Диссертация (1141076), страница 7
Текст из файла (страница 7)
ед.G1- 1975,3+ 197,58 отн. ед.G2– 721,3 + 32,22 отн.ед.G3– 578,5 + 81,58 отн.ед.G4– 303,7+ 58,32 отн.ед.G1 - 217,2+ 28,6 отн.ед.G2 – 112,1+ 23,12 отн.ед.G3 – 75,5 + 24,11 отн.ед.G4 – 33,5+ 14,17 отн.ед.42Рисунок 4. Корреляция интенсивности рамановского рассеяния взависимости от степени дифференцировки (на примере пика 1517 см-1(молекула B-каротина)) светлоклеточного ПКР.Результаты гистологического исследования подтвердили с помощьюиммуногистохимического анализа с использованием антител к виментину,цитокератину (CK-7) и CD 10.
Во всех случаях светлоклеточного рака43наблюдали выраженную положительную экспрессию виментина и CD 10 иотсутствие реакции с СК-7 (Рис.5) (Табл. 6).Кроме того, учитывая значительную частоту возникновения вторичныхизменений при светлоклеточном раке,изучены раман-флуоресцентныеспектры, соответствующие участкам некроза, кровоизлияний, а также полямсклероза. В первом случае для спектра оказалась типичной некоторая«нечеткость»,деструкцией«размытость»тканиопухоли,еголинии,поэтомупо-видимому,иначальнаясвязаннаясинтенсивностьхарактеризовалась довольно низкими значениями.
Умеренные показателиоказались характерными и для локальных максимумов флуоресценции (Рис.6). В случае попадания лазерного луча на участок более или менеевыраженной стромы опухоли или поле склероза в интерстиции илипаренхиме почки спектр имел характерную одногорбую конфигурацию ихарактеризовался высокими показателями интенсивности как начальнойфлуоресценции, так и её локального максимума за счет суммарнойфлуоресценции липопигментов и флавинов (Рис. 7).44ББАААаРисунок 5.
Результатыиммуногистохимическогоисследования образцасветлоклеточного ПКР.А. Экспрессия виментина опухолевымиклетками светлоклеточного почечноклеточного рака. Х100. Б. Отсутствиеэкспрессии СК-7 опухолевыми клеткамисветлоклеточного почечно-клеточногорака. Х200. В. Экспрессия CD10опухолевыми клетками светлоклеточногопочечноклеточного рака.
Х400.ВВТаблица 6. Результаты иммуногистохимического исследованияобразцов светлоклеточного ПКР.Онкомаркер ОценкаVimCD10CK-7Образцы светлоклеточного ПКРэкспрессии(№=67)01+ (<10%)2+ (10-20%)3+ (>21%)01+ (<10%)2+ (10-20%)3+ (>21%)01+ (<10%)2+ (10-20%)3+ (>21%)00067 (100%)015 (22,4%)13 (19,4%)39 (58,2%)64 (95,5%)3 (4,5%)0045АРисунок 6. Результаты гистологического испектроскопического исследований в областинекротических изменений на примере образцасветлоклеточного варианта ПКР. А. Обширныйучасток некроза опухолевого узла.
Окраскагематоксилином и эозином. Ув. Х100. Б.Раманфлуоресцентный спектр, соответствующийнекротизированной ткани опухолевого узла.Локальные максимумы флуоресценцииобозначены желтыми вертикальными линиями вточках 1130 см-1 (суммарная флуоресценциялипопигментов и флавинов) и 1900 см-1(флуоресценция эндогенных порфиринов), синтенсивностью не превышающей 1000 отн.ед..Рамановские пики отсутствуют.Б46АБВРисунок 7. Результаты гистологического и спектроскопическогоисследований стромального компонента опухолевого узла на примереобразца светлоклеточного варианта ПКР. А. Тяжи соединительнотканныхволокон между скоплениями опухолевых клеток (красное окрашивание).Окраска пикрофуксин по ван Гизону.
