Диссертация (1139725), страница 26

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 26)

В качестве раствора сравнения использовали этанол95 %.Если оптическая плотность превышает 0,8, испытуемый раствор разводятспиртом 95 % и вычисляют коэффициент разведения (К).Параллельно измеряют оптическую плотность стандартного раствора.Содержание суммы нафтохинонов в ЛРП в пересчете на юглон (Х) в процентах рассчитывали по формуле (6):(6)где Ax – оптическая плотность испытуемого раствора;A0 – оптическая плотность испытуемого раствора;V(а) – объём жидкого экстракта, мл или навеска сухого экстракта, г;а0 – навеска юглона, г.208Эксперименты по каждому объекту проведены в шести повторностях. Результаты анализа представлены в таблице 67.Таблица 67 – Содержание нафтохинонов в пересчёте на юглон в экстрактахореха грецкого жидком и сухомОбразецХi, %fS210-7SРT(P,f)∆xεЭкстракт жидкий10,031; 0,029; 0,031;0,030; 0,032; 0,03250,0312,50,0005952,570,00123,9820,030; 0,029; 0,027;0,028; 0,029; 0,02950,0291,60,0004952,570,00113,7830,032 ;0,032; 0,033;0,031; 0,032; 0,03150,0326,40,0008952,570,00082,48Экстракт сухой10,11; 0,10; 0,11;0,11; 0,11; 0,1150,11290,0017952,570,00433,9520,098; 0,10; 0,10;0,092; 0,095; 0,1050,10200,0014952,570,00353,5930,090; 0,091; 0,090;0,092; 0,094; 0,09550,098,10,0009952,570,00222,39Как следует из данных таблицы, погрешность определения во всех случаях не превышает 5 %, что является допустимым уровнем отклонения для использованного метода анализа и позволяет считать разработанные методикипригодными для стандартизации ЛФ.7.2.3 Валидация методик анализа фармацевтических субстанций«Ореха грецкого экстракт жидкий» и «Ореха грецкого экстрактсухой»На основании полученных результатов разработаны проекты ФСП «Ореха грецкого экстракт жидкий (1 : 1)» (приложение 13) и «Ореха грецкого экстракт сухой» (приложение 14).

Методики анализа, включённые в проекты ФСП,валидированы.Для подтверждения обоснованности выбора методики доказательстваподлинности установлена специфичность процедуры ТСХ анализа субстанций«Ореха грецкого экстракт жидкий (1 : 1)» и «Ореха грецкого экстракт сухой».209Для проведения испытания на подлинность были взяты образцы субстанции трех серий.

Из каждой серии подготовлены две параллельные пробы.Приготовление испытуемого раствора «Ореха грецкого экстракт жидкий(1 : 1)»: 10,0 мл субстанции помещали в коническую термостойкую колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 40 мл кислоты хлористоводородной разведённой и 10 мл раствора железа (III) хлорида 1 %, присоединяли обратный холодильник и нагревали на водяной бане при температуре 60 °C в течение 1 часа,охлаждали, переносили в делительную воронку вместимостью 250 мл и экстрагировали диэтиловым эфиром 3 раза порциями по 15 мл, каждый раз взбалтывая в течение 2 мин. Эфирные извлечения объединяли, фильтровали черезфильтр «красная лента» с 5 г натрия сульфата безводного в сухую термостойкую круглодонную колбу.

Эфирное извлечение упаривали при температуре40 °C досуха, остаток растворяли в 15 мл этанола 95 % и количественно с помощью 5 мл того же спирта переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл.Объем раствора доводили тем же спиртом до метки и перемешивали (испытуемый раствор).Приготовление испытуемого раствора «Ореха грецкого экстракт сухой»:около 0,5 г (точная навеска) субстанции помещали в коническую колбу сошлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл воды, 40 мл кислоты хлористоводородной разведённой, 10 мл раствора железа (III) хлорида, присоединялиобратный холодильник и нагревали на водяной бане при температуре 60 °C втечение 1 часа при периодическом перемешивании.

Содержимое колбы охлаждали, количественно с помощью 10 мл воды переносили в делительную воронку вместимостью 100 мл, экстрагировали эфиром 3 раза порциями по 15 мл,каждый раз перемешивая в течение 2 мин. Эфирные извлечения последовательно фильтруют через бумажный фильтр «белая лента» с 2 г натрия сульфата безводного в сухую колбу для отгона, затем упаривали при температуре 40 °C досуха, остаток растворяли в 15 мл спирта 95 % и количественно с помощью 5 млтого же спирта переносилив мерную колбу вместимостью 25 мл.

Объем раствора доводили тем же спиртом до метки и перемешивали (испытуемый раствор).210Приготовление раствора СО юглона: около 0,01 г (точная навеска) СОюглона помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в 15 млспирта 96 %, затем объем доводили тем же спиртом до метки и перемешивали(раствор А). 1,0 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл,доводили до метки спиртом 95 % и перемешивали (раствор Б).Критерий приемлемости при оценке специфичности метода: на хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции жёлтогоцвета с Rf 0,8 (юглон), которая при выдерживании пластинки над парами аммиака должна изменить окраску на фиолетовую.Нанесли по 0,02 мл испытуемых растворов и 0,005 мл раствора СО юглона в виде полос шириной около 20 мм на линию старта хроматографическойпластинки марки Сорбфил ПТСХ-АФ-А размером 10×15 см, предварительноактивированной в сушильном шкафу в течение 1 часа при температуре (100105) °C, высушили на воздухе в течение 30 мин, затем поместили в хроматографическую камеру, предварительно насыщенную в течение 20 мин смесьюрастворителей петролейный эфир – диэтиловый эфир (10 : 3,5), и хроматографировали восходящим способом.

