Диссертация (1141076), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Результаты гистологического исследования образцахромофобного эозинофильного варианта ПКР.А. Крупные мономорфные опухолевые клетки с яркой эозинофильнойцитоплазмой. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. Х400. Центропухолевого узла. Б. Периферия опухолевого узла. Окраска гемотоксилин иэозин. Ув.Х100.Спектр участка интактной ткани почки, находящегося на максимальномудалении от опухолевого узла, тоже во многом походил на спектры опухоли,однако имел различия по значению начальной флуоресценции и наличиютолько одного локального максимума флуоресценции (Рис.23).66Рисунок 23.
Сводный результат спектроскопического исследованияобразца хромофобного варианта ПКР эозинофильного типа. Локальныемаксимумы флуоресценции обозначены желтыми вертикальными линиями.3.3. Результаты морфологического и спектроскопическогоисследований образцов контрольной группы.Как уже было отмечено в разделе, касающемся описания материала иметодов исследования, образцы ткани почек были получены у лиц, причинасмерти которых была не связана с почечной патологией. Отсутствиепатологии почек было подтверждено при жизни больных как клиническимиданными,такилабораторнымиисследованиями,предусмотреннымиСтандартами обследования и лечения больных с той или иной патологией.При макроскопическом исследовании почки характеризовались обычнымиразмерами и формой. Капсула во всех случаях снималась легко, обнажаягладкую поверхность почки.
На разрезе граница коркового и мозговоговеществабылачеткой,интермедиарнаязонабезособенностей.Гистологически во всех исследованных случаях признаки патологии насветооптическом уровне отмечены не были (Рис. 24). Спектроскопическиобразцыпочекконтрольнойгруппыхарактеризовалисьвыраженной«двугорбой» формой спектра, свойственной нормальным неповрежденным67тканям. Показатели начальной флуоресценции соответствовали высокимзначениям интенсивности и располагались в промежутке от 36000 до 42000по оси относительных единиц. Локальные максимумы флуоресценции,обусловленные суммарной флуоресценцией липопигментов и флавинов иэндогенных порфиринов характеризовались относительно невысокимизначениями(970+9,42см-1,1130+10,25см-1и2000+13,54см-1соответственно) (Рис.
25).АБРисунок 24. Результаты гистологического исследования сохраннойпочечной ткани из разных участков образца из группы контроля.А. Сохранные участки в пределах нормы. Окраска гематоксилином иэозином. Ув.Х100. Б. Другая область исследования. Окраска гематоксилиноми эозином. Ув.Х10068Рисунок 25. Сводный результат спектроскопического исследованияобразца из группы контроля из 3х участков (А, В, С).
Локальныемаксимумы флуоресценции обозначены желтыми вертикальными линиями исоответствуют точкам: 970 см-1, 1130 см-1 (суммарная флуоресценциялипопигментов и флавинов) и 2000 см-1 (флуоресценция эндогенныхпорфиринов).3.4. Анализ эффективности раман-флуоресцентной спектроскопии вдиагностике почечно-клеточного рака.Анализ эффективности раман-флуоресцентной спектроскопии в диагностикепочечноклеточного рака оценивали с помощью метода проекций налатентные структуры с последующим дискриминантным анализом (PLS-DA).В результате проведения метода PLS-DA была построена аналитическаямодель,согласнокоторойбылоосуществленоразделениераман-флуоресцентных спектров образцов группы контроля и образцов рака почкина категории «рак» и «норма» (Рис.
26). Точность разделения составила95,3%, при этом чувствительность и специфичность метода составили 89,2%и 100%, соответственно. Сходство некоторых спектров различных вариантовпочечноклеточного рака обусловлено69общностью их конфигурации,связанной с воздействием лазерного луча на участки стромы или сосудистыхстенок, которые во всех тканях имеют общие структурные компоненты.Рисунок 26. Разделение спектров образцов различных вариантов ПКР иобразцов группы контроля при помощи метода PLS-DA.70ГЛАВА 4.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННОГОИССЛЕДОВАНИЯПланируя настоящее исследование, нами всесторонне и тщательно былрассмотрен существующий в настоящее время алгоритм дооперационнойдиагностики различных опухолей почек. В результате было установлено, чтонесмотря на кажущееся обилие различных инструментальных, лабораторных,морфологических методов исследования, ни один из них не даетисчерпывающего и окончательногоопухоли,заключения о природе и гистогенезестепени её зрелости, распространенности. Значительная частьприменявшихся ранее методов и технологий в настоящее время исчерпаласвой диагностический ресурс.Вышедшее в 2011 году руководство «Опухоли почки.
Медицинскаядиагностика и генетика» под редакцией Ю.Ю. Андреевой, Г.А. Франказначительно восполнило существовавший пробел в диагностике, предложивболее или менее полное описание и характеристику различных опухолейпочки в контексте современных классификаций [8]. Вместе с темнеобходимость получения быстрого результата в режиме реального временипобуждают исследователей к поиску новых эффективных диагностическихтехнологий. Исходя из этого, нами была предпринята попытка определитьроль и значение метода рамановской спектроскопии в дооперационной, авпоследствии и интраоперационной диагностике некоторых опухолей почек.Механизмрамановскойспектроскопиисводитсяктому,чтопривзаимодействии лазерного света с изучаемой тканью происходят процессырассеяния света, связанные с наличием в органических веществах большогоколичества колебательных и вращательных энергетических подуровней.