Ув. Х200. Б. То же (синееокрашивание). Окраска трихромом по Массону. Ув. Х200. В.Раманфлуоресцентный спектр, соответствующий стромальному компонентуопухолевого узла. Локальный максимум желтой вертикальной линией вточке 1620 см-1 (суммарная флуоресценция липопигментов и флавинов), синтенсивностью 64 тыс. отн.ед. Рамановские пики отсутствуют.47Кровоизлиянию в опухолевом узле была свойственна неправильнаятрех-четырехгорбаяфлуоресцентногоилиспектра.причудливаяЛокальнымбесформеннаямаксимумамлинияраман-суммарнойфлуоресценции соответствовали нетипично высокие значения интенсивностифлуоресценции, а их положение, как правило, было искаженным (Рис. 8.)Рисунок 8.
Раман-флуоресцентный спектр, соответствующий участкамкровоизлияний. Характеризуется непостоянной причудливой формой иискажением положения локальных максимумов флуоресценции в связи с ихвысокой интенсивностью (свыше 80 тыс.отн.ед.).48Приисследованииучастковтканипочек,находящихсянамаксимальном удалении от опухолевого узла и визуально интактных, насветооптическомпреимущественноуровненаблюдаликанальцевыхизменения,структурнефронов.Вкасающиесябольшинствепроксимальных и дистальных извитых канальцев на фоне значительногорасширения их просвета были обнаружены интенсивные дистрофические(вакуольная дистрофия), атрофические и некробиотические изменения.
Вотдельных клубочкахотмечали проявленияфокального или тотальногогломерулосклероза, либо умеренного гиалиноза капиллярных петель. Винтерстициальном пространстве почкипрактически во всех случаяхобнаруживали участки разрастания соединительной ткани различной степенивыраженности от умеренного сетчатого до крупноочагового склероза, а такжелимфогистиоцитарную инфильтрацию. Наряду с измененными отмечалиучастки,лишенныенеизмененнойобразцоввышеописанныхпаренхиметканипочки.признаков,иСпектральныехарактеризовались,соднойсоответствующиеособенностистороны,данныхотсутствиемрамановских пиков и, с другой стороны, еще большим снижением локальногомаксимума флуоресценции (2000+28,6 см-1), обусловленного флуоресценциейэндогенных порфиринов,однойхарактернойсвойственных опухолевым узлам (Рис.9).Ещеособенностьюспектральнойкартинывизуальнонеизмененной ткани почки были различия спектров, регистрируемых с полейсклероза и участков неизмененной паренхимы.
Они существенно отличалисьдруг от друга как количеством, так и положением локальных максимумов вспектре флуоресценции. Особенно ярко это проявлялось при регистрацииспектра с различных точек одного и того же участка, для чего необходимымусловием было перемещение по нему лазерного луча. Сводный результатспектроскопического исследования образца светлоклеточного ПКР показанна рисунке 10.49АБРисунок 9. Результаты гистологического и спектроскопическогоисследований визуально неизмененной ткани почки в максимальнойудалении от опухолевого узла А.
В поле зрения некротические измененияизвитых канальцев нефрона, участок широкого поля соединительной ткани.Окраска гематоксилином и эозином. Ув. Х200. Б. Раман-флуоресцентныйспектр, соответствующий периферической области опухолевого узла.Локальный максимум флуоресценции обозначен желтой вертикальнойлинией и соответствует флуоресценции эндогенных порфиринов (2000 см-1).Рамановские пики отсутствуют.Рисунок 10. Сводный результат спектроскопического исследованияобразца светлоклеточного ПКР, G2 степени дифференцировки поФурману. Локальные максимумы флуоресценции обозначены желтымивертикальными линиями.
Рамановские пики обозначены числовымизначениями (см-1).503.1.1. Результаты иммуноморфологического и спектроскопическогоисследований образцов папиллярного почечно-клеточного ракаВо всех исследованных нами наблюдениях макроскопически опухольимела вид узла, расположенного в 6 случаях в верхнем и в 4 случаях внижнем полюсе правой почки. В отличие от светлоклеточных форм ракапочкиопухолевый узел имел нечеткие неровныеграницы, диаметр еговарьировал от 1,0 до 4,8 сантиметров.
