Диссертация (1140935), страница 20
Текст из файла (страница 20)
С использованием корреляционного анализа выявлено наличиеобратной средней силы связи между дозой ПТГ и количеством интактных клеток,123прямой средней силы связи между дозой ПТГ и количеством клеток с раннимипризнаками апоптоза (таблица 55).Известно, что ПТГ через взаимодействие с рецепторами на поверхностилимфоцитовприводитвнутриклеточныхкактивациисигнальныхGs-путей,виGq-белок-ассоциированныхтомчислесвязанныхсцАМФ/протеинкиназой А, фосфолипазой С, протеинкиназой С, ионизированнымкальцием [322].
Полагаем, что протеинкиназа С-зависимый путь, повышениеконцентрации ионизированного кальция в цитоплазме лимфоцитов приводят кснижению клеточной пролиферации и активации апоптоза.Таким образом, установленные ранее при ХПН в клинических и вэкспериментальных условиях, а также при экспериментальном гиперпаратиреозефакты активации функциональной активности нейтрофилов, активации гибелилимфоцитов периферической крови, изменения цитокинового профиля в крови вопределенноймереобусловленыпрямымиэффектамипоказателигибелиПТГнаиммунокомпетентые клетки.Таблица54-ВлияниеПТГналимфоцитовэкспериментальных условиях in vitro (M±m)ПоказателиAnnexin-5-FITC–/7-Группа 1Группа 2Группа 3Группа 4Контроль+ ПТГ 50+ ПТГ 500+ ПТГ 5000(n=10)(n=10)(n=10)(n=10)91,74±0,9891,82±0,9491,34±0,9890,16±0,99AAD–, % клетокAnnexin-5-FITC+/7-р<0,057,44±0,937,42±0,88AAD–, % клетокAnnexin-5-FITC+/7-0,56±0,060,52±0,067,96±0,998,96±0,94р<0,05р<0,050,42±0,060,68±0,05AAD+, % клетокПримечание.р-показательр<0,05значимостиразличийприконтрольной группой по парному критерию Вилкоксона.сравнениисв124Таблица 55 - Корреляция между дозой ПТГ и показателями гибели лимфоцитов вэкспериментальных условиях invitro (M±m)ПоказателиКоэффициентЗначение ркорреляции СпирменаAnnexin-5-FITC–/7-AAD–, % клетокR= –0,37<0,05Annexin-5-FITC+/7-AAD–, % клетокR= 0,38<0,05Annexin-5-FITC+/7-AAD+, % клетокR= 0,19>0,05На следующем этапе работы проведено исследование влияния блокаторакальциевыхканаловнаиммунныйстатусприэкспериментальномгиперпаратиреозе.3.4.
Влияние амлодипина на иммунный статус при экспериментальномгиперпаратиреозеРезультаты предыдущих исследований позволили продемонстрироватьсвязьизмененийиммунногостатусаприХПНвклиническихивэкспериментальных условиях с повышением концентрации ПТГ, общего кальцияв крови. Направление и выраженность изменений врожденного иммунитета,адаптивногоиммунитетаприХПНсопоставимыстаковымиприэкспериментальном изолированном гиперпаратиреозе. Другими исследователямипоказано, что иммунный статус при ХПН в определенной мере обусловленразвитием вторичного гиперпаратиреоза и сопутствующими изменениямифосфорно-кальциевого гомеостаза, в частности, указывают на роль повышенияконцентрации кальция в цитоплазме лимфоцитов в патогенезе лимфоцитопении[320].Механизмактивациифункциональнойактивностифагоцитовпериферической крови связывают с Ca2+-зависимым повышением активностиаденилатциклазы, транскрипционных факторов Spi1/PU.1, AP-1/FOS, геновкальгранулинов S100 - S100A8 и S100A9, генов CCL2/MCP-1, CD14, FOLR2,интенсивности углеводного обмена, захвата и утилизации кислорода и другими125механизмами [145].
В связи с вышеизложенным, вполне обоснованным длякоррекции изменений иммунного статуса при ХПН может быть применениеблокаторов кальциевых каналов. Выбор амлодипина среди последних обусловленпродолжительным периодомегополувыведения,чтопозволяетвводитьамлодипин один раз в сутки для поддержания необходимой концентрации вкрови.
