Диссертация (1141076), страница 3
Текст из файла (страница 3)
К такому же выводу можно придти, анализируя уровни экспрессии(идентификации) другого представителя группы ингибиторов апоптозасурвивина,которыйвыделяетсяклеткамиопухолейбольшинствалокализаций и фетальных тканей [68].Наиболее распространеннойдиагностическойценностииявляетсяточка зрения очувствительностивиментинавысокой–белкапромежуточных филаментов соединительной ткани, обычно продуцируемогов сосудах и других производных мезенхимы. И действительно, начиная с152007 года [60] бытует мнение об идентификации виментина во всех случаяхсветлоклеточноговариантаПКР,ангиоархитектонику опухолевого узла,имеющегоспецифическуюи её, как правило, повышеннуюваскуляризацию.Аналогичный вывод можно сделать на основании данных о сниженииилиотсутствииэкспрессииЕ-кадгерина(эпителиальногокадгерина),представителя класса молекул клеточной адгезии, обеспечивающего кальцийзависимое гомофильное соединение клеток [84].
Поскольку в большинствезлокачественных опухолей клеточная адгезия резко снижена, наблюдение о еёуменьшении в случае ПКР выглядит убедительным.Особоследует отметить данные осодержаниии экспрессиицитокератинов (CK) – белков промежуточных филаментов цитоскелетаэпителиальных клеток в случае с ПКР [18, 29]. Ткань почки, невовлеченная впатологическийпроцесс(воспалительный,опухолевыйидр.),характеризуется положительной экспрессией СK-7 эпителием дистальныхизвитых канальцев и собирательных трубочек, которая сохраняется и имееттенденцию к повышению при папиллярном и хромофобном вариантах ПКР. Вслучае развития светлоклеточной формы ПКР уровень экспрессии СК-7,наоборот, резко снижается или совсем отсутствует [56]. В настоящее времяпредпринимаются попытки идентификации других типов цитокератинов (СК17-20), обладающих более интенсивной экспрессией по сравнению с СК-7[30, 83], особенно в случаях, когда необходимо провести дифференциальнуюдиагностику между опухолями различной степени зрелости [14].Маркер CD10, получивший название общегоантигена остройлимфобластной лейкемии, является полезным не только для диагностикилейкоза или лимфом, но и для дифференциации различных типов опухолейпочек и ПКР [52].
Большинство светлоклеточных карцином характеризуютсяположительной экспрессией СD10, тогда как в случаях хромофобного ПКРбольшинствоисследователейотмечаютпротивоположнуюилислабоположительную экспрессию маркера в случаях с его эозинофильным16вариантом [64, 84, 106]. Папиллярный вариант ПКРпроявляетсяположительной цитоплазматической экспрессией СD10, интенсивностькоторой может варьировать и, как правило, не зависит от типа папиллярногорака [65] .Висследованиях последних лет, посвященных изучению опухолейпочек,немалаярольотводитсяпаренхиматозно-стромальнымвзаимоотношениям, имеющим место в ткани опухолей.
Стромальные клетки,находящиеся в микроокружении опухоли, не только ускоряют её рост в местепервичной локализации, но и способствуют метастазированию в отдаленныеорганы. Некоторые элементы микроокружения опухолей способствуютэпителиально-мезенхимальной трансформации (ЭМТ) [78]. СветлоклеточныйПКР обладает фенотипом ЭМТ.
Уровни факторов, ассоциированных сэпителиально-мезенхимальнойтрансформацией,такихкакЕ-кадерин,виментин, β-катенин ассоциируются с неблагоприятными изменениями,увеличением частоты рецидивов и сокращением периода выживаемости.Увеличение уровня цитокинов, хемокинов и факторов роста, включаятрансформирующий фактор роста-β, ИЛ6 и фактор роста фибробластовиграют важную роль как медиаторы ЭМТ в раковых клетках. Более того,ЭМТ, способствующая движению клеток, приводит к значительнымизменениям их механических свойств [58].Содержание миофибробластоподобных клеткок (α-SMA) и CD4+ Tлимфоцитов увеличивается при 3 и 4 стадии по Фурману (Ryu, 2010).Интерлейкин 6, выделяющийся CD4+ T, является триггером эпителиальномезенхимальной трансформации в светлоклеточном ПКР и может усиливатьметастазирование опухоли [55, 58, 105].Усиление опухолевого стресса способствует ЭМТ и изменению свойствстволовых клеток, индуцированныхИЛ6 всветлоклеточном ПКР черезсигнальный путь Akt / GSK-3β / β-catenin [58].
В строме опухолей с высокойградациейпоположительныхФурманупоклеток, чтосравнениюскоррелирует с17низкойбольшепрогрессиейα-SMA-опухоли ивыживаемости пациентов. Строма светлоклеточного ПКР также содержитзначительноеколичествоCD4+лимфоцитовспровоспалительнымисвойствами, которые являются главным источником ИЛ 6, однако данные означении плотности воспалительного инфильтрата в прогрессии заболеваниянемногочисленны и противоречивы [55, 80, 96].Механический стресс значительно усиливает индуцированную ИЛ 6эпителиально-мезенхимальную трансформацию раковой клетки и можетвызывать клеточную гибель, такжеусиливать прогрессию опухоли иявляется триггером для деления раковых клеток.Накопление β-катенина вядрах опухолевых клеток способствует ЭМТ и механической трансдукциипри различных раковых заболеваниях, включая карциномы почек.
