Диссертация (1140935), страница 16
Текст из файла (страница 16)
р - показатель значимости различий между группами покритерию Манна-Уитни.Для определения наличия и характера связи между показателями гибелилимфоцитов и количеством лимфоцитов в крови, содержанием продуктов ПОЛ влимфоцитах при экспериментальной ХПН проведен корелляционный анализ(таблица 30).
Выявлено, что количество интактных лимфоцитов (FITC–/7-AAD–)имеет прямую средней силы связь с общим количеством лимфоцитов,количеством Т-лимфоцитов (CD3+), В-лимфоцитов (CD45RA+). Количестволимфоцитов с поздними признаками апоптоза и признаками некроза (FITC+/7AAD+) имеет отрицательную средней силы связь с общим количествомлимфоцитов, количеством Т-лимфоцитов (CD3+) и В-лимфоцитов (CD45RA+) ипрямую связь с содержанием вторичных продуктов ПОЛ в лимфоцитах. Выявленаположительная связь средней силы между содержанием лимфоцитов с раннимипризнаками апоптоза (FITC+/7-AAD–) и концентрацией вторичных продуктовПОЛ в изопропанольной фракции лимфоцитов. Таким образом, по мереувеличения количества лимфоцитов с поздними признаками апоптоза ипризнакаминекроза(FITC+/7-AAD+)уменьшаетсяобщееколичестволимфоцитов, Т-лимфоцитов (CD3+) и В-лимфоцитов (CD45RA+). Кроме того,выявленные связи демонстрируют, что по мере увеличения концентрации96вторичных продуктов ПОЛ в изопропанольной фракции липидного экстракталимфоцитов нарастает количество лимфоцитов с поздними признаками апоптозаи признаками некроза.Таблица 30 - Корреляционная матрица между содержанием продуктов ПОЛ визопропанольной фракции лимфоцитов и показателями адаптивного иммунногоответа и апоптоза лимфоцитов в крови крыс с экспериментальной ХПНПоказателиAnnexin-5-Annexin-5-Annexin-5-FITC–/7-AAD–, FITC+/7-AAD–, FITC+/7-AAD+,% клеток% клеток% клетокЛимфоциты, • 109/лR= 0,70R= 0,10R= -0,41CD3+, 109/лR= 0,51R= -0,20R= -0,67CD45RA+, 109/лR= 0,50R= -0,21R= -0,50ДК в изопропан.
фракцииR= -0,15R= 0,26R= 0,29R= -0,10R= 0,39R= 0,45R= -0,05R= 0,25R= 0,23лимфоцитов, е.и.о.КД и СТ в изопропан.фракции лимфоцитов,е.и.о.ШО в изопропан. фракциилимфоцитов, е.и.о.Примечание. Указаны значения коэффициента корреляции Спирмена.Полужирным шрифтом выделены статистически значимые связи.3.2.6. Показатели фосфорно-кальциевого гомеостаза при экспериментальнойхронической почечной недостаточностиРанеенамипродемонстрированаассоциациямеждупоказателямииммунного статуса и концентрацией ПТГ в крови у больных ХПН, находящихсяна гемодиализе, что в определенной мере демонстрирует участие ПТГ ивторичного гиперпаратиреоза в формировании иммунного статуса при ХПН.
В97условияхэкспериментальнойХПНпроведенаналогичныйкомплексисследований фосфорно-кальциевого гомеостаза и его предполагаемого участия вформировании иммунного статуса.Результаты исследования концентрации общего кальция, неорганическогофосфора и ПТГ в крови при экспериментальной ХПН представлены в таблице 31.Выявлено статистически значимое по сравнению с группой контроля повышениеконцентрации в крови общего кальция, неорганического фосфора и ПТГ.Обнаруженные изменения кальциево-фосфорного обмена характерны дляХПН:снижениеколичествафункционирующихнефроновприводиткуменьшению выведения избыточного количества поступающих с пищейфосфатов, в результате накопления которых происходит усиление выработки ПТГпаращитовидными железами.
В связи с уменьшением количества нефронов впочках повышения образования активной формы витамина Д под влиянием ПТГне происходит, поэтому концентрация общего кальция в крови повышаетсятолько через усиление резорбции костной ткани, что в свою очередь еще болееповышает концентрацию неорганического фосфора в крови, развивается«порочный круг», характерный для вторичного гиперпаратиреоза.Ранее было продемонстрировано, что у больных ХПН, находящихся напрограммном гемодиализе, признаками вторичного гиперпаратиреоза являютсяувеличение концентрации ПТГ и неорганического фосфора в крови.Таблица 31 - Показатели фосфорно-кальциевого гомеостаза в периферическойкрови при экспериментальной ХПН (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2Л/оперир.ХПН (n=10)Значение р(n=8)Общий кальций, ммоль/л2,21±0,062,47±0,01<0,05Неорганический фосфор, ммоль/л1,59±0,061,90±0,13<0,05 (WW)ПТГ, пг/мл79,50±1,07143,40±22,62<0,01Примечание.
