Диссертация (1140935), страница 18
Текст из файла (страница 18)
В изопропанольной фракции липидного экстракталимфоцитов в абсолютных значениях повышается концентрация первичных,109вторичных и конечных продуктов ПОЛ, при пересчете на индексы окисленияповышается содержание только первичных продуктов ПОЛ (таблица 45).Накопление продуктов ПОЛ в плазме и в лимфоцитах периферическойкровиприэкспериментальномгиперпаратиреозеотражаетформированиеоксидативного стресса в крови при данной патологии. Одним из механизмовможет выступать Ca2+-зависимая активация внутриклеточных посредников вфагоцитах, эндотелиоцитах и активация ферментов-продуцентов АФК: НАДФоксидазы в нейтрофилах и макрофагах, ксантиноксидазы в эндотелиоцитах [167,182, 215].Исследование активности ферментов антиокислительной защиты в кровипри экспериментальном гиперпаратиреозе показало статистически значимоеснижение активности СОД и каталазы, что может вносить вклад в активациюпроцессов свободно-радикального окисления в крови и увеличение концентрациипродуктов ПОЛ в плазме (таблица 46).
Снижение активности ферментовантиокислительной защиты в сыворотке может являться результатом их расходана утилизацию АФК в избытке образующихся в крови при гиперпаратиреозе.Таким образом, полученные данные позволяют констатировать приэкспериментальном гиперпаратиреозе накопление продуктов ПОЛ в плазме и влимфоцитах периферической крови, снижение активности СОД и каталазы всыворотке. Полагаем, что активация процессов свободно-радикального окисленияв крови при экспериментальном гиперпаратиреозе, в том числе, связана сповышением НСТ-редуцирующей способности нейтрофилов в периферическойкрови, отражающей их способность генерировать АФК [104].
Оксидативныйстресс в плазме и в лимфоцитах при экспериментальном гиперпаратиреозе можетприводить к повреждению и гибели лимфоцитов путем апоптоза и/или некроза и,как следствие, к лимфоцитопении, ограничению иммунного ответа.110Таблица 42 - Cодержание продуктов ПОЛ в гептановой фракции плазмы приэкспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2ИнтактныеГиперпаратиреоз(n=15)(n=10)Е220, у.е./мл0,53±0,127,34±2,95<0,05Е232, у.е./мл0,15±0,085,52±2,25<0,05Е278, у.е./мл0,009±0,0061,864±0,726<0,05Е400, у.е./мл0,012±0,0060,087±0,037<0,050,16±0,050,62±0,08<0,05КД и СТ, е.и.о.0,010±0,0070,309±0,029<0,05ШО, е.и.о.0,051±0,0230,063±0,025>0,05ДК, е.и.о.Значение рПримечание. р - показатель значимости различий между группами покритерию Манна-Уитни.Таблица 43 - Cодержание продуктов ПОЛ в изопропанольной фракции плазмыпри экспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2ИнтактныеГиперпаратиреоз(n=15)(n=10)Е220, у.е./мл2,71±0,235,56±1,36<0,05Е232, у.е./мл0,76±0,142,78±0,82<0,05Е278, у.е./мл0,54±0,051,45±0,36<0,05Е400, у.е./мл0,042±0,0130,304±0,098<0,050,27±0,040,42±0,05<0,05КД и СТ, е.и.о.0,198±0,0130,35±0,07<0,05ШО, е.и.о.0,019±0,0070,085±0,032<0,05ДК, е.и.о.Значение рПримечание.
р - показатель значимости различий между группами покритерию Манна-Уитни.111Таблица 44 - Cодержание продуктов ПОЛ в гептановой фракции лимфоцитов приэкспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2ИнтактныеГиперпаратиреоз(n=12)(n=10)Е220, у.е./мл0,69±0,250,42±0,16>0,05Е232, у.е./мл0,48±0,180,31±0,08>0,05Е278, у.е./мл0,22±0,070,08±0,01>0,05Е400, у.е./мл0,082±0,0280,053±0,016>0,05ДК, е.и.о.0,25±0,080,79±0,14<0,05КД и СТ, е.и.о.0,11±0,040,58±0,23<0,050,040±0,0100,363±0,157<0,05ШО, е.и.о.Значение рПримечание. р - показатель значимости различий между группами покритерию Манна-Уитни.Таблица 45 - Cодержание продуктов ПОЛ в изопропанольной фракциилимфоцитов при экспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2ИнтактныеГиперпаратиреоз(n=12)(n=10)Е220, у.е./мл1,25±0,715,04±0,69<0,05Е232, у.е./мл1,66±0,895,52±0,93<0,05Е278, у.е./мл0,66±0,510,77±0,07<0,05Е400, у.е./мл0,126±0,0160,229±0,023<0,05ДК, е.и.о.0,86±0,241,04±0,09<0,05 (WW)КД и СТ, е.и.о.0,29±0,060,18±0,02>0,050,111±0,0230,055±0,014>0,05ШО, е.и.о.Значение рПримечание.
