Диссертация (1140228), страница 11
Текст из файла (страница 11)
9).ПродуктыПЦРобнаруживаютв4%агарозномгелепослепрокрашивания бромистым этидием по флюоресценции в ультрафиолетовомсвете.Хотя в мировой практике описывается гомозиготная форма мутацииPtG20210А, нами были выявлены преимущественно гетерозиготные формы.Инкубация продукта ПЦР с рестриктазой TaqI сопровождается егополным расщеплением пр отсутствии мутации, частичным при наличиигетерозиготной мутации(дорожки 1,4 и 8).Рис. 9. Молекулярный анализ мутации PtG20210A.61В процессе ПЦР-диагностики полиморфизма GP Ia использоваласьрестриктаза HinfI, GP IIIa «1565 Т/С» - MspI, фибриногена «455 G/A» ирецептора ангиотензина II типа 1 «1166 А/С» – HaeIII, PAI-1 «675 4G/5G» –Bsc4I.СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКАПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХПолученныерезультатыобрабатывалисьметодомвариационнойстатистики и корреляционного анализа на персональном компьютере Pentium сиспользованием программного продукта БИОСТАТ.
Вероятность возможнойошибки каждого показателя (среднее арифметическое М, ошибка средней m,коэффициент корреляции) вычисляли по статистическому критерию Student.Сравнение признаков в группе производилось по разности параметров иоценки достоверности этой разности. Различия между статистическимивеличинами считали достоверными при уровне значимости p<0,05.62ГЛАВА IIIФАКТОРЫ АНГИОГЕНЕЗА И СТРУКТУРА ТРОМБОФИЛИИ УЖЕНЩИН С НЕУДАЧАМИ ЭКООдной из задач нашего исследования было изучение содержание СЭФР,генетических и приобретенных форм тромбофилии в сыворотке крови уженщин с неудачными попытками ЭКО.Было обследовано 115 пациенток, имевших неудачные попыткиэкстракорпоральногооплодотворения(Iисследуемаягруппа).Возрастпациенток был от 23 до 45 лет.
Все пациентки обратились в отделениевспомогательных репродуктивных технологий с целью лечения бесплодияметодом ЭКО. Число неудачных попыток ЭКО составило от 1 до 9.Алгоритмисследованиятромбофилическихвключалмутацийивыявлениегенетическихполиморфизмов,формциркуляцииантифосфолипидных антител и антител к кофакторам антифосфолипидныхантител, гипергомоцистеинемии и эндотелиального фактора роста.Полученные результаты оценивались с данными полученными приобследовании 50 здоровых беременных женщин с неосложненным течениембеременности (контрольная группа) и 50 пациенток с наступившей после ЭКОбеременностью (группа сравнения). Показанием для ЭКО в группе сравненияслужил мужской фактор бесплодия.Спектр определяемых генетических мутаций и полиморфизмов включал:• FV Leiden (G1691А)• протромбина G20210А• MTHFR (C677T)• PAI-1 («675 4G/4G», «675 4G/5G»)• фибриногена «455 G/A»• тромбоцитарных рецепторов GP 1а «807 C/T» и GP IIIa «1565 Т/С»• ангиотензин-превращающего фактора «I/D»; «D/D»• рецептора к ангиотензину II «1166А/С»63• тканевого активатора плазминогена «I/D».Полученные результаты представлены в таблице 5.Анализ полученных результатов показал высокую частоту выявлениягенетических тромбофилических мутаций и полиморфизмов у пациенток снеудачами ЭКО.Наиболее распространенной формой генетической мутации оказалсяполиморфизм гена PAI-1.
