Диссертация (1140744), страница 14
Текст из файла (страница 14)
На первых этапах воспалениене зависит от характера повреждения и имеет общие механизмы, в основекоторых лежит комплекс цитокинов. Острая воспалительная реакция запускаетсяпутем активации тканевых макрофагов и секреции воспалительных цитокинов,таких как интерлейкин-1 (ИЛ-1), фактор некроза опухоли (ФНОα), ИЛ-6. ИЛ-8стимулирует выход нейтрофилов из посткапиллярных венул, вызывая массивнуюинфильтрацию нейтрофилами очага острого воспаления. Таким образом,цитокины обеспечивают развитие воспалительной реакции в организме, являютсяфакторами смены фаз воспалительного процесса.Были обследованы 72 недоношенных ребенка, находившиеся на лечении вОРИТ.
Клиническая характеристика новорожденных представлена в таблице 35.Таблица 35 – Характеристика новорожденных, включенных в исследованиеПараметрыМасса тела, гНоворожденные (n=72)Me [LQ;UQ]1136 [460-1162]Длина тела, см32 [25-42]Срок гестации, нед.29 [25-32]Апгар, 1 мин5 [1-7]Апгар, 5 мин7 [5-8]Учитывая зависимость экспрессии генов цитокинов от гестационноговозраста пациента дети были разделены на две группы:1 группа (N=25) - новорожденные, родившиеся на сроке 25-28 недельбеременности.
Дети данной группы были поделены на 2 подгруппы:841А подгруппа (N=19) – дети с врожденной бактериальной инфекцией,наблюдавшиеся с диагнозами врожденный сепсис и/или врожденная пневмония;1Б подгруппа (N=6) – дети, наблюдавшиеся с диагнозом РДС;2 группа (N=47) - новорожденные, родившиеся на сроке от 29 до 32 недельбеременности. Дети данной группы были поделены на 2 подгруппы:2А подгруппа (N=22) – дети с врожденной бактериальной инфекцией,наблюдавшиеся с диагнозами врожденный сепсис и/или врожденная пневмония;2Б подгруппа (N=25) – дети, наблюдавшиеся с диагнозом РДС.Распределение новорожденных исследуемых групп по основному диагнозупредставлено в таблице 36.Таблица 36 – Распределение новорожденных исследуемых групп поосновному диагнозуОсновной диагнозI группа (n=25)Гестационный возраст 25-28недель9II группа (n=47)Гестационный возраст 29-32недели6Врожденная пневмония1016РДС625Врожденный сепсисБыло проведено измерение уровней экспрессии следующих группгенов, участвующих в иммунном ответе в возрасте 1 суток жизни:•Цитокины (IL12а, TNFa);• Транскрипционные факторы ( TBX21, GATA3, RORC2);• Транмембранный гликопротеин (CD68);Полученымаркеровдостоверныеразличияпорядув клетках буккального эпителия инедоношенныхноворожденныхразличногоанализируемыхвенознойвозрастаскровиуналичиемврожденной инфекционной патологии и без признаков инфекции.При анализе в крови детей, родившихся на сроке 25 -28 недельгестации, была выявлена тенденция к изменению экспрессии генаTNFa,однакоразличиязначимости.
(Таблица 37 ).недостиглиуровнястатистической85Таблица 37 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках кровиноворожденных в возрасте 25-28 недель гестации с признаками инфекционнойпатологии и РДСВрожденная бактериальнаяинфекция.N=19Me [LQ;UQ]0,07[0,05;0,09]1,3[1,1;1,8]0,06[0,03;0,1]0,2[0,1;0,3]TNFACD68TBX21GATA3РДС,N=6Me [LQ;UQ]p, U-test0,1[0,07;0,15]1,7[1,6;2]0,05[0,04;0,07]0,2[0,1;0,3]p>0,05p>0,05p>0,05p>0,051,81,61,41,21Инфекция0,8РДС0,60,40,20TNFACD68MMP8TBX21GATA3Рисунок 10 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках кровиноворожденных в возрасте 25-28 недель гестации с признаками инфекционнойпатологии и без таковыхВ крови детей, родившихся на сроке 29-32 недели гестации, с признакамибактериальной инфекции было детектировано статитически значимое снижениеэкспрессии мРНК гена TNFa и повышение – мРНК гена GATA3 по сравнению сдетьми с РДС.