р - показатель значимости различий между группами покритериям Манна-Уитни и Вальда-Вольфовитца.112Таблица 46 - Активность ферментов антиокислительной защиты в крови приэкспериментальном гиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиГруппа 1Группа 2Значение рИнтактныеГиперпаратиреоз(n=24)(n=10)СОД , ЕД/мл1,59±0,110,93±0,18<0,05Каталаза, мкат/л19,86±1,489,2±0,37<0,05Примечание. р - показатель значимости различий между группами покритерию Манна-Уитни.Для определения наличия и характера связи между содержанием продуктовПОЛ в плазме и показателями НСТ-редуцирующей способности нейтрофилов,активностью антиокислительных ферментов в крови при экспериментальномгиперпаратиреозе проведен корелляционный анализ (таблица 47).
АктивностьСОД в сыворотке имеет отрицательную средней силы связь с концентрациейпервичных продуктов ПОЛ в гептановой и в изопропанольной фракциях иконцентрацией вторичных продуктов ПОЛ в изопропанольной фракции,активность каталазы – отрицательную средней силы связь с концентрациейвторичныхпродуктовПОЛвизопропанольнойфракции.Концентрациявторичных продуктов ПОЛ в гептановой и в изопропанольной фракциях плазмынапрямую кореллирует с НСТ-редуцирующей способностью нейтрофилов крови(активностью и интенсивностью спонтанного и индуцированного НСТ-теста).Выявленные связи могут свидетельствовать об усилении процессовсвободно-радикальногогиперпаратиреозе,вокислениятомчисле,взакровисчетприувеличенияэкспериментальномпродукцииАФКнейтрофилами периферической крови и подавления активности ключевыхферментов антиокислительной защиты.113Таблица 47 - Корреляционная матрица между содержанием продуктов ПОЛ вплазмеипоказателямиактивностьюСОДиНСТ-редуцирующейкаталазывсывороткеспособностипринейтрофилов,экспериментальномгиперпаратиреозеПоказателиДК вДК вКД и СТ вКД и СТ вгептановойизопропан.гептановойизопропан.фракциифракциифракциифракцииплазмы,плазмы,плазмы,плазмы,е.и.о.е.и.о.е.и.о.е.и.о.R= 0,19R= 0,13R= 0,63R= 0,67R= 0,34R= 0,35R= 0,41R= 0,60R= 0,22R= 0,61R= 0,13R= 0,47R= 0,35R= 0,35R= 0,41R= 0,60СОД, ЕД/млR= - 0,50R= - 0,55R= - 0,15R= - 0,42Каталаза, мкат/лR= - 0,40R= 0,19R= 0,06R= - 0,59НСТ-тест спонт.,активность, %НСТ-тест спонт.,интенсивность, у.е.НСТ-тест инд.,активность, %НСТ-тест инд.,интенсивность, у.е.Примечание.
Указаны значения коэффициента корреляции Спирмена.Полужирным шрифтом выделены статистически значимые связи.3.3.6. Показатели гибели лимфоцитов при экспериментальномгиперпаратиреозеПолагаем, что развитие лимфоцитопении, сопутствующая ей депрессия Th1и Th2 – зависимого иммунного ответа при экспериментальном гиперпаратиреоземогут быть связаны с усилением гибели лимфоцитов периферической кровипутем апоптоза и/или некроза в условиях активации процессов свободнорадикального окисления в плазме крови и в лимфоцитах, изменения цитокинового114профиля в крови и других механизмов. Результаты исследования количественногосостава в крови лимфоцитов с маркерами апоптоза и некроза представлены втаблице 48.
Выявлено, что при экспериментальном гиперпаратиреозе значимо неизменяется содержание в крови лимфоцитов с фенотипом Annexin-5-FITC–/7AAD– и Annexin-5-FITC+/7-AAD–, но увеличивается содержание лимфоцитов сфенотипом Annexin-5-FITC+/7-AAD+, то есть с признаками поздней стадииапоптоза и некроза.Таблица48-Показателигибелилимфоцитовприэкспериментальномгиперпаратиреозе (M±m)ПоказателиAnnexin-5-FITC–/7-Группа 1Группа 2Значение рИнтактныеГиперпаратиреоз(n=10)(n=10)93,96±0,6993,18±0,29>0,055,86±0,665,96±0,22>0,050,16±0,040,70±0,14<0,05AAD–, % клетокAnnexin-5-FITC+/7AAD–, % клетокAnnexin-5-FITC+/7AAD+, % клетокПримечание.