Первоначально исследовали влияние амлодипина на иммунный статус инекоторыепараметрыегоопределяющиеприэкспериментальномгиперпаратиреозе. Животным с гиперпаратиреозом, начиная с 120 сутокэксперимента, ежедневно вводили блокатор кальциевых каналов в составепрепарата «Амлодипин-Тева» (МНН: амлодипин, Израиль) в дозе 0,25 мг/кг всутки в течение 7 дней.3.4.1. Влияние амлодипина на фосфорно-кальциевый гомеостаз приэкспериментальном гиперпаратиреозеИсследование концентрации ПТГ, общего кальция и неорганическогофосфора в крови показало, что амлодипин не оказывает влияния на этипоказатели; концентрация ПТГ и неорганического фосфора в плазме кровиостается повышенной в сравнении с контрольной группой (таблица 56).
Стоитотметить, что амлодипин не является антагонистом ионов кальция, а лишьблокирует его поступление внутрь клеток через медленные кальциевые каналы. Всвязи с этим, амлодипин не оказывает влияния на содержание кальция в крови иразвитие остеопороза и других сопутствующих состояний. Напротив, применениеблокаторов кальциевых каналов, по данным некоторых исследователей, улучшаеткостный метаболизм при экспериментальном остеопорозе [162].126Таблица 56 - Влияние амлодипина на показатели фосфорно-кальциевогогомеостаза при экспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2ИнтактныеГиперпаратиреоз Гиперпаратиреоз+(n=10)амлодипин2,19±0,052,29±0,03(n=10)2,25±0,031,58±0,042,13±0,141,90±0,11р1-2<0,05р1-3<0,05243,71±35,80234,40±56,45р1-2<0,001р1-3<0,005(n=10)Общий кальций,Группа 3ммоль/лНеорганическийфосфор, ммоль/лПТГ, пг/мл79,60±1,12Примечание.
р - показатель значимости различий между группами покритериям Краскела-Уоллиса и Манна-Уитни3.4.2. Влияние амлодипина на показатели врожденного и адаптивногоиммунитета при экспериментальном гиперпаратиреозеПрименениеприводиткамлодипинауменьшениюприэкспериментальномсодержаниявгиперпаратиреозеотносительныхвеличинахпалочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, увеличению количествалимфоцитов и моноцитов в периферической крови (таблица 57). Пересчетпоказателей лейкоцитарной формулы на абсолютные значения установилстатистически значимое увеличение количества лимфоцитов и моноцитов впериферической крови (таблица 58).Результатыфункциональнойисследованияактивностивлиянияамлодипинанейтрофиловпринапоказателиэкспериментальномгиперпаратиреозе представлены в таблице 59.
Выявлено, что применениеамлодипина повышает интенсивность фагоцитоза, активность спонтанного НСТтеста, снижает функциональный резерв нейтрофилов, оцениваемый по активности127НСТ-теста.Интенсивностьфагоцитоза,фагоцитарноечисло,активностьспонтанного НСТ-теста, функциональный резерв становятся выше, чем в группеконтроля животных, а интенсивность спонтанного и индуцированного НСТ-тестасохраняются повышенными.Таблица 57 - Влияние амлодипина на количественный состав лейкоцитов впериферическойкровиприэкспериментальномгиперпаратиреозеотносительных величинах (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2Группа 3Интактные Гиперпаратиреоз Гиперпаратиреоз+(n=6)амлодипин1,94±0,611,00±0,26(n=6)1,00±0,26Базофилы, %00,17±0,170,17±0,17Нейтрофилы2,78±0,537,67±0,563,83±0,48р1-2<0,05р2-3<0,0547,67±3,2234,17±3,84р1-2<0,05р2-3<0,0555,33±3,1638,00±3,80р1-2<0,05р2-3<0,0537,50±3,2550,83±3,90р1-2<0,05р2-3<0,056,00±0,5210,00±0,37(n=18)Эозинофилы, %п/ядерные, %Нейтрофилы31,00±1,42с/ядерные, %Нейтрофилы всего, %Лимфоциты, %Моноциты, %33,77±1,2357,61±1,196,67±0,86р2-3<0,05Примечание.
