Диссертация (1140935), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Указаны значения коэффициента корреляции Спирмена.Полужирным шрифтом выделены статистически значимые связи.117Полагаем, что изменения иммунного статуса при экспериментальномгиперпаратиреозе могут быть обусловлены прямым влиянием ПТГ на эффекторыврожденного и адаптивного иммунного ответа. Для проверки высказанногопредположенияна следующем этапе работы проведены исследования вэкспериментальныхусловияхinvitroпоизучениювлиянияПТГнафункциональное состояние иммунокомпетентных клеток.Таблица 50 - Корреляционная матрица между показателями адаптивногоиммунитета, НСТ-редуцирующей способностью нейтрофилов и концентрациямиПТГ, общего кальция и фосфора в сыворотке крови крыс с экспериментальнымгиперпаратиреозомПоказателиПТГ,ОбщийНеорганическийпг/млкальций,фосфор,ммоль/лммоль/лЛимфоциты, • 109/лR= -0,35R= -0,48R= -0,37CD3+, • 109/лR= -0,44R= -0,25R= 0,34CD45RA+, • 109/лR= -0,44R= -0,23R= 0,45ГЗТ, млR= -0,93R= -0,12R= -0,09АОК, 106 ЯСКR= -0,92R= -0,49R= -0,38НСТ-тест спонт., индексR= 0,55R= 0,32R= 0,26НСТ-тест инд., индексR= 0,66R= 0,37R= 0,20Annexin-5-FITC–/7-AAD–, % клетокR= -0,41R= -0,04R= -0,27Annexin-5-FITC+/7-AAD–, % клетокR= 0,44R= 0,04R= 0,27Annexin-5-FITC+/7-AAD+, % клетокR= 0,43R= 0,34R= 0,25Примечание.
Указаны значения коэффициента корреляции Спирмена.Полужирным шрифтом выделены статистически значимые связи.1183.3.7. Влияние ПТГ на функциональную активность нейтрофилов вэкспериментальных условиях in vitroИсследовано влияние различных концентраций ПТГ на функциональноесостояние нейтрофилов периферической крови здоровых людей в условиях invitro по показателям поглотительной и НСТ-редуцирующей способности.Использовали ПТГ в концентрациях 50•10-9 г/мл; 500•10-9 г/мл и 5000•10-9 г/мл,что соответствует 100%, 1000%, 10000% от его нормальной концентрации (50•10-9г/мл) в сыворотке (таблица 51).Инкубация ПТГ в концентрации 50•10-9 г/мл с суспензией нейтрофиловприводит к повышению интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа.
ПТГ вконцентрации500•10-9г/млувеличиваетпоглотительнуюспособностьнейтрофилов по показателям активности фагоцитоза, интенсивности фагоцитоза,фагоцитарного числа, а также усиливает кислород-зависимый метаболизмнейтрофилов по показателям активности спонтанного НСТ-теста, активностииндуцированногоНСТ-теста,интенсивностииндуцированногоНСТ-теста.Контакт нейтрофилов с ПТГ в дозе 5000•10-9 г/мл увеличивает показателипоглотительной способности: активность фагоцитоза, интенсивность фагоцитоза,фагоцитарное число и показатели генерации АФК фагоцитами: активностьспонтанного НСТ-теста, интенсивность спонтанного НСТ-теста, активностьиндуцированного НСТ-теста, интенсивность индуцированного НСТ-теста.
