Диссертация (1141107), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Противоопухолевое средство для местного применения: мнн –Милтефозин (Импавидо, Паладин – Канада). Курс не менее 28 дней по 100мг/сут [23; 117].3. Антибактериальные препараты: мнн – Амфотерицин В (хорошозарекомендовал себя липосомальный препарат «АмБисом», назначаемый посхеме: 3–5 мг/кг – суточная доза, путем инфузии, в течение 3–6 дней досуммарной дозы18–21 мг/кг[25;111; 118];Паромомицин(Индия)паромомицином [24; 40; 22; 115; 39]. Препараты специфического воздействияна лейшманий.4. Противопротозойное средство (Аминохинол) – по 0,2 г 3 раза в день,на курс – 11-12 г препарата.
Средство считается токсичным. [103; 93].5.Препаратынеспецифического,вспомогательногодействия:антисептики (синтомицин, мирамистин, бриллиантовый зеленый и пр.);средства, действие которых направлено на борьбу с присоединившейсявторичной инфекцией [6; 18].Были попытки использования иммунорегуляторных пептидов (тактивин,тималин)ипротеолитеческихферментов(трипсин),сокращающихпродолжительность лечения специфическими препаратами и уменьшающихплощадь кожного поражения.
Существуют различные схемы лечения: тактивини тималин в виде монотерапии, тактивин и тималин в сочетании смономицином,мономицинстрипсином,комбинированноетактивина или тималина с трипсином и мономицином [15].применение33В связи с этим ценными являются публикации авторов, лечившихбольных ЗКЛ антибиотиками различных фармакологических групп [61].
Этодоксициклин [32; 36; 35; 31; 68; 100] и цефотаксим (клафоран – цефалоспорина3 поколения) [37].Универсальнымпрепаратомдлялечениялейшманиозов являютсяпрепараты 5-валентной сурьмы [71], однако он весьма токсичен [34; 55].Важной особенностью кожного лейшманиоза является то, что поражениякожи обычно разрешаются без медицинского вмешательства.
Высыпания,вызванные Leishmania major, проходят в течение 6-12 месяцев, а Leishmaniatropica – в течение двух лет. Поэтому в легких случаях, в зависимости отпредпочтений пациента, можно подождать, когда заболевание пройдетсамостоятельно [38; 27]. Лечение может ускорить выздоровление и уменьшитьобразование рубцов [59].Из вышеописанного можно сделать вывод, что для лечениялейшманиоза нет единого универсального и вместе с тем эффективного ибезопасного способы терапии [57; 58]. Перед практикующим врачом остростоит вопрос о выборе метода лечения кожного лейшманиоза.1.3.Новые аспекты этиопатогенеза кожного лейшманиоза (овирусе, состоянии иммунитета, экспериментальныхисследования в данном направлении).Исследования,проведенныезарубежнымиспециалистами,свидетельствуют, что этиологическим фактором заболевания могутявляться не сами лейшмании, а вирус, находящийся в них (LRV –лейшманиальный РНК-вирус).
Он впервые обнаружен в 1988 г. у больного,инфицированного L. guyanensis [75]. Позднее его обнаружили в L.braziliensis и указали на связь с более тяжелым течением КЛ вплоть доразвития кожно-слизистого лейшманиоза [76; 47]. Авторами установленакорреляция между наличием вируса и иммунным ответом хозяина, что34может служить прогностическим критерием тяжести лейшманиоза ираспространения инфекции по лимфатической системе [16; 47].
Геномныенуклеиновые кислоты LRV экстрагировали из 50 культивируемыхизолятов, принадлежащих к видам L. major, L. tropica и L. infantum.Определена частичная последовательность генов их вирусной РНКполимеразы. Далее эти гены попытались обнаружить в образцах изолятов,хранящихся в базе данных GenBank. Их наличие подтверждено в двухизолятах – от пациента, резистентного к терапии меглумина антимонатом,от песчанки Rhombomys opimus [77].
