Диссертация (1140228), страница 9
Текст из файла (страница 9)
3). У 29 (25,2%) имелась варикозная болезнь, у 14(12,2%) хронический некалькулезный холецистит, у 3 (2,6%) миопия средней ивысокой степени. 4 (3,5%) имели тромбозы в анамнезе, 8 (6,9%) отмечалимигрени.Таблица 3Экстрагенитальная патология у пациенток с неудачами ЭКОI группа,n=115Экстрагенитальная патологияn%Заболевания верхних дыхательных путей(отиты, риниты, тонзиллиты)1412,2Заболевания нижних дыхательных путей(бронхиты, пневмонии)119,6Сердечно-сосудистые заболевания (ВСД,пролапс митрального клапана,артериальная гипертония, аритмии)2219,1Варикозное расширение вен нижнихконечностей2925,2Заболевания ЖКТ (гастриты, колиты,язвенная болезнь желудка и 12-перстнойкишки)2320,0Заболевания почек и мочевого пузыря(пиелонефриты, циститы)108,7Эндокринные заболевания (патологиящитовидной железы, адреногенитальныйсиндром)--Оперативные вмешательства в анамнезе(аппендэктомия, тонзилэктомия,аденэктомия, лапароскопия)5850,4Тромбозы в анамнезе43,5Миопия средней и высокой степени.32,6Хронический некалькулезный холециститМигрень1412,286,9Семейный тромботический анамнез был отягощенным у 36 пациенток снеудачами ЭКО (31,3%).
(рис. 2).4731,3%отягощенный семейныйтромботический анамнезРис. 2. Семейный тромботический анамнез у пациенток с неудачами ЭКО.Анализ репродуктивной функции ближайших (мать, бабушка, сестра) идвоюродныхродственниковсамопроизвольныхобследованныхвыкидышей,выявилпреждевременныхвысокуюродов,частотурождениймаловесных детей, а также антенатальной гибели плода и мертворождений.Репродуктивные потери в анамнезе имели родственницы 47,8% пациенток(рис. 3).47,8%отягощенный семейныйакушерский анамнезРис. 3. Семейный акушерский анамнез у пациенток с неудачами ЭКО482.2. Методы исследованияКлинико-лабораторное обследование включало инструментальные илабораторные методы.
Проводилось ультразвуковое исследование органовмалого таза (УЗИ), обследование на половые инфекции, определениегормональногостатуса,иммунологическоеисследование,генетическое(определение кариотипа супругов), определение состояния системы гемостаза,молекулярно-генетические исследования генетических форм тромбофилии,маркеры локального гемостаза (сосудистый эндотелиальный фактор роста,эндотелин, гомоцистеин, ингибитор активатора плазминогена 1 типа (PAI-1),тканевойактиваторплазминогена(t-PA)),атакжеклиническийибиохимический анализы крови, общий анализ мочи, допплерография,кардиотокография и др.ИССЛЕДОВАНИЕ СОСТОЯНИЯ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗАЗабор крови производился сухой стерильной иглой из локтевой вены впластиковую пробирку в соотношении с антикоагулянтом 9:1. В качествеантикоагулянта использовали 3,8% раствор трехзамещенного цитрата натрия.Необходимая обработка и выполнение срочных тестов проводились в течение2 часов после взятия крови.
Последовательное центрифугирование крови иплазмы позволяло получить богатую тромбоцитами плазму. Для получениябогатой тромбоцитами плазмы кровь центрифугировали при 1000 об/мин втечение 5 минут. Для приготовления бестромбоцитарной плазмы кровьцентрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут.1.Определение концентрации комплексов тромбин-антитромбин (ТАТ)с помощью фирменного набора Enzygnost-TAT ( Behringwerke, Germany).Принцип исследования заключается в определении концентрациикомплексов ТАТ иммуноферментным методом в плазме крови с помощью«сандвич» - техники.Во время первой инкубации находящиеся в исследуемом образцекомплексы ТАТ связываются с антителами к антитромбину, фиксированными49на поверхности пластиковой пробирки. В ходе дальнейшей реакции придобавлении антител к человеческому AT III, конъюгированных с пероксидазой,последние связываются со свободными (еще не связанными) детерминантамиAT III комплексов ТАТ.
Избыток антител, конъюгированных с пероксидазой,удаляется при промывании. Затем измеряется энзиматическая активностьсоединения. Энзиматические преобразования перекиси водорода и хромогенатормозятся путем добавления в пробирку разведенной серной кислоты. Затемфотометрическиизмеряетсяинтенсивностьокрашивания,котораяпропорциональна концентрации комплексов ТАТ. Клиническое значениеопределения концентрации комплексов ТАТ связано с возможностью раннейдиагностики тромбофилического состояния, так как комплексы ТАТ являютсяранними маркерами тромбофилии и начала внутрисосудистого свертываниякрови.Метод2.определениеоценкиD-димеравнутрисосудистогоколичественнымтромбообразованияметодом«latex-enchancedimmunoassay» TechnoLEIA D-Dimer Latex, который основан на взаимодействиивысокоспецифичных антител к D-димеру, фиксированных на латексныхчастицах.