Когда фронт растворителей прошёл около10 см, пластинку вынули из камеры, высушили на воздухе в течение 15 мин.Результаты анализа представлены в таблице 68.Таблица 68 – Оценка специфичности анализа нафтохинонов в экстрактах листьев ореха грецкого жидком и сухом методом ТСХИспытуемоеЛРСRfОкраска зон адсорбциив дневном светепри обработке парами аммиакаОреха грецкого экстракт жидкийсерия 1серия 2серия 310,8жёлтаяфиолетовая20,8жёлтаяфиолетовая10,8жёлтаяфиолетовая20,8жёлтаяфиолетовая10,8жёлтаяфиолетовая20,8жёлтаяфиолетовая211ИспытуемоеЛРСRfОкраска зон адсорбциив дневном светепри обработке парами аммиакаОреха грецкого экстракт сухой10,8жёлтаяфиолетовая20,8жёлтаяфиолетовая10,8жёлтаяфиолетовая20,8жёлтаяфиолетовая10,8жёлтаяфиолетовая20,8жёлтаяфиолетоваяСО юглона0,8жёлтаяфиолетоваясерия 1серия 2серия 3Как следует из данных, приведённых в таблице 70, на хроматограммахнаблюдаются зоны адсорбции с Rf 0,8 жёлтого цвета (при просматривании вдневном свете), меняющие окраску на фиолетовую при обработке парами аммиака, соответствующие зоне адсорбции СО юглона.

Таким образом, аналитическая методика удовлетворяет критериям приемлемости.Также необходимо подтвердить обоснованность выбора фотоколориметрического метода для количественного определения содержания суммы нафтохинонов в пересчете на юглон в субстанциях «Ореха грецкого экстракт жидкий(1 : 1)» и «Ореха грецкого экстракт сухой».Проверяли такие параметры, как линейность, специфичность, правильность, повторяемость, межоперационная точность. Результаты валидации представлены в таблице 69.Таблица 69 – Результаты валидации методики количественного определениясуммы нафтохинонов в пересчёте юглон в экстрактах ореха грецкого листьевПоказателиЛинейностьКритерийприемлемостиУстановленные для экстрактажидкогосухогоy = a + bx,|r| ≥ 0,99y = 0,003 + 0,001xr = 0,999y = 0,003 + 0,001xr = 0,99695 – 105100,17100,1850,730,77Специфичность открываемость, % относительная систематическая ошибка, δ %212ПоказателиКритерийприемлемостиУстановленные для экстрактажидкогосухого97 – 10399,8899,76 относительная систематическая ошибка, δ %30,270,32Повторяемость, RSD (%)20,381,70Межоперационная точность,RSD (%)30,401,80Правильность, RSD (%) открываемость, %Методика количественного определения содержания суммы нафтохинонов в пересчете на юглон и сухое вещество фотометрическим методом в субстанциях «Ореха грецкого экстракт жидкий (1 : 1)» и «Ореха грецкого экстрактсухой» соответствует критериям приемлемости.7.2.4 Разработка состава и анализ таблеток порошка ореха грецкоголистьевДля изучения таблеток с порошком листьев ореха получали экспериментальные образцы методом прессования.

В качестве вспомогательных веществиспользовали эфиры целлюлозы, кальция стеарат, тальк. Готовый продуктпредставлял собой таблетки плоскоцилиндрической формы светло-зелёногоцвета. Средняя масса одной таблетки – 0,3 ± 0,001 г. Распадаемость таблетки неболее 15 мин, что соответствует требованиям ГФ XIII.Для подтверждения подлинности порошка листьев ореха в составе таблеток изучали микропрепараты по стандартным методикам.Для приготовления микропрепаратов таблетки ореха грецкого листьевраздавливали пестиком в ступке до крупного порошка. Порошок помещали напредметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата, накрывали покровнымстеклом и слегка подогревали.При просматривании препаратов под микроскопом обнаружены фрагменты листа, на которых можно наблюдать участок анастамоза жилок, обрывкиэпидермы, сосудов с кристаллоносной обкладкой, фрагменты хлорофиллсодер-213жащего мезофилла, эфирномасличные желёзки, друзы оксалата кальция, простые одноклеточные волоски и головчатые волоски с бурым содержимым (рисунок 82).1 – эфирномасличная желёзка и фрагменты мезофилла; 2 – фрагмент листа ореха грецкого,участок с жилкой; 3 –простой одноклеточный волосок, обрывки эпидермы и мезофилла;4 – головчатый волосок с бурым содержимым; 5 – друза оксалата кальция;6 – обрывки сосудов с кристаллоносной обкладкойЦена деления микролинейки 0,01 мм.Рисунок 82 – Микроскопия порошка таблеток ореха грецкого листьевОбнаруженные анатомо-диагностические признаки позволяют идентифицировать листья ореха грецкого в составе таблеток, что является основой дляразработки раздела «Микроскопия» в проект нормативной документации.Для анализа нафтохинонов 20 таблеток растирали в ступке до полученияпорошка, который помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, при-214бавляли 100 мл спирта этилового 20 % и перемешивали на магнитной мешалкев течение 1 ч.

Затем смесь выдерживали в течение 15 мин и фильтровали черезбумажный фильтр «красная лента», декантируя извлечение с порошка. Операцию повторяли еще 2 раза в тех же условиях. Фильтрат упаривали на роторномиспарителе под вакуумом при температуре 85-90 °C до достижения объемаоколо 20 мл. Остаток количественно с помощью 20 мл воды переносили в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 10 мл растворажелеза (III) хлорида 1 %, 40 мл кислоты хлористоводородной разведенной8,3 %, присоединяли обратный холодильник и нагревали на водяной бане притемпературе 60 °C в течение 1 часа.

Характеристики

Список файлов диссертации