(Таблица 38).86Таблица 38 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках кровиноворожденных в возрасте 29-32 недель гестации с признаками инфекционнойпатологии и РДСВрожденная бактериальнаяинфекция,N=22Me [LQ;UQ]0,07[0,04;0,1]1,1[0,7;1,9]0,1[0,02;0,4]0,065[0,04;0,1]0,3[0,15;0,4]TNFACD68MMP8TBX21GATA3РДС,N=25Me [LQ;UQ]p, U-test0,09[0,04;0,1]1,3[0,7;1,85]0,2[0,07;0,3]0,04[0,02;0,08]0,15[0,1;0,2]р=0,048p>0,05p>0,05p>0,05р=0,0081,41,210,8Инфекция0,6РДС0,40,20TNFACD68TBX21GATA3Рисунок 11 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках кровиноворожденных в возрасте 29-32 недель гестации с признаками инфекционнойпатологии и без таковыхВ клетках буккального эпителия в группе детей, родившихся насроке 25-28 недель гестации, с признаками течения бактериальнойинфекции получено статистически значимое снижение экспрессиимРНК гена IL12А по сравнению с группой детей c РДС.
(Таблица 39 ).87Таблица 39 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках буккальногоэпителия новорожденных в возрасте 25-28 недель гестации с признакамиинфекции и РДСРДС,N=6Me [LQ;UQ]p, U-testIL12AВрожденная бактериальнаяинфекция,N=19Me [LQ;UQ]0,04 [0,007;0,06]0,09[0,07;0,1]p=0,04TNFA0,04[0,02;1,2]0,09[0,08;0,2]p>0,05CD684,6[2,8;8,4]5,3[2,6;6,3]p>0,05GATA30,2[0,03;0,4]0,1[0,095;0,3]p>0,05RORC20,07[0,005;0,3]0,03[0,01;0,04]p>0,05654Инфекция3РДС210IL12ATNFACD68GATA3RORC2Рисунок 12 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках буккальногоэпителия новорожденных в возрасте 25-28 недель гестации с признакамиинфекции и без таковыхВ клетках буккального эпителия недоношенных новорожденных,родившихсянабактериальногосроке29 -32инфекционногонеделипроцессагестации,полученыспризнакамидостоверныеразличия в величине экспрессии генов CD68 и RORC2. (Таблица 40 ).88Таблица 40 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках буккальногоэпителия новорожденных в возрасте 29-32 недель гестации с признакамиинфекции и РДСIL12ATNFACD68GATA3RORC2Врожденная бактериальнаяинфекцияN=22Me [LQ;UQ]0,04[0,02;0,065]0,03[0,02;0,07]7,9[5,4;10,8]0,4[0,1;1,4]0,04[0,009;0,05]РДСN=25Me [LQ;UQ]p, U-test0,07[0,04;0,2]0,07[0,03;0,1]5,7[2,7;9,6]0,2[0,09;0,6]0,02[0,01;0,06]p>0,05p>0,05р=0,011p>0,05р=0,01898765Инфекция4РДС3210IL12ATNFACD68GATA3RORC2Рисунок 13 – Уровень экспрессии исследуемых генов в клетках буккальногоэпителия новорожденных в возрасте 29-32 недель гестации с признакамиинфекции и без таковыхТаким образом, в ходе проведенного исследования были полученыстатистически значимые различия по ряду анализируемых маркеров в клеткахвенозной крови и клетках буккального эпителия у недоношенных новорожденныхразличного гестационного возраста с наличием врожденной бактериальнойинфекционной патологии и без признаков инфекции.
В крови детей, родившихсяна сроке 25-28 недель гестации, была выявлена тенденция к изменениюэкспрессии гена TNFa, однако различия не достигли уровня статистической89значимости, возможно, ввиду недостаточно большого объема выборки. В кровидетей, родившихся на сроке 29-32 недели гестации, с признаками бактериальнойинфекции было детектировано статистически значимое снижение экспресиимРНК гена TNFa и повышение – мРНК гена GATA3 по сравнению с детьми безинфекции. В группе детей, родившихся на сроке 25-28 недель гестации, спризнаками развития бактериальной инфекции было получено статистическизначимое снижение экспрессии мРНК гена IL12А в клетках буккального эпителияпо сравнению с группой детей без инфекции. В клетках буккального эпителиянедоношенных новорожденных, родившихся на сроке 29-32 недели гестации, спризнаками инфекционного процесса были получены татистически значимыеразличия в величине экспрессии генов CD68 и RORC2.В ходе исследования нами был проведен многофакторный анализ, по итогамкоторого была построена бинарная логистическая регрессионная математическаямодель, позволяющая классифицировать наличие или отсутствие инфекционнойпатологии по профилю экспрессии генов в клетках буккального соскоба.