Доказано различие геномныхпоследовательностей вирусов в лейшманиях Нового и Старого Света.Гистологические исследования свидетельствуют, что наличие лейшманийв тканях слизистой оболочки больных не всегда сопровождается ихпатологией. Назначение препаратов сурьмы, разрушающих паразитов,приводит к распространению инфекции [81; 43; 53; 60]. По сути, мы имеемдело с эндоцитобиозом вируса внутри лейшманий. Лейшманиями,содержащими LRV, и безвирусными паразитами заражали хомяков.Доказано, что в первом случае имел место сильный воспалительный ответза счет повышения уровня IFN-β. Установлено продление выживаемостипаразитов с вирусом [50; 51; 78].Механизмы потенциала развития лейшманиоза в организме внастоящее время неизвестны.
При этом связь с иммунитетом и средойхозяина, а также различных филогенетических факторов паразитов иначало инфекционного процесса очевидна. До сих пор нет консенсусаотносительно того, какой из этих факторов необходим для болееагрессивноготечения.Противоречивыедоказательства,вероятно,свидетельствуют о том, что этот процесс является многофакторным изависит от сложных взаимодействий между паразитом, хозяином иокружающей средой, включая генетические и негенические факторы [81].Географические границы остаются самым четким разграничением всимптоматике заболевания, и поскольку они параллельны специфическим35эндемическим регионам паразитов, часто считается, что поражениеболезни связано с филогенезом паразитов.
До сих пор сравнительныйанализ геномов Leishmania spp., вызывающих кожный, висцеральный икожно-слизистыйлейшманиоз,невыявилуниверсальный«метастатический ген» [87; 85; 86].Например, известно, что метастатический ген L. braziliensis несетдополнительные копии NADPH-зависимой фумаратредуктазы и гомологаглутатионпероксидазы. Все они являются важными ферментами придетоксикации окислительного стресса. Неизвестно, имеют ли они какоелибо физиологическое значение.Интересно, что начало пост-кала-азар связано с успешным лечениемвисцерального лейшманиоза [53; 54].
Проведенная терапия и иммунныйответ пациента приводят к гибели лейшманий и разрешению симптомовзаболевания [44; 88]. Антимониальная терапия несет определенный рискразвития пост-кала-азар. Действительно, высокий уровень IL-10 всыворотке и активированный IL-6 и TNF-α являются прогностическими иважными для развития пост-кала-азар [91; 89; 90]. Эти высокие уровнилокальных воспалительных маркеров могут быть компенсирующими длянеисправного сигнального пути IFN-γ, потому что хотя уровни интерлайнIFN-γ высоки, его сигнализация, по-видимому, искажается низкойэкспрессией рецептора IFN-γ [92].
Таким образом, этиопатогенезе кожноголейшманиоза важную роль играют сами лейшмании, LRV, состояниеиммунной системы организма хозяина. Не исключено, что резистентностьк специфической терапии обусловлена наличием LRV. Это послужилооснование для изучения в доклиническом исследовании эффективностикомбинированной терапии с включением противовирусного препарата –интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного (реаферона).36ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯЭкспериментальныйразделработывыполненвИнститутемедицинской паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеванийим. Е. И. Марциновского Первого МГМУ им. И. М. Сеченова.Анализ данных литературы (см. обзор литературы) по оценкеспецифической активности препаратов для лечения лейшманиоза позволилотобрать для эксперимента препараты, используемые для этой цели изарегистрированныенаРоссийскомнесколькихлекарственныхцефотаксима(клафорана,рынке.препаратов:Франция),Изучалиактивностьдоксициклинацефтриаксона(Россия),(Россия).Хотядоксициклин используется некоторыми авторами для лечения КЛ у людей,но экспериментальные работы по изучению его активности in vitro и in vivов доступной литературе отсутствуют.
Выбор цефотаксима (клафорана,цефалоспорина III поколения) базируется на данных, свидетельствующихоб эффективности препарата при лечении больных с висцеральнымлейшманиозом и с КЛ [37]. Учитывая, что цефотаксим (клафоран) –импортныйпрепарат(Франция),тодляисследованиясцельюимпортозамещения нами взят отечественный антибиотик из той же группы–цефтриаксон.рекомбинантногоВыборинтерферона(реаферона)альфа-2bобусловленновымичеловеческогоданнымиобэтиопатогенезе лейшманиоза.Для выполнения поставленных задач применены следующие методыисследования.1.Выборлабораторноймоделиживотного.Вданномисследовании в качестве лабораторной модели использовались золотистыехомяки – Golden Syrian hamster (GSH).