Вдальнейшем все рассеянные фотоны регистрируются CCD-детекторомрамановского спектрометра и спектр рассеянного излучения в видезависимости интенсивности от длины волны рассеянного света отображаетсякомпьютером. Поскольку в органических молекулах имеется большое71количество вращательных и колебательных степеней свободы, то онипроявляются в спектре рамановского рассеяния света в виде набора линий,каждаяизкоторыххарактеризуетсяиндивидуальнымспектральнымположением и относительной интенсивностью [99].
Именно этот наборспектральных характеристик дает возможность говорить о рамановском«отпечатке пальцев» органической молекулы и позволяет проводить анализвеществирасшифровыватьсоставихкомбинаций.Рамановскаяспектроскопия имеет значительные преимущества по сравнению с другимидиагностическими технологиями. Важнейшими из них являются простотапробоподготовки и больший объем получаемой информации. Рамановскаяспектроскопия относится к технологиям, основанным нарассеянии света,поэтому все, что требуется для сбора спектра – это направить падающий лучточно на образец, а затем собрать рассеянный свет.
Данный вид исследованиятканей не требует специальной подготовки образца и нечувствителен кполосам поглощения органических веществ, так как рамановский эффектнаблюдается в рассеянном свете от образца, а не в спектре поглощенияобразцом света. Это свойство рамановской спектроскопии облегчает процесснепосредственного измерения как в твердых образцах, так и жидких игазообразных средaх [95].
Кроме того, рамановская спектроскопия сочетает всебе по существу два хотя и родственных, но отличающихся по физическойсути, метода флуоресценции и спектроскопии комбинационного рассеяния, иэто обстоятельство расширяет её диагностические возможности. Исходя ихэтого, при оценке регистрируемых с образца почечной ткани значений, намибыли приняты во внимание и использованы следующие показатели: общийвид и особенности раман-флуоресцентного спектра; значения начальной(инициальной) интенсивности и локального максимума флуоресценции, атакжесуммарнойиостаточнойфлуоресценциивыражающиесявотносительных единицах флуоресценции; оценка рамановских пиков наспектре,соответствующихколебанияммолекулразличныхвеществ,патогномоничных для изучаемых опухолей и значение рамановского сдвига,72регистрируемого на оси абсцисс.
Таким образом, даже в отсутствиирамановских пиков представляется возможным решить поставленную задачупо определению существа той или иной опухоли.В основу работы положено обследование 85 пациентов с почечноклеточнымраком, находившихся на обследовании и лечении в НИИ Уронефрологии ирепродуктивного здоровья Первого МГМУ им. И.М. Сеченова МинздраваРоссии в период с мая 2014 г. до ноября 2017 г.Раман-флуоресцентнаяспектроскопия осуществлялась на операционном материале, полученном входечастичнойрезекциипочкиилирадикальнойнефрэктомии,предварительно фиксированым в 10% растворе формалина до проведенияморфологического исследования.
Далее, на том же материале, проводилосьгистологическое, гистохимическое и иммуногистохимическое исследования,в ходе которых было отобрано несколько вариантов ПКР - светлоклеточный,папиллярный и хромофобный, каждый из которых был отнесен к отдельнойисследуемой группе. Помимо образцов опухолевой ткани, соответствующейПКР, аналогичному алгоритму исследования подвергали участки визуальнонеизмененной ткани почки в максимальном отдалении от опухолевого узла.Контрольную группу составили образцы почечной ткани, полученные от 10лиц, умерших в возрасте до 40 лет от несчастного случая, клинически иморфологически не имевших признаков почечной патологии.Раман-флуоресцентныехарактеризовалисьспектрыумереннымиобразцовзначениямисветлоклеточногоначальнойрака(инициальной)флуоресценции, нарастающей по направлению от центра к периферииопухоли (3950 и 4250 отн.ед.
соответственно), в то же время интенсивностьлокального максимума имела, наоборот,тенденцию к снижению, как позначению интенсивности (8300 и 7000 отн.ед. соответственно), так и почастоте рамановского сдвига (2497 см-1 и 2250 см-1 соответственно). Однаколокальный максимум в обоих случаях был обусловлен суммарнойфлуоресценциейнакопленияэндогенныхэндогенныхпорфиринов.порфиринов73вПричиныпатологическиповышенногоизмененныхбиологических тканях вызывает в настоящее время много споров.Увеличениеконцентрациипорфириновможетобъяснятьсяжизнедеятельностью анаэробной микрофлоры в тканях, либо общимнарушением цикла синтеза гема в организме и переносом порфиринов стоком крови. Большая часть авторов, основываясь на фактах значительногонакопления порфиринов в эмбриональных и злокачественных опухолевыхтканях, полагает, что синтез порфиринов происходит непосредственно вклетках, обладающих повышенной пролиферативной активностью.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
