Диссертация (1141107), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Даже при20-кратном увеличении терапевтической дозы препарата отмечено стабильноеувеличение массы тела золотистых хомяков, как через 16 дней (2,7% и 10,7%),так через 21 день (1,8%-25,2%) по сравнению с исходным.3.3.Исследование эффективности препаратов для терапии зоонозногокожного лейшманиоза in vivoВ данной главе представлены результаты изучения сравнительнойэффективности противолейшманиальных препаратов в эксперименте налабораторных животных после воспроизведения у них модели ЗКЛ.
Перваясерия опытов была посвящена изучению эффективности антибиотиковдоксициклина, цефотаксима (клафорана) и цефтриаксона, а также меглуминаантимоната – препарата 5-валентной сурьмы (глюкантима) и интерферонаальфа-2b человеческого рекомбинантного (реаферона) в виде монотерапии. Дляизученияэффективностимонотерапииперечисленнымипрепаратамииспользовались лабораторные модели золотистых хомяков по 30 животных вкаждой группе.Вторая серия опытов была посвящена сравнению монотерапии меглуминаантимонатом (повторное исследование) и комбинированной терапии меглуминаантимонатомвсочетаниисинтерферономальфа-2bчеловеческимрекомбинантным. Данная серия опытов проведена дважды. Третья серияопытов была направлена на изучение эффективности комбинированнойтерапии доксициклином в сочетании с интерфероном альфа-2b человеческимрекомбинантным.
Данная серия опытов также проведена дважды. Во второй итретьей серии опытов использовались лабораторные модели по 12 разнополыхзолотистых хомяков в каждой группе.Формирование всех опытных групп проводилось с учетом массы телаживотного, однозначности клинических проявлений на коже и длительности60существования язвы. В соответствии с этими показателями лабораторныемодели животных были репрезентативными.В данном исследовании в качестве лабораторной модели использовалисьзолотистые хомяки – классическая модель висцерального лейшманиоза. Ониобладают более высокой восприимчивостью к заболеванию. Заражениеживотных в эксперименте in vivo выполнялось на животных 2-х месячноговозраста, масса которых была около 30 г. Клинические проявления заболеваниявозникали значительно позже, когда масса животных увеличивалась до 100 г иболее.
Именно эти животные участвовали в эксперименте по оценкеэффективности выбранных нами антилейшманиальных препаратов. В каждойгруппе при монотерапии было по 30 животных.Во второй и третьей сериях опытов, проведенных дважды, использовалилабораторные модели по 12 разнополых GSH в каждой группе (всего по 24животных). Формирование всех опытных групп проводилось с учетом массытелаживотного,однозначностиклиническихпроявленийнакожеидлительности существования язвы.
В соответствии с этими показателямилабораторные модели животных были репрезентативными.Для стандартизации опытов использовалось руководство по проведениюдоклинических исследований лекарственных средств [30].В качестве возбудителя заболевания использовали промастиготы L.major. Заражение животных промастиготами более близко к естественному, таккаконоподобноукусу переносчика.Этиформылейшманий легкокультивировать на искусственных питательных средах и дозировать подконтролем камеры Горяева. Заражение осуществлялось культуральнымиформами высоковирулентных штаммов L. major, выделенных из язв человекаили грызунов, находившихся на хранении в криобанке Института медицинскойпаразитологии, тропических и трансмиссивных заболеваний им. Е.
И.Марциновского. Культуру лейшманий выращивали при температуре 20–25°Сна среде NNN. Учитывая, что в процессе длительного культивирования61промастиготнаискусственных питательных средах вирулентность ихутрачивается, использована биомасса после 1-2 пассажей.Методика заражения патологическим материалом. Для зараженияиспользовали 10-14 дневную культуру. Подсчет промастигот производили вкамере Горяева. Затем готовили такую взвесь, которая содержала 10 6 паразитовв объеме 0,05 мл. Эта минимально заражающая доза. Каждому животномуоднократно единовременно внутрикожно вводили по 2 млн.
промастигот в видесуспензии культуры L. major симметрично в пах (минимальный волосянойпокров) и уши (наиболее частый очаг заражения животных в природныхусловиях) с образованием эффекта «лимонной корочки».Методикаоценкиэффективностииспытуемыхлекарственныхпрепаратов. Их введение осуществляли на разных стадиях развития инфекции(лечебное исследование). Лечение хомяков начинали после завершенияинкубационного периода и трансформации большинства бугорков в язву,обычно спустя месяц и более с момента заражения. Эффективность терапииоценивалась с использованием следующих критериев: 1) динамика кожногопроцесса 2) размер лейшманиомы; 3) наличие лейшманий в язве; 4) срокклинического выздоровления. Основным критерием отбора животных дляначала терапии была клиническая картина лейшманиоза с ярко выраженнымкожным процессом, подтвержденным микроскопически – обнаружениемамастигот в мазке из очагов поражения.3.3.1.