Они являются классическоймодельювисцеральноголейшманиоза,чтообусловленовысокой37восприимчивостью к заболеванию [42; 30]. Их выбор был обусловлен итем, что нами использована лабораторная культура L. major, хранившаясядолгое время в криобанке института. Это требовало выбора болеечувствительной экспериментальной модели для заражения. Животныезакупались в питомнике лабораторных животных «Пущино», имеливетеринарныйпаспорт,содержаниеипитаниесоответствовалинормативным документам.
Заражение животных в эксперименте in vivoвыполнялось на животных 2-х месячного возраста, масса которых былаоколо 30 г. Клинические проявления заболевания возникали значительнопозже, когда масса животных увеличивалась до 100 г. и более. Именно этиживотныеучаствоваливэкспериментепооценкеэффективностивыбранных нами антилейшманиальных препаратов. Все исследовательскиеработы с лабораторными животными выполняются в соответствии собщепринятыми этическими нормами обращения с животными, на основестандартныхоперационныхпроцедур,принятыхворганизации-производителе исследований, которые соответствуют правилам, принятымЕвропейскойКонвенциейпозащитепозвоночныхживотных,используемых для исследовательских и иных научных целей (EuropeanConvention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental andother Scientifi c Purposes (ETS 123) (Strasbourg, 1986).2.Отбор биологического материала для заражения лабораторныхживотных.
Для этой цели использован материал, хранящийся в криобанкеИнститута медицинской паразитологии, тропических и трансмиссивныхзаболеваний им. Е. И. Марциновского Первого МГМУ им. И. М. Сеченова.По журналу отбирались наиболее вирулентные штаммы L. major.Наращивание биомассы проводилось в течение 8 дней на питательнойдвухфазной среде. В качестве твердой фазы был взят кровяной агар NNN(Novy-Neal-Nicolle). Жидкой фазой служила смесь среды 199 и 0.5%раствора гидролизата лактальбумина. Для подсчета числа промастигот38использовали камеру Горяева. С помощь формулы × 50 × 1000определяли число паразитов в 1 мл двухфазной среды, где – суммарноечисло промастигот в пяти квадрантах, просмотренных по диагонали.Учитывалась и степень подвижности жгутиковых протистов: «-» о –неподвижные лейшмании; «+» – малоподвижные лейшмании, зачастуюдвижения только жгутика, без передвижения; «++» – активные лейшмании,передвигающиеся по всему полю зрения свободно.
Биомасса считаласьгоднойдляпроведенияисследованийприсреднеарифметическойчисленности промастигот в поле зрения 72, что соответствовал 28000000паразитов в 1 мл двухфазной среды.3.Изучение специфической активности препаратов для лечениякожноголейшманиозаinvitro.Дляпроведениялабораторныхисследований использована культура L. major, полученная от больных,проживавших в эндемичных по КЛ регионах Узбекистана. Возбудительвыделялся путем аспирации из очага инфекции и хранившаяся вкриобанках института. Для оценки специфической активности препаратовin vitro использовали методику, описанную в «Руководстве по проведениюдоклинических исследований лекарственных средств» под редакциейпроф.
А. Н. Миронова (2012).Увеличениеминимальнойконцентрациивнесколькораз(максимальная доза) дало возможность выяснить влияние концентрациипрепаратов на специфическую противолейшманиальную активность.Данная серия опытов повторялась трижды. В итоге специфическаяактивность препаратов каждой концентрации in vitro определялась в 15образцах.4.Изучение токсичности противолейшманиальных препаратов:доксициклина,цефотаксима(клафорана),цефтриаксона,меглуминаантимоната – препарата 5-валентной сурьмы (глюкантима) и интерферонаальфа-2b человеческого рекомбинантного (реаферона). Для этой целииспользовали методику описанной в «Руководстве по проведению39доклинических исследований лекарственных средств» под редакциейпроф. А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