ПТГ вовсех используемых дозах не оказывал значимого влияния на функциональныйрезерв нейтрофилов, оцениваемый по активности и интенсивности НСТ-теста.Для проверки наличия дозо-зависимого эффекта ПТГ на показателифункциональной активности нейтрофилов периферической крови использованкорреляционный анализ. Установлено наличие прямой средней силы связи междудозой ПТГ и показателями активности фагоцитоза, интенсивности фагоцитоза,фагоцитарного числа, активности спонтанного НСТ-теста, интенсивностиспонтанного НСТ-теста (таблица 52).119Таблица 51 - Влияние ПТГ на функциональную активность нейтрофилов вэкспериментальных условиях in vitro (M±m)ПоказателиАктивностьГруппа 1Группа 2Группа 3Группа 4Контроль+ ПТГ 50+ ПТГ 500+ ПТГ 5000(n=10)(n=10)(n=10)(n=10)27,00±2,9730,00±2,6834,80±3,7642,00±3,31р<0,05р<0,050,89±0,141,13±0,211,43±0,1р<0,05р<0,05р<0,052,93±0,293,15±0,313,34±0,22р<0,05р<0,05р<0,0517,60±3,8821,20±2,9626,00±2,76р<0,05р<0,050,23±0,040,29±0,03фагоцитоза, %Интенсивность0,70±0,11фагоцитоза, у.е.Фагоцитарное2,55±0,15число, у.е.НСТ-тест спонт.,14,20±2,54активность, %НСТ-тест спонт.,0,18±0,050,19±0,04интенсивность, у.е.НСТ-тест инд.,р<0,0518,60±3,4919,20±4,76активность, %НСТ-тест инд.,0,21±0,040,21±0,05интенсивность, у.е.Функц.
резерв (акт-25,80±3,5827,60±4,18р<0,05р<0,050,30±0,040,30±0,05р<0,05р<0,051,34±0,131,06±0,121,23±0,051,05±0,071,32±0,171,07±0,141,36±0,181,03±0,08ть НСТ-теста)Функц. резерв (интть НСТ-теста)Примечание. р-показатель значимости различий при сравнении сконтрольной группой по парному критерию Вилкоксона.Таким образом, ПТГ в диапазоне доз 50•10-9 г/мл; 500•10-9 г/мл и 5000•10-9г/млвдозо-зависимойманереоказываетстимулирующеевлияниенапоглотительную и НСТ-редуцирующую способности нейтрофилов, выделенныхиз периферической крови здоровых людей.120В литературе представлены неоднозначные сведения о влиянии ПТГ нафункциональную активность фагоцитов [167, 182, 215, 301, 303].
В тоже времяизвестно, что на мембране гранулоцитов и в меньшей степени моноцитов илимфоцитов экспрессируется тип 2 рецептора ПТГ (PTH2R) [280]. Полагаем, чтоключевым механизмом активации функциональной активности нейтрофилов подвлияниемПТГявляетсярецептор-зависимаястимуляцияG-белок-ассоциированных сигнальных путей, а также увеличение концентрации кальция вцитоплазме.Таблица 52 - Корреляция между дозой ПТГ и показателями функциональнойактивности нейтрофилов в экспериментальных условиях in vitro (M±m)ПоказателиКоэффициентЗначение ркорреляцииСпирменаАктивность фагоцитоза, %R= 0,63<0,05Интенсивность фагоцитоза, у.е.R= 0,67<0,05Фагоцитарное число, у.е.R= 0,47<0,05НСТ-тест спонт., активность, %R= 0,61<0,05НСТ-тест спонт., индексR= 0,47<0,05НСТ-тест инд., активность, %R= 0,44>0,05НСТ-тест инд., индексR= 0,38>0,053.3.8. Влияние ПТГ на показатели секреторной способностимонуклеаров периферической крови в экспериментальных условиях in vitroПолагаем, что ПТГ способен оказывать влияние на секреторную активностьлимфоцитов в связи с наличием на мембранах лимфоцитов рецептора к ПТГ.