D-димер характеризует перекрестную полимеризацию фибрина впроцессе внутрисосудистого свертывания крови; является одним из наиболееспецифических тестов диагностики ДВС-синдрома, тромбофилии и тромбоза.3. Исследование плазменного звена системы гемостаза.а)времениОпределение(АЧТВ),активированногохарактеризующегочастичногосуммарнуютромбопластиновогоактивностьфактороввнутреннего пути свертывания (кроме FVII и FVIII) в условиях стандартнойактивации факторов контакта (FXII и FXI) каолином и стандартногосодержания фосфолипидов (частичный тромбопластин) с использованиемкоммерческих наборов Stago, Франция.б) оценка показателей гемостаза на приборе тромбоэластограф «Hellige»(Germany):“r+k”(хронометрическийпоказатель),“ma”(максимальная50амплитуда) «ИТП» (индекс тромбодинамического потенциала с целью оценкихронометрических и структурных параметров коагуляции.4.
Определение количества тромбоцитов.Контроль количества тромбоцитов в периферической крови проводилсяна автоматическом счетчике «Тrombocounter», Франция.5. Исследование функциональной активности тромбоцитов.Исследование агрегации тромбоцитов проводили на агрегометре Рауtоn(США) по методу Вогn, с графической регистрацией интенсивности идинамики агрегации тромбоцитов при перемешивании их со стимуляторамиагрегациивкюветефотоэлектрической(оптическойагрегометра.регистрацииплотности)образцаПринципдинамикиплазмыметодаизменениябогатойоснованнасветопропусканиятромбоцитамиприперемешивании с индукторами агрегации: раствор аденозиндифосфата (АДФ)конечной концентрации 110-3М, 110-5М, 110-7М; суспензия коллагена,раствор адреналина - 110-3М; арахидоновой кислоты 110-5М.Предварительная оценка агрегатометра проводилась в зависимости оттипов кривых: "необратимая агрегация", "обратимая агрегация" (дезагрегация)и двухфазная агрегация (рис.
4). Количественная оценка параметров агрегациитромбоцитов проводилась после предварительной оценки по типам кривых, спомощью вычисления следующих параметров агрегации: Tma, Tва, ТДА, и tлп(рис. 5).Характеристика параметров агрегации: Тма (%) - величина максмальнойагрегации, определяется отношением величины изменения светопропусканияобразца исследуемой плазмы к величине интервала светопропускания от 0% до100%, характеризует интенсивность агрегации. Тва (%) - величина вторичнойагрегации, определяется отношением изменения светопропускания образцаплазмы на этапе вторичной агрегации к величине интервала от 0% досветопропускания 100%, характеризует интенсивность вторичной агрегации(только для двухфазных кривых агретограммы).
Тда (%) - величинадезагрегации, определяется отношением изменения светопропускания образца51исследуемой плазмы на этапе образования дезагрегации (только для обратимойагрегации). tлп (сек) - латентный период коллаген-агрегации и агрегации подвоздействием арахидоновои кислоты, от момента добавления стимулятора доначала реакции высвобождения эндогенных стимуляторов и синтеза ТхАз,характеризует время начала реакции высвобождения эндогенных стимуляторовагрегации и синтеза циклических эндопероксидов - простагландинов итромбоксана А2 в тромбоцитах.Т123tРис. 4.
Типы кривых агрегатограммы1- необратимая агрегация; 2-двухфазная агрегация;3- обратимая (дезагрегация) агрегация.matМомент добавления индуктора агрегацииРис. 5. Основные параметры агрегатограммы526. Определение антифосфолипидных антител. Основные принципыих выявления.Выявление антифосфолипидных антител (АФА) основывалось нарекомендациях Международного Общества по тромбозу и гемостазу,опубликованных в материалах XVI Всемирного конгресса по тромбозу игемостазу (Флоренция, Италия; июль 1997 г.) и XV Международного конгрессапо тромбозу (Анталия, Турция; октябрь 1998 г.). Эти диагностические подходыстали использоваться при диагностике АФС на кафедре акушерства игинекологии м/п факультета ММА им.
И. М. Сеченова (зав. кафедройпрофессор Макацария А. Д.) с сентября 1997г.Определение волчаночного антикоагулянта (ВА) включало 3 этапа:1) скрининг – тесты2) коррекционная проба3) подтверждающая проба с фосфолипидамиОдновременноопределениеантикардиолипиновыхантител(АКА)осуществлялось ELISA - методом и включало выявления изотипа и титраантител.Варианты полученных результатов были следующими:АКА - ВА АКА + ВА +АКА + ВА АКА - ВА +Особое место в исследовании занимало выявление ВА как факторатромбофилии.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
