Диссертация (1141249), страница 15
Текст из файла (страница 15)
Полученные результаты представлены в табл.15.Таблица 15Определение тритерпеновых сапонинов в траве звездчатки сиспользованием метода добавок эсцина.Найденасумматритерпеновыхсапониновг/100 г сырья6,084,003,755,21Введеноэсцина на100 гсырья1,522,002,811,30Должна бытьнайдена сумматритерпеновыхсапонинов г/100г сырья7,606,006,566,51Найдена сумма Относиттритерпеновых ельнаяошибкасапониновг/100 г сырья7,685,876,706,31+ 1,06- 2,17+ 2,14- 2,46Систематические ошибки отсутствуют, т.к.
относительная ошибкаметода добавок меньше относительной ошибки единичного определения.Построение калибровочного графика.Количественноеопределениесапониновметодомпараметрамлинейности,спектрофотометрии.Валидацияповторяемостиметодикипроведенавоспроизводимостипоиправильностиметодики.107Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций.
Былприготовлен исходный раствор эсцина (Fluka, 02320) (точная навеска) сконцентрацией 0,1% затем из него готовили разбавленный раствор А.Для приготовления раствора А точную навеску эсцина растворяют в90 мл 70% этанола в мерной колбе вместимостью 100 мл. После полногорастворения доводят объем раствора в колбе 70% этанолом до метки иперемешивают (раствор А).Используют 5 мерных колб вместимостью 50 мл. Переносят растворА в соответствующие колбы согласно табл.16.Таблица 16.Номер колбы1232.55,045Объемраствора А,1,257,510,0(мл)Объем раствора в колбе доводят 70% этанолом до метки иперемешивают. Берут пять пробирок с притертыми пробками.
В первуюпробирку отмеривают 2 мл содержимого первой колбы, во вторую- 2млсодержимого второй колбы, в третью- 2 мл содержимого третьей колбы, вчетвертую- 2 мл содержимого четвертой колбы, в пятую- 2 млсодержимого пятой колбы. В каждую пробирку добавляют по 8 мл скислоты серной концентрированной и тщательно перемешивают.Через 30 мин измеряют оптическую плотность с помощьюспектрофотометра при длине волны 325 нм в кювете с толщиной слоя 10мм. В качестве раствора сравнения используют кислоту сернуюконцентрированную.108Рис.26 Зависимость оптической плотности раствора от концентрацииэсцинаКритериемприемлимостилинейностиявляетсякоэффициенткорреляции.Если его величина близка к единице, то совокупность данных можноописать прямой линией. По полученным эксперементальным даннымрасчитывали коэффициент корреляции, который должен быть ниже 0,99. Внашем случае коэффициент корреляции составил 0, 9977(рис табл.
15)Таблица 17.Результаты статистической обработки данных, полученных приизучении линейной зависимости вида У=вх+аХ¯f40,0015Y¯0,4765b355,8111α-0,05720r0,9977Повторяемость методики определяли на том же образце сырья в 6повторностях.Критерийприемлемостивыражалсявеличинойотносительного стандартного отклонения, которое не должно превышать10910%. Он составил 4,58%, что свидетельствует прецизионности методики иусловиях повторяемостиТаблица 18.Метрологическиехарактеристикиметодикиколичественногоопределения суммы тритерпеновых сапонинов в траве звездчатки средней.fХ‾, г/100 г Sx‾Р,%Т(p,t)∆х‾∆±%952,260,1714,58сырья93,750,076Определение воспроизводимости методики выполнялина 3образцах в 3 повторностях(табл.19)Таблица 19.Серия 1Содержание сапонинов, %Методологическиехарактеристики4,01Х¯=3,9954,01S2=0,000313,98S=0,01773,97Sx=0,00724,01∆ X=0,01843,99∑=0,63%Серия 2Содержание сапонинов, %Методологические110характеристики5,05Х¯=5,055,07S2=0,01865,15S=0,13644,99Sx=0,05574,97∆ X=0,14315,05∑=2,7%Серия 3Содержание сапонинов, %Методологическиехарактеристики3,75Х¯=3,783,82S2 = 0,00123,82S= 0,03463,75Sx= 0,01413,75∆ X=0,0363,79∑=0,96%Критериемприемлемостиметодикивыражалсявеличинойотносительно стандартного отклонения, которое не должно превышать10%.
Он составил от 0,63% до 2,7%, что свидетельствует о прецизионностиметодики в условиях повторяемости.Правильность методики устанавливали путём количественногосодержания суммы сапонинов в пересчёте на эсцин в растворах,111полученных путём добавления в необходимом количестве стандартноговещества к исследуемому раствору. Критерий приемлемости – среднийпроцентвостановленияприиспользованиирастворовзаданныхконцентраций, скоректированный на 2, 57%.
