Диссертация (1140444), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Объект биохимического исследования (слева направо)1 – пульпа, 2 – эмаль, 3 - эмалевый органВыбор в качестве объекта исследования свиньи домашней обоснованследующимиобстоятельствами.Изучениеморфологиипроцессапрорезывания зубов связано с методическими трудностями. Удивительномалое количество литературы на эту тему в значительной мере связано сограничением ресурсов соответствующих материалов. Между тем, процесспрорезывания не может быть изучен на клиническом уровне на тканяхчеловека, потому что зубы должны быть извлечены, а значит отделены отпериодонтальной связки и окружающей кости.
Изучение материалов27животных расширяет возможности изучения механизма прорезывания имогут помочь в данном исследовании.В пользу возможности использования именно домашней свиньи вкачестве экспериментального животного свидетельствует тот факт, что«домашниесвиньиужедавноиспользовалисьвкачествеэкспериментальных животных для познания механизмов физиологическихи патологических процессов» [43, 119].Сходство отмечается поморфологии и функционированию внутренних органов и систем, вчастностисердечно-сосудистой,пищеварительной,выделительной,эндокринной и нервной, включая мозг и органы чувств; по организацииметаболических процессов, строению и пигментации кожных и волосяныхпокровов, пищевой всеядности [103].Что касается изучения зубов свиньи, в качестве объекта исследованиято, набор постоянных зубов, как правило, присутствует у нее в возрастеоколо 18 месяцев.
Зубы свиньи, как всеядного млекопитающего пригодныв качестве модели для изучения развития и старения зубов человека.Свинья, как человек, имеет те же виды зубов: малые и большие коренныезубы, клыки и резцы. Так как минерализация зубов свиньи происходит вмаксимально сжатые сроки до полугодовалого возраста свиньи, топредставляется очевидным удобство обращения к свинье в качествеобъекта исследования.Для настоящей работы решающе важно анатомическое сходствозубочелюстного аппарата свиньи с человеком, которое оправдывает выборэтого объекта.282.2. Методы исследования2.2.1. Топографо-анатомический метод с поэтапным замораживаниемобъктаВ выборе данного методического подхода мы опирались наследующие факты: зубные зачатки млекопитающих окружены слоемликвора, благодаря чему они во время операции легко вылущиваются из ихлунок.
В то же время, в публикациях на соответствующую тему нетуказания на присутствие данного водного слоя и тем более его описания иизучения. При изготовлении препарата, включая декальценирование, изданного препарата неизбежно испаряется жидкость, омывающая зубнойфолликул. Для сохранения данной жидкости мы воспользовались приёмомкриофиксации, предложенным еще Н.И. Пироговым. Для того, чтобыисключитьместноеперегреваниераспиливаемыхчелюстейприизготовлении криопрепаратов, состоящих из высокоминерализованныхтканей, таких как эмаль и дентин нами этот метод был модифицирован иназван «принцип поэтапного (дробного) распиливания».
Первоначальнообъект исследования сегмент челюсти (челюсть) помещали в морозилкудля замораживания при температуре от -18,5 0 до -25 0 С на срок до 24 часов.Срезы производились с помощью зуботехнического алмазного диска(рис.2). Таким путем первоначально распиливали челюсти приблизительнона 1/3-1/4 от всей ее толщины. Объект снова помещали на 24-36 часов вхолодильную установку для его замораживания и возобновляли егораспиливание. Повтор цикла заморозка-распиливание продолжался до 3-4раз. Длительность основного замораживания и дополнительных процедуропределялась в зависимости от преобладания в объекте минерализованныхтканей. Для большей надёжности мы прибегали к заведомой передозировкекриовоздействия.29Наблюдаемая и регистрируемая картина рассматривалась в ходе динамикиразмораживания объекта вплоть до приобретения тканью нативнойконсистенции.
После изучения нативных макропрепаратов челюстей,приступали к следующему методу исследования – вываривание, дляполучения костных препаратов челюстей и их сегментов.Рисунок 2. Изготовление препаратов топографо-анатомическимприёмом2.2.2. Краниометрический методДанным методом исследования изучали поперечно-продольное размерывыходных отверстий направляющих каналов лунок (крипт) зубныхзачатков, их расположение и форму. Нами промерены данные отверстиятехническим штангенциркулем (цена деления 0,01 мм), по общепринятомукраниометрическому методу [1].Продольный размер измерялся параллельно длине альвеолярного отросткаили края, а поперечный параметр – под прямым углом к предыдущемуразмеру (рис.3).30Рисунок 3.
Измерение продольных (черный размер) ипоперечных размеров (красный) выходных отверстий направляющихканалов лунки постоянных зубов2.2.3. Метод компьютерной морфометрии ортопантомограмм (ОПТГ)Исследование проведено на 196 панорамных рентгенограммах(ортопантомограммах).Методом компьютерной морфометрии ОПТГ провели измерение трёхдиаметров лунки зубного зачатка (рис.4):1- точки пересечения дентино-эмалевой границы с внешней егоповерхностью зубного зачатка;2- через эти точки откладываем отрезок, продолжающийся к стенкелунки, этот отрезок - «проксимальный диаметр»;3- в центре проксимального диаметра ставим реперную точку;314- от реперной точки до внешнего контура эмали проводитсяперпендикулярную прямую;5- через центр данной перпендикулярной прямой и вдоль предыдущегодиаметра измеряется «средний диаметр»;6- «дистальный диаметр» располагается между контурами тени лунки вобласти эмали.Данныетридиаметраизмеряемтолькомеждувнутреннимиповерхностями зубной лунки.Рисунок 4.