Опухолевый узел локализовалсяпреимущественно в корковом веществе почки, поверхность разреза имелабелесовато-желтый вид, лишь в одном случаеобнаруженучастокнекроза.Гистологическаяв массе опухоли былкартинав7случаяхсоответствовала 1 типу папиллярного рака и характеризовалась наличиеммножественных сосочковых структур, образованных мелкими компактнорасположенными клетками, большинство из которых содержали мелкие ядраиналичиемединичныхксантомныхклеток.Раман-флуоресцентноеспектроскопическое исследование центральной части опухолевого узлавыявило две особенности спектров этого типа рака. С одной стороны,максимум флуоресценции наблюдался на частоте рамановского сдвига,соответствующей 1510 см-1, что соответствовало суммарной флуоресценциилипопигментов и флавинов, с другой стороны, рамановские пики, стольхарактерные для светлоклеточного рака, отсутствовали (рис.11.)51АБРисунок 11.
Результаты гистологического и спектроскопическогоисследований образца папиллярного варианта 1 типа ПКР вцентральном участке опухолевого узла. А. Опухолевые клетки снебольшими ядрами образуют множественные сосочковые структуры(степень дифференцировки G1 по Фурману) Окраска гематоксилином иэозином. Ув. Х200. Б. Раман-флуоресцентный спектр, соответствующийцентральной области опухолевого узла. Локальный максимум флуоресценцииобозначен желтой вертикальной линией и соответствует суммарнойфлуоресценции липопигментов и флавинов (1510 см-1).
Рамановские пикиотсутствуют.52Другая особенность этой формы была выявлена при исследованииобразца, полученного из периферической части опухоли, и выражалась впочтиполномсходствеспектроскопическойкакпатогистологической,характеристик(рис.12)затакираман-исключениемтогообстоятельства, что по шкале интенсивности относительных единицфлуоресценциицентруопухолисоответствовалиболеевысокие(22575+1227,7) по сравнению с периферией опухоли (15250+372,68)значения, как локального максимума, так и инициальной флуоресценции –17570+1345,6 и 9050+407,1 соответственно (рис. 13).53АБРисунок 12.
Результаты гистологического и спектроскопическогоисследований образца папиллярного варианта 1 типа ПКР впериферическом участке опухолевого узла. А. Опухолевые клетки снебольшими ядрами образуют множественные сосочковые структуры(степень дифференцировки G1 по Фурману) Окраска гематоксилином иэозином. Ув. Х200. Б. Раман-флуоресцентный спектр, соответствующийпериферической области опухолевого узла. Локальный максимумфлуоресценции обозначен желтой вертикальной линией и соответствуетсуммарной флуоресценции липопигментов и флавинов (1510 см-1).Рамановские пики отсутствуют.54Рисунок 13. Сводный результат спектроскопического исследованияобразца папиллярного варианта 2 типа ПКР.
Локальные максимумыфлуоресценции обозначены желтыми вертикальными линиями. Рамановскиепики отсутствуют.Папиллярный рак, отнесенный ко второму гистологическому типухарактеризовалсявыраженнымспектроскопическимкакморфологическим,разнообразием. Образец,полученныйтакизицентраопухолевого узла, содержал ткань опухоли, представленную сочетаниембесформенных скоплений и компактных гнёзд крупныхэозинофильнойцитоплазмойиклеток с яркойтубулярно-сосочковыхструктур,сформированных мелкими клетками. Рамановская спектроскопия выявиланесколько рамановских пиков, соответствовавших колебаниям молекулгидроксильного радикала (582 см-1), комплекса жирных кислот (1100 см -1) иидентифицировала углеводородную связь липидов и белков на частотерамановского сдвига 2873 см-1. При этом максимум флуоресценциисоответствовал частоте в 2200+2,52 см-1 и был обусловлен флуоресценциейэндогенных порфиринов (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