В разработанной методикепроцент востановления находился в пределах от -2,46% до 2,14%Таблица 20.Определение тритерпеновых сапонинов в траве звездчатки сиспользованием метода добавок эсцина.Найдена сумма ВведеноДолжна бытьНайдена суммаОтноситтритерпеновых эсцина нанайдена сумматритерпеновыхельнаясапонинов100 гтритерпеновыхсапониновошибкаг/100 г сырьясырьясапонинов г/100г/100 г сырьяг сырья6,081,527,607,68+ 1,064,002,006,005,87- 2,173,752,816,566,70+ 2,145,211,306,516,31- 2,46Ошибка единичного определения при доверительной вероятности0,95 не превышает ±4,58, следовательно систематическая ошибкаотсутствует.Валидируемаяметодикаможетбытьпризнанаправильной,поскольку определяемые экспериментально значения лежат внутридоверительныхинтервалов,соответствующихсреднимрезультатаманализа. Расчитанные критерии стьюдента (tвыч.) оказались меньшетабличного критерия стьюдента (t табл=2,57 при Р=95%,f=5), что112позволяет с вероятностью 95% сделать вывод об отсутствии значимойсистематической ошибки.Обоснованость методики подтверждена результатами определениятаких валидационных характеристик как линейности, повторяемостивоспроизводимости и правильности.Выводы к V главе.1.
Определено содержание свободных сахаров в траве звездчаткисредней прямофазной ВЭЖХ, связанных углеводов методом капиллярногоэлектрофореза. Установлено, что связанных сахаров больше (порядка 8 %),чем свободных (порядка 1 %). Свободные сахара представлены глюкозой 0,32 %, фруктозой - 0,52 %.
Связанные – глюкозой 3,28 %, ксилозой - 0,7%,галактозой – 2,1 %.2. Установлен качественный состав и количественное содержаниеаминокислот в траве звездчатки средней. Содержится 20 аминокислот.Преобладающимиявляются:глютаминоваякислота–21,94%,аспарагиновая кислота – 15,45 %, пролин – 10,57 %, оксилизин – 5,92 %,валин – 5,69 %, глицин – 4,99 %, серин – 4,88 %, лейцин – 4,76 %, аланин –4,65 % от суммы свободных кислот. Анализируя полученные данные,можно заключить, что имея такой разнообразный аминокислотный составаминокислот,звездчаткапротивосудорожное,средняяседативноеиможетукрепляющееприменятьсянервнуюкаксистемусредство.3. Разработана ВЭЖХ – методика количественного определения втраве звездчатки средней аскорбиновой кислоты и тиамина гидрохлорида.Установлено, что в траве звездчатки содержится аскорбиновой кислоты от38,8 до 52,2 мг/%, тиамина гидрохлорида от 10,2 до 12,9 мг/%.4. Подобраны условия и разработаны методики качественного иколичественного определения сапонинов в траве звездчатки средней.113Идентификация сапонинов проведена методом ТСХ на пластинках«Сорбфил» в системе растворителей: н-бутанол – уксусная кислоталедяная – вода (5:1:4).
Зоны адсорбции выявляли 10 % раствором сернойкислоты в 40 % этаноле. Количественное определение основано нареакции сапонинов с кислотой серной концентрированной и измеренииоптической плотности с помощью спектрофотометра при длине волны 325+ 3 нм. Установлено количественное содержание сапонинов от 3,75 до6,08 %.ГЛАВА6.РАЗРАБОТКАТЕХНОЛОГИИСТАНДАРТИЗАЦИИИМЕТОДИКГОМЕОПАТИЧЕСКИХМАТРИЧНЫХ НАСТОЕК ИЗ ТРАВЫ ЗВЕЗДЧАТКИСРЕДНЕЙ6.1. Разработка технологии гомеопатических матричныхнастоек.Сырье и настойка гомеопатическая матричная из травы звездчаткисредней описаны в Фармакопее США. Звездчатка средняя входит вперечень гомеопатических препаратов, разрешенных к применению вРоссии в соответствии с приказом Минмедпрома России от 29.11.1995 г.№ 335.В нашей стране отсутствует нормативная документация на сырьезвездчатки средней для гомеопатических препаратов.
Сырьем дляполучения гомеопатических препаратов служит как свежая, так ивысушенная трава звездчатки средней.В связи с этим перед разработкой технологии приготовлениягомеопатической матричной настойки, нами была создана фармакопейнаястатья на свежее сырье – траву звездчатки средней.114Настойку гомеопатическую матричную готовили из свежей травызвездчаткисредней,собраннойвовремяполногоцветенияисоответствующей требованиям разработанной ФС на свежее сырье.6.1.1. Настойка гомеопатическая матричная из свежего сырья.Настойку гомеопатическую готовили путем мацерации по методу 2аОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные с использованием86 % этанола (по массе), так как влажность сырья более 80 %, сырье несодержит эфирных масел, смол и слизи.В лекарственном растительном сырье определяют влажность.
Сырьетщательно измельчают. Измельченную растительную массу взвешивают инемедленно заливают не менее, чем половинным от массы растительногосырья количеством 86 % (по массе) этиловым спиртом, перемешивают иоставляют в плотно закрытом сосуде при температуре не выше 200 С.По формуле рассчитывают необходимое для растительной массыколичество спирта этилового 86 % (по массе) в килограммах:Е2 = m x W100m – масса растительного сырья в кг;W – влажность сырья, %;.От рассчитанного количества спирта (Е2 ) вычитают ранееприбавленного спирта и остаток спирта смешивают с полученной массой.Массу оставляют не менее чем на 10 суток при температуре не выше 200 С,при периодическом встряхивании. Затем массу отжимают и через суткифильтруют.Пример: Влажность сырья звездчатки средней 80,27 %.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
