Диссертация (1141107), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Данная серия опытов повторялась трижды.В итоге специфическая активность препаратов каждой концентрации in vitroопределялась в 18 образцах. Подсчет паразитов производился с помощьюкамеры Горяева.Использовалась формула: БМ = а × 50 × 1000, гдеБM (биомасса) – искомое число паразитов,а – суммарное число промастигот в пяти квадрантах, просмотренных подиагонали.Биомассасчиталасьгоднойдляпроведениясреднеарифметической численности промастигот висследованийприполе зрения 72, чтосоответствовал 28000000 паразитов в 1 мл двухфазной среды.Учитывалась и степень подвижности жгутиковых протистов: «-» –неподвижные лейшмании; «+» – малоподвижные лейшмании, зачастуюдвижения только жгутика, без передвижения; «++» – активные лейшмании,передвигающиеся по всему полю зрения свободно.3.1.1. Результаты исследования эффективности доксициклина in vitroДля изучения эффективности доксициклина in vitro его доза min 0,0006 г(по инструкции фирмы производителя) последовательно увеличивалась в 2, 4,6, 8, 10 раз (рисунок 2).46Опытная группа – доксициклин, гпоследовательное увеличение дозы в 2, 4, 6, 8, 10 разMin 0,00060,00120,00240,00360,0048Max 0,006Рисунок 2 – Дозы доксициклина, последовательно увеличиваемые для изученияпротиволейшманиальной эффективности in vitroПроведеносравнениеэффективностиминимальной(0,0006г)имаксимальной (0,006 г) доз доксициклина с двумя контрольными группами –меглумина антимонат и питательная среда 199 (рис.
3).19,1620181614121086420Min7,92Max5,425.0833.167доксициклинГлюкантимСреда 199Рисунок 3 – Сравнение эффективности min (0,0006 г) и max (0,006 г) доздоксициклина с таковым у меглумина антимоната (1-я контрольная группа) ипитательной средой 199 (2-я контрольная группа) (по вертикальной оси – числопромастигот в одном поле зрения, абс.)Сравнение числа промастигот (5,083) в трех пробирках с минимальнымидозами препаратов: доксициклина (0,0006 г) и меглумина антимоната (7,92 приминимальной дозе 0,009 г) свидетельствует, что специфическая активностьдоксициклина в 1,6 раза выше, чем традиционно используемого специалистамимеглумина антимоната (5,083 против 7,92 промастигот в одном поле зрения)(p<0,05).47Сравнение числа промастигот (3,167) в трех пробирках с максимальнымидозами препаратов: доксициклина (0,006 г) и меглумина антимоната (5,42 примаксимальной дозе 0,036 г) свидетельствует, что специфическая активностьдоксициклина достоверно в 1,7 раза выше, чем у меглумина антимоната (3,167против 5,42 промастигот в одном поле зрения) (p<0,05).В контрольных пробирках с 0,03 мл среды 199 число промастиготнесколько уменьшилось по сравнению с исходным значением за счетестественной гибели паразитов вследствие отсутствия пассажей и твердой фазыпитательной среды.Увеличение минимальной терапевтической дозы доксициклина в 10 разлишь в 1,6 раза увеличивает его эффективность (5,083 против 3,167промастигот в одном поле зрения).
Отсутствие подвижных форм промастиготуказывает на ингибирующую активность препарата. При использовании, какминимальных, так и максимальных доз доксициклина, подвижные формы невыявлены. Это является прямым доказательством эффективности минимальнойдозы препарата, которая обладает высокой ингибирующей активностью.3.1.2. Результаты исследования эффективности цефотаксима (клафорана)in vitroДля изучения эффективности цефотаксима in vitro его доза min 0,0075 г(по инструкции фирма производителя) последовательно увеличивалась в 2, 4, 6,8, 10 раз (рисунок 4).Опытная группа – цефотаксимпоследовательное увеличение дозы в 2, 4, 6, 8, 10 раз0,00750,0150,030,0450,060,075Рисунок 4 – Дозы цефотаксима, последовательно увеличиваемые для изученияпротиволейшманиальной эффективности in vitro48Проведеносравнениеэффективностиминимальной(0,0075г)имаксимальной (0,075 г) доз цефотаксима с двумя контрольными группами –меглумина антимонат и питательная среда 199 (рис.
5).19,1620181614128.91710Min7,92Max85,424.6726420ЦефотаксимРисунок5–СравнениеГлюкантимСреда 199эффективностиминимальных(0,0075г)имаксимальных (0,075 г) доз цефотаксима с таковым у меглумина антимоната (1я контрольная группа) и питательной средой 199 (2-я контрольная группа) (повертикальной оси – число промастигот в одном поле зрения, абс.)Сравнение числа промастигот в трех пробирках с минимальными дозамипрепаратов: цефотаксима (минимальная доза 0,0075 г) и меглумина антимоната(минимальная доза 0,009 г) свидетельствует, что специфическая активностьцефотаксима только в 1,13 раза больше, чем у традиционно используемогоспециалистами меглумина антимоната (соответственно, 8,917 против 7,92промастигот в одном поле зрения) (p>0,05).Сравнение числа промастигот в трех пробирках с максимальными дозамипрепаратов: меглумина антимоната (0,036 г) и цефотаксима (0,075 г)свидетельствует,чтонаоборотспецифическаяактивностьмеглуминаантимоната только в 1,16 раза выше, чем у цефотаксима (5,42 против 4,672промастигот в одном поле зрения), что опять же статистически недостоверно49(p>0,05).