р - показатель значимости различий между группами покритериям Краскела-Уоллиса и Манна-Уитнив128Таблица 58 - Влияние амлодипина на количественный состав лейкоцитов впериферической крови при экспериментальном гиперпаратиреозе в абсолютныхвеличинах (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2Интактные Гиперпаратиреоз(n=18)Группа 3Гиперпаратиреоз+(n=6)амлодипинЛейкоциты, • 10 /л8,34±0,986,18±0,81(n=6)7,68±0,85Эозинофилы, • 109/л0,11±0,140,06±0,020,09±0,0300,01±0,010,02±0,020,26±0,060,46±0,050,30±0,062,54±0,313,03±0,562,59±0,342,79±0,343,49±0,612,89±0,374,77±0,542,23±0,203,91±0,59р1-2<0,05р2-3<0,050,38±0,080,76±0,089Базофилы, • 109/лНейтрофилып/ядерные, • 109/лНейтрофилыс/ядерные, • 109/лНейтрофилы всего, •109/лЛимфоциты, • 109/лМоноциты, • 109/л0,66±0,14р2-3<0,05Примечание.
р - показатель значимости различий между группами покритериям Краскела-Уоллиса и Манна-Уитни129Таблица 59 - Влияние амлодипина на показатели функциональной активностинейтрофилов при экспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиАктивностьГруппа 1Группа 2Группа 3ИнтактныеГиперпаратиреозГиперпаратиреоз+(n=18)(n=6)амлодипин33,22±2,7629,00±2,89(n=6)32,67±2,490,69±0,070,83±0,091,23±0,05фагоцитоза, %Интенсивностьфагоцитоза, у.е.р1-3<0,05р2-3<0,05Фагоцитарное число,2,05±0,093,16±0,62у.е.НСТ-тест спонт.,3,84±0,29р1-3<0,059,94±0,9910,00±0,63активность, %16,67±0,71р1-3<0,05р2-3<0,05НСТ-тест спонт.,0,16±0,020,24±0,010,27±0,02р1-2<0,05р1-3<0,0519,28±1,9819,33±0,6120,33±0,760,27±0,020,34±0,010,36±0,03р1-2<0,05р1-3<0,051,98±0,171,23±0,06интенсивность, у.е.НСТ-тест инд.,активность, %НСТ-тест инд.,интенсивность, у.е.Функц.
резерв (акт-ть2,07±0,23НСТ-теста)р1-3<0,05р2-3<0,05Функц. резерв (инт-ть1,84±0,161,45±0,04НСТ-теста)1,34±0,09р1-3<0,05Примечание. р - показатель значимости различий между группами покритериям Краскела-Уоллиса и Манна-Уитни130Исследование влияния амлодипина на показатели адаптивного иммунногоответа показало статистически значимое увеличение интенсивности реакции ГЗТи количества АОК в селезенке (таблица 60). Отметим, что после примененияамлодипина интенсивность реакции ГЗТ и количество АОК в селезенкедостигают значений в группе интактных животных.
Данный факт позволяетконстатрировать восстановление Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа.Применениеамлодипинаприэкспериментальномгиперапаратиреозестатистически значимо изменяет субпопуляционный состав лимфоцитов в крови,в частности, увеличивается содержание CD3+ клеток (Т-лимфоциты) до значенияконтрольнойгруппыиувеличиваетсяколичествоCD45RA+клеток(преимущественно В-лимфоциты), не достигая уровня контрольной группы(таблица 61).Такимобразом,применениеамлодипинаприэкспериментальномгиперпаратиреозе приводит к активации поглотительной, НСТ-редуцирующейспособности, снижению функционального резерва нейтрофилов периферическойкрови, восстановлению количества лимфоцитов в крови, в том числе, CD3+,CD45RA+, восстановлению показателей Th1-зависимого и Th2-зависимогоиммунного ответа.Полагаем, что обнаруженные иммунотропные эффекты амлодипина можнообъяснитьизменениемконцентрацииионовкальциявцитоплазмеиммунокомпетентных клеток [41, 328].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