Метод компьютерной морфометрии ОПТГ лунки(крипты) зубного зачатка1- точки пересечения дентина с эмалью и с наружной поверхностьюзачатка, 2 - проксимальный диаметр, 3 – реперная точка, 4перпендикуляр, 5 - средний диаметр, 6 –дистальный диаметр.322.2.4. Биохимический методДля биохимического анализа концентрации ионов кальция и фосфора вфолликулярной и интерстициальной жидкости пульпы зубного зачатка иэмалевого органа использован ферментативно-фотоколориметрическийметод. Биологические жидкости, подлежащие анализу, получали изсоответствующих нативных анатомических структур, составляющихзубные зачатки.
Бором вскрывали полость зубной лунки (крипты), далеефолликулярную жидкость нагнетали благодаря специальной системе длязабора жидкости (К 3. ЭДТА) в количестве 1,5-2,0 мл. Межклеточнаяжидкостьполученаблагодарягомогенизациимягкихструктур,формирующих зубные зачатки (пульпа, эмалевый орган). Исследуемыйбиологический материал поместили в центрифугу F-Human (4000оборотов/мин.). Полученную надосадочную жидкость брали в количестве10 мкл. Биохимический анализ производился на полуавтоматическомбиохимическом анализаторе «Stat Fax 3300».Концентрация кальция и фосфора в тканевой жидкости структур зубногозачатка вычислялась по формуле:К= образца стандарта× , где n- стандартная концентрация, (для кальция -824ммоль/л, для фосфора - 1, 62 ммоль/л) для фосфора , OD – оптическаяплотность.2.2.5.
Статистический методСтатистическую обработку результатов проводили по общеизвестнойметодике помощью прикладной компьютерной программы Statistica-6.0,вычислили среднестатистические значения показателей [103]. Для оценкидостоверности различий между ними был использован t-критерийСтьюдента, так как распределение вариантов было близко к нормальному.Различия считали достоверными при 95 % - ном пороге вероятности p <0,05.33ГЛАВА 3Результаты собственных исследований3.1. Изменчивость структур окружающих зубной зачаток в процессепрорезывания зубовПолученные по описанной методике срезы челюсти отражаютнативную картину различных этапов внутричелюстного (до прорезываниязубов«предэруптивного»)онтогенеза.Приэтомотчётливовизуализируются срезы сегментов челюстных костей, в лунках которыхформируются перманентные зубы позади молочных их аналогов.
Важно,что стенки данных лунок хорошо отделены от костного вещества челюстей.В результате рассмотрения сагиттального среза фронтального отделачелюстей (рис.5) видно, что между зачатком и стенкой его лунки (крипты)находится пространство толщиной 1,1- 1,6 мм (М=1,02± 0,12 мм).При макро–морфологическом изучении проксимального отделазачатка постоянного резца видно, что пульпа насыщено-красного цвета изаполняет приблизительно 50 % от общей площади зубного зачатка.Зубной зачаток более светлый в участке дентино-пульповой границы, белаяэмаль расположена на периферии зачатка зуба.
Зачаток зуба расположен влунке (крипте), которая соединяется с ротовой полостью лишь вдистальном отделе, а с трех сторон она абсолютно замкнута. Аналогичнакартина среза в области других участков челюстных костей. При изучениикриопрпаратов челюстных костей топографо-анатомическим приемом споэтапным замораживанием установили, что срез данного макропрепаратаоткрывает мягкие и твердые ткани молочного большого коренного зуба,включая ткани зачатка постоянного большого коренного зуба (рис.6а).34Рисунок 5. Нативный макропрепарат левых челюстей вида свиньядомашняя (сагиттальный срез)1 –перифолликулярное пространство, 2 - пульпа зачатка, 3- дентин, 4эмаль, 5- направляющий канал лунки (крипты) зубного зачатка.При этом поверхность среза криопрепарата фактически везде гладкаяи нерельефная. На срезе четко просматриваются стенки лунки (крипты)зубного зачатка и его компартменты: сформированная зубная эмаль,дентин, формирующаяся пульпа. Между зачатком зуба и его лункой(криптой) расположена кристаллизированная (замерзшая) жидкость.По истечении получаса, при комнатной температуре при длительноми непрерывном наблюдении за размораживанием объекта, отмечаемпоявление рельефности.морфологическихПриэлементовэтом контурыизменяютсяупомянутых(рис.6б).Уровеньвышесрезаформирующейся пульпы погружается по отношению к уровню срезадентина и эмали на глубину 0,01-0,04 миллиметра.
Аналогично35погружаетсявзубнуюлункуикристаллизированнаяжидкость,расположенная между зубом и его лункой, вследствие ее таяния.Итак, срезызамороженныхчелюстейпозволяют не толькоконстатировать наличие ликвора между зачатком зуба и стенкой лунки(крипты), но и выявить, что растаивая она обеспечивает зачаткувозможность свободного перемещения в направлении его окончательногодефинитивного положения.Рисунок 6 а. Криопрепарат нижней челюсти (сагиттальный срез)1- пульпа, 2 - дентин, 3 – эмаль, 4 - эмалевый орган, 5 - костная стенкалунки (крипты) зубного зачатка, 6 - кристаллизированная жидкость вперифоллкулярном пространстве36Рисунок 6 б. Нативный макропрепарат нижней челюсти(сагиттальный срез)(тот же препарат через 30 минут после размораживания)Зубные зачатки формируясь в зубных лунках (криптах), находятся нарасстоянии 24-32 мм от своего места в сформированном зубном ряду(рис.7).Направляющийтяжначинаетсявобластикоронкиформирующегося зачатка зуба, серо-розового цвета, мягкой консистенции,длиной 18,2±4,2 мм.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
