 100D × 625000Х = ————————————— = ——————————, где222,45 × а ×2 × 2 × (100 – W)222,45 × а × (100 – W)D – оптическая плотность испытуемого раствора;А - Навеска сырья, граммы;W - потеря в массе при высушивании;222,45 – удельный показатель продуктов реакции эсцина с кислотойсерной концентрированной.106Таблица 14Метрологические характеристики методики количественногоопределения суммы тритерпеновых сапонинов в траве звездчатки средней.Х‾, г/100 гсырья3,75f9СпомощьюSx‾Р,%Т(p,t)∆х‾∆±%0,076952,260,1714,58разработаннойметодикивозможноопределитьтритерпеновые сапонины с достаточной точностью относительная ошибкаопределения при доверительной вероятности 0,95 не превышает + 5 %.Для определения систематической ошибки был использован методдобавок стандарта эсцина.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