В модельвошли количество мРНК генов IL12A, GATA3 и RORC2, а также масса прирождении. Дискриминантная функция имела вид:Z=-10,986*[IL12A]+1,152*[GATA3]+12,773*[RORC2]-0,003[m]+3,035 (1),где [IL12A] – уровень мРНК IL12A,[CD68] – уровень мРНКПосле применения логит-преобразования:Р=1/(1+е-z) (2), гдеp- вероятность принадлежности наблюдения к определенному классу приполученном значении функции ze – основание натуральных логарифмовz - классифицирующая дискриминантная функцияROC-кривая математической модели представлена на рисунке 14.90Рисунок 14 – ROC-кривая математической модели для классификации наличияили отсутствия инфекционной патологии по профилю экспрессии генов в клеткахбуккального соскобаПлощадь под кривой (AUC) составила 0,87 (0,77-0,96).
В качестве порогаотсечки выбрана вероятность наличия инфекционной патологии 50% и более, чтосоответствовало максимальной суммарной чувствительности и специфичностимодели. Чувствительность в точке отсечки составила – 86%, специфичность –74%. (рисунок 14).Полученная математическая модель позволяет вычислить вероятностьналичия инфекционной патологии у новорожденных детей, родившихся с оченьнизкой и экстремально низкой массой тела.Таким образом, определение экспрессии мРНК генов, участвующих виммунном ответе, методом ПЦР со стадией обратной транскрипции в режимереального времени в возрасте 1 суток жизни может быть использовано длядиагностикибактериальныхноворожденных.инфекционно-воспалительныхзаболеванийуТечение бактериального инфекционного процесса у глубоконедоношенных новорожденных сопровождается изменением экспрессии геновIL12A, CD68, RORC2 в клетках буккального эпителия и TNFa в крови.91Измерение профиля экспрессии генов врожденного иммунитета в клеткахбуккального эпителия является информативным и неинвазивным методомдиагностикибактериальныхинфекционно-воспалительныхзаболеванийунедоношенных новорожденных.В ходе проведенного исследования создана математическая модель,позволяющая на основании определения уровня экспрессии генов IL12A, GATA3и RORC2 в буккальном эпителии новорожденных в возрасте 1 суток, а такжемассы тела при рождении, с высокой чувствительностью и специфичностьюдиагностировать инфекционный процесс.С целью оценки влияния проводимой матерям профилактики РДСгормональной терапии на воспалительный ответ новорожденных с бактериальнойинфекцией нами были выделены 2 группы детей:1 группа – дети, матерям которых проводилась профилактика РДС (10 детей- 50%);2 группа – дети, матерям которых не проводилась профилактика РДС (10детей – 50%).Результаты проведенного исследования представлены в таблице 41.Таблица 41 – Оценка экспрессии генов цитокинов в группах сравнениязависимости от проводимой матерям гормональной профилактики РДС2 группаN=10Me [LQ;UQ]0,09 [0,06;0,14]р,U-testTNFАк1 группаN=10Me [LQ;UQ]0,04 [0,03;0,07]CD68к0,9 [0,6;1,4]1,6 [1,2;2,4]p>0,05TBX21к0,07 [0,06;0,12]0,06 [0,04;0,07]p>0,05GATA3к0,22 [0,2;0,3]0,3 [0,2;0,4]p>0,05TNFАб0,027 [0,02;0,07]0,07 [0,03;0,15]p>0,05CD68б5,3 [3,6;7,6]7,1 [3,7;11,1]p>0,05IL12б0,05 [0,04;0,07]0,04 [0,02;0,085]p>0,05GATA3б0,17 [0,09;0,3]0,4 [0,07;1,5]p>0,05p=0,04При оценке влияния гормональной терапии на экспрессию генов цитокиновбыло выявлено, что в группе детей, матерям которым проводилась дородовая92гормональная терапия, отмечалось достоверно более низкая экспрессия генаTNFA в крови.3.5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