Как βcatenin, так и CD 44 являются мощными прогностическими биомаркерами,подчас определяющими алгоритмклинической терапии пациентов сопухолями почек, включая светлоклеточный ПКР [58, 120].Электронномикроскопическоеисследованиевкачествеметодадиагностики опухолей почек, в настоящее практически не используется ипредставляет больше теоретический интерес, нежели практический. Несмотря на это, ультраструктурные особенности и различия в морфологиидоброкачественных и злокачественных опухолей почек, определяемые наультраструктурном уровне,имеют ключевое значение в пониманииморфогенеза заболевания, и являются основанием для разработки новыхтехнологий их диагностики и лечения.
В большинстве случаев опухолейпочек, включая светлоклеточный вариант ПКР, на ультраструктурном уровневопухолевых клетках определяется, как правило, увеличенное ядро,повышение ядерно-цитоплазматического индекса, изменение его формы споявлением своеобразных инвагинаций и «выпячиваний» кариолеммы имаргинальнымраспределениемядерногохроматина.Вцитоплазмеопухолевых клеток обнаруживается большое скопление липидов (холестерини его эфиры, фосфолипиды) иредукция органелл [50].обнаруживаютсяразвитымиклеткис18клеточнымиНаряду с этиморганеллами(митохондрии, лизосомы, профили гранулярной эндоплазматической сети) ибольшим количеством гликогена в цитоплазме, при отсутствии липидныхвключений.
При низкой степени дифференцировки опухоли, различаютклетки со скудной цитоплазмой, единичными клеточными органеллами икрупным ядром [28].В исследовании W. Yua и соавт. (2013), посвященному изучению ПКР,отмечены существенные различия между двумя вариантами папиллярногорака почки, выявляемые на ультраструктурном уровне. Так,цитоплазмаопухолевых клеток, относящихся к папиллярному раку 1 типа, былазаполнена большим количеством гранул гликогена и вторичных лизосом свключенными в их состав липидными вакуолями, и содержала единичныеканальцыитрубочкигладкогоэндоплазматическогопапиллярного рака второго типа, напротив, былоретикулума.Дляхарактерно большоеколичество гладкого эндоплазматического ретикулума и митохондрий, ипрактически полное отсутствие липидных включений [116].Для большинства наблюдений хромофобного ПКР опухолевые клетки сэозинофильнойцитоплазмойсодержалимитохондриистубуловезикулярными и тубулоцистическими кристами и были окруженыскоплениями везикулярных структур.
Опухолевые клетки при классическомвариантехромофобнойкарциномысодержалимногочисленныемитохондрии, лишенные тубуловезикул и тубулоцист, а микровезикулы былиединичными [113]. Как при стандартном гистологическом, так и приэлектронномикроскопическомисследовании,сохранялись определенныетрудности в дифференциальной диагностике эозинофильного хромофобногоПКР и онкоцитомы почки в связи с практически идентичным качественнымсоставом опухолевых клеток. До недавнего времени, единственнымдиагностическим критерием, позволяющим диагностировать онкоцитому,являлось обнаружение в клетках данной опухоли цитоплазматическихканальцев [81], однако, недавние работы опровергли этот факт [41, 117].191.3.
Современные возможности рамановской спектроскопии вдиагностике онкологических заболеванийВ 1928 году индийские физики Ч. Раман и К. Кришнан в опытах поизучению рассеяния света в жидкостях открыли явление комбинационногонеупругого рассеяния, используя в качестве источника возбуждающегоизлучения солнечный луч [103]. Неупругое рассеяние — столкновениечастиц,сопровождающеесяизменениемихвнутреннегосостояния,превращением в другие частицы или дополнительным рождением новыхчастиц. Излучение, рассеиваемое молекулами, содержит фотоны той жечастоты, что и падающее излучение, а также некоторое количество фотонов сизменённой или смещённой частотой.
Появление дополнительных компонентв спектре обусловлено взаимодействием падающего излучения с молекуламиоблучаемоговещества,которымсвойственныколебаниянастрогоопределённых частотах [10, 14]. В дальнейшем данный эффект получилназвание «эффект Рамана», а метод на его основе – «рамановскаяспектроскопия».Врамановскойспектроскопииобразецоблучаетсямонохроматическим светом (источником обычно является лазер). Большаячасть рассеянного образцом излучения будет иметь ту же частоту, что ипадающая – процесс известен как Рэлеевское рассеяние. Тем не менее,некоторое количество излучения, рассеянного образцом, примерно одинфотон из миллиона (0.0001 %) – будет иметь частоту, смещённую поотношению к частоте исходного излучения лазера [20].
Поскольку частотыколебаний определяются характером внутри- и межмолекулярных связей, тоспектр уникален для каждого химического соединения и зависит от егоаллотропной формы и агрегатного состояния. Таким образом, спектроскопиякомбинационного рассеяния света (рамановская спектроскопия) позволяетопределять элементный состав, аллотропную модификацию и агрегатноесостояние вещества.20Методика рамановской спектроскопии нашла широкое применение вразличных областях науки и промышленности. В медицине - для анализавзаимодействия медицинских препаратов с живыми клетками; выявленияраннихстадийзлокачественныхновообразований;диагностикиатеросклероза, воспалительных заболеваний различных тканей и органов ит.д.
[42, 44, 69].Рамановская спектроскопия содержит ряд преимуществ по сравнению сдругими методами диагностики: простота пробоподготовки (не требуетсяотмывка, лизис клеток, разделение белков, выделение ДНК/РНК); большойобъём получаемой информации; неразрушающий характер анализа - нет,необходимости растворять твёрдые тела, прессовать таблетки, прижиматьхимическуюструктуруобразца;методпозволяетполучатькакколичественную, так и качественную информацию об образце; спектральныйдиапазон не зависит от изучаемых колебательных особенностей, а такжепозволяет изучать колебательные состояния, связанные с частотами в дальнейинфракрасной области.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