Он был диагностирован у 77 пациенток снеудачными попытками ЭКО, что составило 66,9%. Гетерозиготная формаполиморфизма«6754G/5G»присутствовалау39женщин(33,9%),гомозиготная форма («675 4G/4G») – у 38 обследованных (33,0%), то естьвстречались одинаково часто.Другой весьма распространенной формой генетической мутации упациенток с неудачными попытками ЭКО была мутация гена MTHFR C677T.Она имела место у 76 женщин (66,1%). Гетерозиготные формы этой мутациивыявлялись чаще (50,4%) – у 58 женщин. Частота гомозиготных формсоставила 15,7% (18 женщин).Высокую распространённость в исследуемой группе имел полиморфизм«I/D» в гене тканевого активатора плазминогена – был выявлен у 70 (60,9%)женщин, из них гомозиготная форма присутствовала у 24 (20,9%),гетерозиготная – у 46 (40,0%).Полиморфизм гена фибриногена «455 G/A» выявлен у 55 (47,8%)пациенток, из них гетерозиготный - у 36 (31,3%), гомозиготный - у 19 (16,5%).Полиморфизмытромбоцитарныхгликопротеиновтакжеоказалисьдостаточно распространенными среди пациенток, имеющих неудачныепопытки ЭКО.
Полиморфизм тромбоцитарного гликопротеина GP Iа «807 G/Т»был выявлен в 59 случаях (51,3%), из которых 53 (46,1%) составилигетерозиготные формы. Гомозиготная форма полиморфизма имела местотолько у 5 (5,2%) пациенток.Распространенность полиморфизм тромбоцитарного гликопротеина GPIIIа «1565 T/C» составила 35,7% (выявлен у 41 женщины), гетерозиготные64формы полиморфизма составили 32,2%, гомозиготные – 3,5% (37 и 4пациентки соответственно).Мутация FV Leiden была обнаружена у 6 (5,2%) пациенток, во всехслучаях в гетерозиготной форме. Мутация протромбина G20210A не былавыявлена ни у 1 пациентки.У 28 (24,3%) пациенток был обнаружен полиморфизм гена ангиотензинпревращающего фактора «I/D», их которых чаще встречалась гомозиготнаяформа – у 19 (16,5%). Гетерозиготная форма выявлена у 9 (7,8%) пациенток.У 10 (18,2%) пациенток - полиморфизм рецептора к ангиотензину II«1166 А/С» встречался относительно не часто.
Диагностирован у 23 (29,0%)женщин, преобладали гетерозиготные формы – 15,6% (18 женщин).Гомозиготные формы выявлены у 5 (4,3%).Полученные данные демонстрируют высокую частоту выявлениягенетических тромбофилических мутаций и полиморфизмов у пациенток снеудачами ЭКО.В контрольной группе и группе сравнения указанные генетическиемутации и полиморфизмы выявлялись достоверно реже.В группе сравнения из выявляемых мутаций и полиморфизмов былиобнаруженыполиморфизмгенаPAI-1(толькогетерозиготнаяформаполиморфизма «675 4G/5G») у 3 пациенток (6%), мутация гена MTHFR C677Tтакже у 3 (6%) женщин, из которых у 2 (4%) была гетерозиготная, у 1 –гомозиготная форма мутации (2%).Полиморфизм гена фибриногена «455 G/A» выявлен у 2 (4%) пациенток,у обеих в гетерозиготной форме.У1пациенткибылвыявленполиморфизмтромбоцитарногогликопротеина GP Iа «807 G/Т» гетерозиготной формы, у 2 (4%) –полиморфизм тромбоцитарного гликопротеина GP IIIа «1565 T/C» (в одномслучае (2%) гомозиготный, в 1 (2%) – гетерозиготный).65Таблица 5Распространенность генетических тромбофилических мутаций иполиморфизмов у пациенток с неудачами ЭКОГенетические мутацииI группа,n=115группасравнения, n=50контрольнаягруппа, n=50n%n%n%FV Leidenгомозиготная65,20012000000гетерозиготнаяМутация протромбина G20210A65,20012000000гомозиготнаягетерозиготная000000000000MTHFR C677T7666,13648гомозиготнаягетерозиготнаяПолиморфизм PAI-1гомозиготная «675 4G/4G»гетерозиготная «675 4G/5G»Полиморфизм «807 G/Tтромбоцитарного рецептора Gp Iaгомозиготнаягетерозиготная1815,712125850,4243677383966,933,033,93036064138265951,312366535,246,1010212244135,7242443,512123732,212122320,000245184,315,6000011222824,324361916,5001297,824245547,824121916,500003631,324127060,90022244620,940,000000202Полиморфизм «1565 T/Cтромбоцитарного рецептора Gp IIIaгомозиготнаягетерозиготнаяПолиморфизм «1166 A/C» в генерецептора ангиотензина II 1-го типа(ATGR1)гомозиготнаягетерозиготнаяПолиморфизм «I/D» в генеангиотензинпревращающегоферментагомозиготнаягетерозиготнаяПолиморфизм «-455G/A» в генефибриногенагомозиготнаягетерозиготнаяПолиморфизм «I/D» в генетканевого активатора плазминогенагомозиготнаягетерозиготная66Из других мутаций и полиморфизмов был выявлен гетерозиготныйполиморфизм гена ангиотензин-превращающего фактора «I/D»У 2 (4%)пациенток.В контрольной группе частота выявляемых мутаций и полиморфизмовоказалась также небольшой.