Сиспользованием рекомбинантного ПТГ в концентрациях 50•10-9 г/мл; 500•10-9г/мл и 5000•10-9 г/мл исследовано его влияние на секрецию некоторых цитокиновмононуклеарами периферической крови в условиях in vitro (таблица 53).121Таблица 53 - Влияние ПТГ на показатели секреторной способности монуклеаров вэкспериментальных условиях in vitro (M±m)ПоказателиИЛ-2, пг/млГруппа 1Группа 2Группа 3Группа 4Контроль+ ПТГ 50+ ПТГ 500+ ПТГ 5000(n=10)(n=10)(n=10)(n=10)0,110±0,0030,089±0,0040,110±0,010 0,100±0,004р<0,05ИЛ-4, пг/мл0,100±0,010 0,090±0,0010,110±0,0050,092±0,003ИЛ-6, пг/мл0,100±0,0100,09±0,0050,09±0,0040,101±0,003ИЛ-8, пг/мл0,111±0,011 0,200±0,0100,194±0,0240,267±0,045р<0,05ИЛ-10, пг/млр<0,050,087±0,006 0,054±0,004р<0,050,055±0,0040,054±0,002р<0,05р<0,05Примечание.
р-показатель значимости различий при сравнении сконтрольной группой по парному критерию Вилкоксона.Выявлено статистически значимое по сравнению с контрольной группойснижение продукции ИЛ-2 мононуклеарами под действием ПТГ в концентрации5000•10-9 г/мл. ПТГ в используемых концентрациях не оказал статистическизначимого влияния на секрецию мононуклеарами ИЛ-4 и ИЛ-6. Выявленоувеличение в сравнении с контрольной группой концентрации ИЛ-8 в культуремононуклеаров после добавления ПТГ в концентрациях 50•10-9 г/мл и 5000•10-9г/мл.
ПТГ в концентрациях 50•10-9 г/мл; 500•10-9 г/мл и 5000•10-9 г/млстатистическизначимовсравнениисконтрольнойгруппойснижаетконцентрацию в культуральной среде ИЛ-10. С использованием корреляционногоанализа не установлено статистической значимой связи между дозой ПТГ иконцентрацией ИЛ-2, ИЛ-8, ИЛ-10 в культуральной среде.Учитывая участие ИЛ-2 в стимуляции образования Т-лимфоцитов можнопредположить участие ПТГ в угнетении пролиферации Т-лимфоцитов. Какизвестно, что ИЛ-8 является одним из ключевых провоспалительных цитокинов,122отвечающим за привлечение в очаг воспаления эффекторов врожденного иадаптивногоиммунногоответа.ИЛ-10обладаетсвойствамипротивовоспалительного медиатора, снижение его концентрации в условияхгиперпаратиреоза может приводить к усилению функциональной активностиэффекторов врожденного иммунитета.Таким образом, в экспериментальных условиях in vitro ПТГ изменяетсекреторную способность мононуклеров, выделенных из периферической кровиздоровых людей: повышает секрецию ИЛ-8, снижает секрецию ИЛ-2 и ИЛ-10.Дозо-зависимый эффект ПТГ на секреторную способность мононуклеаровотсутствует.3.3.9.
Влияние ПТГ на показатели гибели лимфоцитов периферическойкрови в экспериментальных условиях in vitroНакопление паратиреоидного гормона в крови при ХПН и гиперпаратиреоземожет оказывать влияние на гибель лимфоцитов прямо или опосредованно,учитывая наличие специфических рецепторов для ПТГ на цитоплазматическоймембране[208].ДляпроверкигипотезыисследоваливлияниеПТГвконцентрациях 50•10-9 г/мл; 500•10-9 г/мл и 5000•10-9 г/мл на показатели гибелилимфоцитов, выделенных из периферической крови клинически здоровых людейдоноров после 30 мин инкубации при 37оС.Установлено, что контакт лимфоцитов с ПТГ в концентрации 50•10 -9 г/мл неизменяет количество лимфоцитов с признаками апоптоза и некроза (таблица 54).Инкубация лимфоцитов с ПТГ в дозе 500•10-9 г/мл увеличивает количестволимфоцитовсраннимипризнакамиапоптоза(Annexin-5-FITC+/7-AAD–).Добавление ПТГ в дозе 5000•10-9 г/мл приводит к увеличению количествалимфоцитов с ранними признаками апоптоза, поздними признаками апоптоза ичастично некротических клеток и, как следствие, снижению количестваинтактных клеток.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