р - показатель значимости различий между группами покритериям Манна-Уитни и Вальда-Вольфовитца.98Таблица 32 - Корреляционная матрица между показателями врожденного и адаптивногоиммунитета,концентрациями ПТГ, общего кальция и фосфора вкрови крыс сэкспериментальной ХПНПоказателиПТГ,ОбщийНеорганическийпг/млкальций вфосфор всыворотке,сыворотке,ммоль/лммоль/лЛейкоциты, • 109/лR= -0,21R= -0,25R= -0,15Нейтрофилы п/ядерные, • 109/лR= -0,41R= -0,30R= -0,22Нейтрофилы с/ядерные, • 109/лR= -0,30R= -0,32R= -0,25Нейтрофилы всего, • 109/лR= -0,30R= -0,35R= -0,22Лимфоциты, • 109/лR= -0,70R= -0,60R= -0,41Моноциты, • 109/лR= -0,60R= -0,45R= -0,52Активность фагоцитоза, %R= 0,31R= 0,26R= 0,48Интенсивность фагоцитоза, у.е.R= 0,32R= 0,22R= 0,42Фагоцитарное число, у.е.R= 0,31R= 0,19R= 0,21НСТ-тест спонт., активность, %R= 0,41R= 0,11R= 0,36НСТ-тест спонт., индексR= 0,52R= 0,32R= 0,30НСТ-тест инд., активность, %R= 0,45R= 0,10R= 0,37НСТ-тест инд., индексR= 0,56R= 0,05R= 0,12ГЗТ, млR= -0,30R= -0,29R= -0,10АОК, • 106 ЯСКR= -0,23R= -0,26R= -0,12CD3+, • 109/лR= -0,50R= -0,50R= -0,30CD45RA+, • 109/лR= -0,90R= -0,45R= -0,31Annexin-5-FITC–/7-AAD–, % клетокR= -0,21R= -0,29R= -0,21Annexin-5-FITC+/7-AAD–, % клетокR= 0,31R= 0,15R= 0,30Annexin-5-FITC+/7-AAD+, % клетокR= 0,46R= 0,37R= 0,05Примечание.
Указаны значения коэффициента корреляции Спирмена. Полужирнымшрифтом выделены статистически значимые связи.Продемонстрирована корелляция между концентрацией ПТГ в крови ипоказателями иммунного статуса. На данном этапе исследования проведен99корелляционный анализ между показателями иммунного статуса и концентрациейПТГ, общего кальция и неорганического фосфора в крови у крыс с ХПН (таблица32).Выявлено, что концентрация ПТГ в крови имеет отрицательную связь сколичествомвпериферическойкровимоноцитов,общимколичествомлимфоцитов, количеством CD3+ и CD45RA+ клеток.
Концентрация ПТГ в кровиимеет положительную средней силы связь с количеством лимфоцитов с позднимипризнаками апоптоза и некроза, НСТ-редуцирующей способностью нейтрофилов.Концентрация общего кальция в сыворотке крови имеет отрицательную среднейсилы связь с общим количеством лимфоцитов и количеством CD3+лимфоцитов.Таким образом, при экспериментальной ХПН выявлена связь междуизменениями иммунного статуса и концентрацией ПТГ, общего кальция в крови.Для изучения изолированной роли высокой концентрации в крови ПТГ исопутствующихизмененийконцентрациивкровиобщегокальцияинеорганического фосфора, характерных для вторичного гиперпаратиреоза приХПН, в патогенезе изменений иммунного статуса следующий фрагмент работывыполнен при моделировании гиперпаратиреоза у крыс.3.3.
Патогенез изменений иммунного статуса при экспериментальномгиперпаратиреозе3.3.1. Фосфорно-кальциевый гомеостаз при экспериментальномгиперпаратиреозеМоделированиеизолированногогиперпаратиреозавлиянияПТГипроведеносопутствующихсцельюизмененийизученияфосфорно-кальциевого обмена в организме на иммунный статус. Первоначально проведенанализнескольких вариантов модели экспериментального гиперпаратиреоза.Хирургический вариант с трансплантацией крысам нескольких аллогенныхпаращитовидных желез от других крыс в связи с высокой вероятностью развития100посттрансплантационного иммунного ответа не приемлем, как и моделированиегиперпаратиреоза с помощью диеты с низким содержанием кальция, что чреваторазвитиемгипокальциемическогосудорожногосиндромаинарушенийсердечного ритма [69, 148]. Нами выбрана модель гиперпаратиреоза у крыс пометоду Draper H.H.