Клиническая характеристика особенностей течения ЗКЛ прииспользовании золотистых хомяков в качестве лабораторной моделив эксперименте in vivoИнкубационный период колебался в широких пределах – от 1 до 8 месяцев(табл.9).62Таблица 9 – Продолжительность инкубационного периода ЗКЛ у золотистыххомяков при внутрикожном заражении L. majorПродолжительность инкубационногопериодаДо 1 месяцаОт 1 мес. до1,5 мес.От 1,5 до 2 мес.От 2 мес. до 2,5 мес.От 2,5 мес. до 3 мес.От 3 мес.
до 3,5 мес.От 3,5 мес. до 4 мес.Более 4 мес.Число животных (N=198)Абс.%8341,9189,1147,1126,1105,02311,62211,1168,1Инкубационный период экспериментального ЗКЛ у хомяков колебалсяот 1 до 8 месяцев, составляя в среднем 76,8±21,8 дня. Более чем у половиныживотных (58,1%) клинические проявления ЗКЛ возникали в течение 2 мес. смомента заражения, у остальных (41,9%) – спустя 2 мес., в том числе у 1/3(30,8%) – спустя 3 мес.Эволюционный полиморфизмморфологических элементов в очагепоражения. Первоначально на месте введения биомассы L.
major появлялсяблестящий бугорок плотной консистенции. В центре его через 5–7 днейвозникала язва диаметром 1–2 мм. В дальнейшем она увеличивалась в размереи приобретала характерный для ЗКЛ вид (рисунок 9).63Рисунок 9 – Язва в паху у золотистого хомяка при ЗКЛПервоначально язвы в подавляющем большинстве случаев былиразмером до 4 мм, округлой формы.
Имели валикообразно приподнятый край иобширную зону инфильтрата в основании. Со временем размер язвувеличивался до 1 см в диаметре (61,3%), иногда до 2 см (38,7%). По меренекротизации язвы ее дно обильно покрывалось гнойным налетом, и отделялсягнойный экссудат. У трети (52 или 34,7%) хомяков от язв исходил неприятныйзапах. Нередко экссудат ссыхался в корки, плотно прилегающие к краям язвы.При надавливании на корку по краям язвы выступала серозная жидкость,содержащая большое количество лейшманий. При локализации язв в областипаха у животных возникал лимфостаз половых органов (7,6%), что нередкоприводило к нарушению передвижения животного.При локализации язвы на ушных раковинах всегда наблюдалосьчастичное или полное расплавление хрящевой ткани (рисунок 10).64Рисунок 10 – Язва на ушной раковине у золотистого хомяка при ЗКЛУчитывая, что язвы практически всегда имели форму эллипса, тоизмеряли длину их малой и большой оси.
Затем рассчитывали среднююплощадь очагов язвенного дефекта по формуле:1122= × × ,где D – длина большой оси эллипса, d – длина малой оси эллипса, = 3,14.Для верификации диагноза делали скарификаты с валикообразного краяязвы. Лейшмании в большом числе обнаруживались и в серозной жидкости,получаемой при надавливании на корку. Большое количество расположенных вмакрофагах и свободно лежащих лейшманий свидетельствовало о наличииспецифического процесса (рисунок 11).65Рисунок 11 – Микроскопическое исследование содержимого скарификата: а –бугорка, б – валикообразно приподнятого края язвы, лм – лейшмании вмоноцитах, лс – свободно лежащие лейшманииПри микроскопическом обнаружении лейшманий в очагах пораженияживотные включались с экспериментальный раздел работы для изученияпротиволейшманиальной активностипрепаратов.Сроки наблюдениязаживотными после введения препаратов составляли 60 дней.3.3.2.
Результаты оценки эффективности лечения меглумина антимонатом(глюкантимом) (контрольная группа) экспериментального ЗКЛ узолотистых хомяковДля изучения эффективности монотерапии меглумина антимонатом намодели ЗКЛ использованы 30 золотистых хомяков. Препарат вводили 1 раз внеделю в дозе 0,03 г на 100 г массы лабораторной модели. Кратность введенияпрепарата зависела от его переносимости. Максимальное число инъекцийзавило от результатов клинического выздоровления и составляло 6-7.
Средняямасса лабораторной модели в данной серии опытов составила 107,8±1,7 г.При лечении меглумина антимонатом экспериментальной модели ЗКЛ узолотистых хомяков смертности животных не зарегистрировано. В течениепервых 2 недель отмечено снижение активности животных, потеря аппетита и66незначительное уменьшение массы тела. Однако впоследствии состояниеживотных стабилизировалось.Результаты оценки эффективности монотерапии меглумина антимонатому золотистых хомяков (N=30) представлены в таблице 10.Таблица 10 – Результаты оценки эффективности монотерапии меглуминаантимонатом (глюкантимом) ЗКЛ у золотистых хомяков (N=30)Дни наблюденияМассалабораторноймодели (г)Среднийразмерязв (см2)Степень Микроскопия/местногочислопоражениялейшманий(0/+)(0/+) *До начала лечения107,8±1,70,63,2±0,73,5±0,430-ый день после109,3±1,60,061,2±0,71,5±0,5начала терапии60-ый день после112,8±1,600,1±0,030,6±0,6начала терапииСрок клиническоговыздоровления (дни)40,7±3,2*следует учитывать, что факт наличия паразита в мазках не отражает жизнеспособность возбудителя.Выздоровление животных происходило в течение 2 мес., в среднем за40,7±3,2 дня.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