Статистически значимых различий междуконтрольной группой и группой сравнения не было.4 пациентки имели мутацию гена MTHFR C677T. У 3 (6%) мутация былав гетерозиготной форме, у 1 (2%) – в гомозиготной.Полиморфизм гена PAI-1 был обнаружен также у 4 (8%) женщин; у 3пациенток из них (6%) гетерозиготный «675 4G/5G».Полиморфизм тромбоцитарного гликопротеина GP Iа «807 G/Т» былвыявлен у 3 (6%) пациенток (у 2 из них (4%) гетерозиготной формы, у 1 (2%)гомозиготный). Полиморфизм тромбоцитарного гликопротеина GP IIIа «1565T/C» присутствовал у 2 (4%) (в одном случае (2%) гомозиготный, в 1 (2%) –гетерозиготный).Полиморфизм гена фибриногена «455 G/A» выявлен только у 1 (2%)пациентки, в гетерозиготной форме.Из других мутаций и полиморфизмов были выявлены: гетерозиготныйполиморфизм «I/D» в гене тканевого активатора плазминогена у 2 (4%)женщин, полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фактора «I/D» у 3(6%) пациенток (в одном случае (2%) гомозиготный, в 2 (4%) –гетерозиготный), полиморфизм «1166 A/C» в гене рецептора ангиотензина II 1го типа (ATGR1) у 2 (4%) женщин (гомозиготный и гетерозиготныйсоответственно).
У 1 женщины имелась мутация FV Leiden (2%), вгетерозиготной форме.Анализ структуры генетической тромбофилии у пациенток с неудачамиЭКОпоказалвысокуюраспространенностьполиморфизмовгенов,ответственных за фибринолиз (полиморфизм гена PAI-1, полиморфизм «I/D» вгене тканевого активатора плазминогена и полиморфизм гена фибриногена«455 G/A»), которые в ряде случаев выявлялись комбинированно.67Почти половина (48,7%) всех пациенток с неудачами ЭКО (56 женщин)имели сочетано полиморфизм гена PAI-1 и полиморфизм «I/D» в генетканевогоактиватораплазминогена, 28(24,3%)женщин–сочетанополиморфизм гена тканевого активатора плазминогена и полиморфизм генафибриногена; 37 (32,2%) имели одновременно все три мутации.
У 27 из них(23,5%) указанные мутации выявлялись комбинированно с циркуляцией АФА(табл. 6).Таблица 6Распространенность комбинированных форм тромбофилии у пациенток снеудачами ЭКОФорматромбофилииПолиморфизм PAI-1 + ТПАПолиморфизм PAI-1 + фибриногенаПолиморфизм PAI-1 + ТПА +фибриногенаПолиморфизм PAI-1+ АФА+ ТПА +фибриногенаГенетические формы + АФСГенетические формы +гипергомоцистеинемияГенетические формы + АФС+гипергомоцистеинемияI группаn=115группасравнения, n=50контрольнаягруппа, n=50n5637%48,732,2n00%00n00%002824,300002723,500004034,800002723,512,0001210,40000Циркуляция антифосфолипидных антител была выявлена у 47 (40,9%)женщин с неудачами ЭКО.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