р - показатель значимости различий между группами покритерию Манна-Уитни.Для определения наличия и характера связи между показателями апоптоза инекрозалимфоцитов,показателямиПОЛвлимфоцитах,адаптивного иммунного ответа при экспериментальномпоказателямигиперпаратиреозепроведен корелляционный анализ (таблица 49). Поскольку статистически значимоизменилось только количество лимфоцитов с поздними признаками апоптоза инекроза, то и при корреляционном анализе мы учитывали только наличие связи сэтим показателем.
Количество лимфоцитов с признаками позднего апоптоза инекроза обратно кореллирует с общим количеством лимфоцитов и количествомCD3+ лимфоцитов в крови, выраженностью реакции ГЗТ, количеством АОК в115селезенке. Прямая связь средней силы установлена между количествомлимфоцитов с признаками позднего апоптоза и концентрацией первичных иконечных продуктов ПОЛ в изопропанольной фракции липидного экстракталимфоцитовпредположить,периферическойчтофакторомкрови.Обнаруженныеугнетенияиммунногосвязипозволяютответа,уменьшенияколичества лимфоцитов в крови при экспериментальном гиперпаратиреозеявляется усиление гибели лимфоцитов, которое нарастает по мере увеличениясодержания первичных и конечных продуктов ПОЛ в изопропанольной фракциилипидного экстракта лимфоцитов периферической крови.Для проверки предположения о роли повышения концентрации в кровиПТГ, кальция в изменении иммунного статуса при экспериментальномгиперпаратиреозепроведенкорелляционныйанализмеждупоказателямиадаптивного иммунитета, НСТ-редуцирующей способностью нейтрофилов ипоказателями кальциево-фосфорного обмена (таблица 50).
Концентрация ПТГпри экспериментальном гиперпаратиреозе имеет обратную связь средней силы сконцентрациейТ-лимфоцитов(CD3+)иВ-лимфоцитов(CD45RA+),отрицательную связь высокой силы с активностью ГЗТ и количеством АОК вселезенке и положительную средней силы связь с НСТ-редуцирующейспособностью нейтрофилов и количеством лимфоцитов с признаками позднегоапоптоза и некроза.Таким образом, изменения иммунного статуса при экспериментальномгиперпаратиреозевключаютактивациюНСТ-редуцирующейспособностинейтрофилов, лимфоцитопению, в том числе снижение количества в крови CD3+и CD45RA+, угнетение Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа, повышение вкрови концентрации ИЛ-1β и снижение концентрации ИЛ-4 и ИФН-γ.В патогенезе изменений иммунного статуса при экспериментальномгиперпаратиреозе имеют значение накопление продуктов ПОЛ в плазме и влимфоцитах, снижение активности ферментов антиокислительной защиты всыворотке, активация гибели лимфоцитов путем некроза и апоптоза.
Изменения116иммунного статуса при экспериментальном гиперпаратиреозе прогрессируют помере повышения концентрации ПТГ в крови.Таблица 49 - Корреляционная матрица между содержанием продуктов ПОЛ влимфоцитах и показателями адаптивного иммунного ответа и апоптозалимфоцитов в крови крыс с экспериментальным гиперпаратиреозомПоказателиAnnexin-5-Annexin-5-Annexin-5-FITC–/FITC+/FITC+/7-AAD–,7-AAD–,7-AAD+,% клеток% клеток% клетокЛимфоциты, • 109/лR= 0,20R= -0,20R= -0,52ГЗТ, млR= 0,46R= -0,46R= -0,52АОК, • 106 ЯСКR= 0,29R= -0,29R= -0,49CD3+, • 109/лR= 0,30R= -0,30R= -0,50CD45RA+, • 109/лR= 0,50R= -0,50R= -0,42Е232 в изопропанольнойR= -0,51R= 0,51R= 0,49R= -0,40R= 0,40R= 0,22R= -0,20R= 0,20R= 0,53R= -0,19R= 0,19R= 0,28R= -0,11R= 0,11R= 0,17R= -0,10R= 0,10R= 0,14фракции лимфоцитов, у.е./млЕ278 в изопропанольнойфракции лимфоцитов, у.е./млЕ400 в изопропанольнойфракции лимфоцитов, у.е./млДК в гептановой фракциилимфоцитов, е.и.о.КД и СТ в гептановойфракции лимфоцитов, е.и.о.ШО в гептановой фракциилимфоцитов, е.и.о.Примечание.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