[111]. Эта модель подтверждена китайскими исследователямиморфологически с помощью электронной микроскопии срезов паращитовидныхжелез [53].Гиперпаратиреоз у крыс моделировали путем содержания животных насинтетической гиперфосфатной смеси (0,6% кальция и 4,2% фосфора) в течение120 дней. Изменения концентрации общего кальция в сыворотке крови у крыс сэкспериментальным гиперпаратиреозом не выявлено, статистически значимоповышается концентрация в сыворотке крови неорганического фосфора,увеличивается концентрация ПТГ в сыворотке крови при сравнении сконтрольной группой (таблица 33).
Полученные данные подтверждают развитие укрыс гиперпаратиреоза. Индуцированная диетой гиперфосфатемия приводит кусилению продукции остеобластами фактора роста фибробластов 23, который, всвою очередь, уменьшает образование активной формы витамина Д в почках, чтопо принципу обратной связи приводит к усилению продукции ПТГ [159].Таблица33-Показателифосфорно-кальциевогогомеостазаприэкспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2Значение рИнтактныеГиперпаратиреоз(n=10)(n=10)Общий кальций, ммоль/л2,19±0,052,29±0,03>0,05Неорганический фосфор, ммоль/л1,58±0,042,13±0,14<0,05ПТГ, пг/мл79,60±1,12243,71±35,80<0,001Примечание.
р - показатель значимости различий между группами по критериюМанна-Уитни.1013.3.2. Показатели врожденного и адаптивного иммунитета приэкспериментальном гиперпаратиреозеПриэкспериментальномгиперпаратиреозев периферическойкровиизменяется количественный состав лейкоцитов. В относительных величинах вкрови статистически значимо увеличивается содержание нейтрофилов за счетпалочкоядерных и сегментоядерных форм, снижается содержание лимфоцитов(таблица 34). В абсолютных значениях по сравнению с группой контроля в двараза снижается количество лимфоцитов в крови (таблица 35).При оценке функционального состояния нейтрофилов в периферическойкрови статистически значимо увеличивается интенсивность спонтанного ииндуцированногоНСТ-теста.Увеличениеактивностииинтенсивностиспонтанного НСТ-теста происходит пропорционально увеличению активности иинтенсивности индуцированного НСТ-теста, поэтому функциональный резервнейтрофилов по показателям НСТ-теста значимо не изменяется.
Нами необнаружено достоверных изменений показателей поглотительной способностинейтрофилов периферической крови (таблица 36).У крыс с экспериментальным гиперпаратиреозом снижается интенсивностьреакции ГЗТ и уменьшается количество АОК в селезенке, как в абсолютныхзначениях, так и при пересчете на 106 ЯСК (таблица 37). Угнетение адаптивногоиммунного ответа можно, в том числе, объяснить уменьшением количестваэффекторовTh1-иTh2-зависимогоиммунногоответа.Действительно,исследование субпопуляционного состава лимфоцитов показало уменьшениеконцентрации CD3+ и CD45RA+ лимфоцитов в периферической крови крыс сэкспериментальным гиперпаратиреозом (таблица 38).Таким образом, при экспериментальном гиперпаратириреозе наблюдаетсяактивация НСТ-редуцирующей способности нейтрофилов в периферическойкрови, снижается количество лимфоцитов в крови, в том числе CD3+ и CD45RA+,угнетается Th1- и Th2-зависимый иммунный ответ.102Таблица 34 - Количественный состав лейкоцитов в периферической крови приэкспериментальном гиперпаратиреозе в относительных величинах (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2ИнтактныеГиперпаратиреоз(n=18)(n=6)1,94±0,611,00±0,26>0,0500,17±0,17>0,05Нейтрофилы п/ядерные, %2,78±0,537,67±0,56<0,05Нейтрофилы с/ядерные, %31,00±1,4247,67±3,22<0,05Нейтрофилы всего, %33,77±1,2355,33±3,16<0,05Лимфоциты, %57,61±1,1937,50±3,25<0,05Моноциты, %6,67±0,866,00±0,52>0,05Эозинофилы, %Базофилы, %Значение рПримечание.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