Таким образом, и при минимальных и при максимальных дозахспецифическая активность обоих препаратов практически идентична.Увеличение минимальной терапевтической дозы цефотаксима в 10 раз в1,9 раза увеличивает его эффективность (8,917 против 4,672 промастигот водном поле зрения). Отсутствие подвижных форм промастигот отмечаетсялишь при максимальной дозе, увеличенной в 10 раз от рекомендованнойинструкцией.
Это указывает на необходимость проверки безопасности этойдозы в исследовании in vivo.3.1.3. Результаты исследования эффективности цефтриаксона in vitroДля изучения эффективности цефтриаксона in vitro его доза минимальная0,009 г (по инструкции фирма производителя) последовательно увеличиваласьв 2, 4, 6, 8, 10 раз (рисунок 6).Опытная группа – цефтриаксонпоследовательное увеличение дозы в 2, 4, 6, 8, 10 разMin 0,0090,0180,0360,0540,072Max 0,09Рисунок 6 – Дозы цефтриаксона, последовательно увеличиваемые для изученияпротиволейшманиальной эффективности in vitroПроведеносравнениеэффективностиминимальной(0,009г)имаксимальной (0,09 г) доз цефтриаксона с двумя контрольными группами –меглумина антимонат и питательная среда 199 (рис.
7).5019.162018161412Min7.9210Max85.42642.251.4220ЦефтриаксонГлюкантимСреда 199Рисунок 7 – Сравнение эффективности минимальной (0,009 г) и максимальной(0,09 г) доз цефтриаксона с таковым у меглумина антимонат (1-я контрольнаягруппа) и питательной средой 199 (2-я контрольная группа) (по вертикальнойоси – число промастигот в одном поле зрения, абс.)Сравнение числа промастигот (2,25) в трех пробирках с минимальнымидозами препаратов: цефтриаксона (0,009 г) и меглумина антимоната (0,009 г)свидетельствует, что специфическая активность цефтриаксона достоверно в 3,5раза выше, чем у традиционно используемого специалистами меглуминаантимоната (2,25 против 7,92 промастигот в одном поле зрения) (p<0,05).Сравнение числа промастигот в трех пробирках с максимальными дозамицефтриаксона (0,09 г) и меглумина антимоната (0,036 г) свидетельствует, чтоспецифическая активность цефтриаксона достоверно в 3,8 раза выше, чем умеглумина антимоната (1,42 против 5,42 промастигот в одном поле зрения)(p<0,05).Увеличение минимальной терапевтической дозы цефтриаксона в 10 разлишь в 1,6 раза увеличивает его эффективность (2,25 против 1,42 промастигот водном поле зрения).
Отсутствие подвижных форм промастигот указывает наингибирующую активность препарата. При использовании, как минимальных,так и максимальных доз цефтриаксона, подвижные формы не выявлены. Это51являетсяпрямымдоказательствомэффективностиминимальнойдозыпрепарата, которая обладает высокой ингибирующей активностью.3.1.4 Сравнительный анализ эффективности препаратов для лечениязоонозного кожного лейшманиоза in vitroДлясравнительногоанализаэффективностиантибактериальныхпрепаратов с учетом контрольных групп, данные о min и max терапевтическойконцентрации для каждого из выбранных антибиотиков во взвеси паразитов,обладающие ингибирующей активностью, представлены в таблице 2.Таблица 2 – Мin и max терапевтические концентрации антибиотиков во взвесипаразитов, обладающие ингибирующей активностьюЛейшмании в одном поле зренияМННДоксициклинЦефтриаксонЦефотаксимМеглуминаантимонатаКонтрольДоза, гMin 0,0006Количествопромастигот5,083ПодвижностьПромастигот*-Max 0,0063,167-Min 0,0092,250-Max 0,091,420-Min 0,00758,917+Max 0,0754,672-Min 0,0097,920++Max 0,0365,420++Среда 19919,160++* Использовались обозначения: «-» - неподвижные лейшмании; «+» - малоподвижные лейшмании,зачастую движения только жгутика, без передвижения; «++» - активные лейшмании, передвигающиеся повсему полю зрения свободно.52Таблица 3 – Подвижность промастигот при использовании Min и Max дозпротиволейшманиальных препаратовДозаПодвижность просмастиготДоксициклинЦефотаксим Цефтриаксон Меглумина Среда 199антимонатаMin-+-++Min---++++8.9177,92098765,4205.0834.672Min543.167Max2,25031,420210ДоксициклинЦефотаксимЦефтриаксонГлюкантимРисунок 8 – Сравнение эффективности минимальных и максимальных (0,09 г)доз препаратов между собойДанные рисунка 8 свидетельствуют, что ингибирующая активностьантибактериальных препаратов при минимальной дозе составляла 2,25(цефтриаксон); 5,083 (доксициклин); 8,917 (цефотаксим) промастигот в полезрения.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
