Диссертация (1139725), страница 22
Текст из файла (страница 22)
1,0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью10 мл, доводили до метки этанолом 95 % и перемешивали.Юглон обнаруживали в извлечении органическим растворителем, придавая ему жёлтый цвет, только после гидролиза. При добавлении к гидролизатураствора натрия гидроксида 5 %, образовывалось оранжево-красное окрашивание.Нафтохиноны способны возгоняться, поэтому для экспресс-анализа использовали реакцию микросублимации, нагревая около 0,2 г ЛРС в фарфоровомтигле на электрической плитке.
При наличии нафтохинонов сублимат конденсировался на стенках тигля в виде мелких капель жёлтого цвета (юглон). Приперенесении капель сублимата в пробирку и добавлении раствора натрия гидроксида 5 % образовывалась оранжевая окраска.Результаты качественного анализа ЛРС ореха грецкого, ореха серого иореха чёрного представлены в таблице 53.Таблица 53 – Результаты первичного экспресс-анализа нафтохинонов в образцах ЛРС видов рода JuglansОкраскаизвлеченияс растворомнатриягидроксидасублиматкоражёлтаяоранжеваяжёлтаялистьяжёлтаяоранжеваяжёлтаякоражёлтаяоранжеваяжёлтаялистьяжёлтаяоранжеваяжёлтаяжёлтаяоранжеваяжёлтаяжёлтаяоранжеваяжёлтаякоражёлтаяоранжеваяжёлтаялистьяжёлтаяоранжеваяжёлтаяжёлтаяоранжеваяжёлтаяжёлтаяоранжеваяжёлтаяЛРСJuglans cinerea L.Juglans nigra L.Juglans regia L.плодывысушенныеплодысвежиеплодывысушенныеплодысвежие174Как следует из данных, представленных в таблице в гидролизате, полученном из всех видов ЛРС рода Juglans, обнаружен юглон.Юглон в испытуемых растворах идентифицировали методом ТСХ.Микрошприцем наносили по 0,02 мл испытуемых растворов и раствораСО юглона на линию старта хроматографической пластинки, хроматографирование вели в условиях, описанных в главе 2, используя смесь 1 (петролейныйэфир – диэтиловый эфир 10 : 3,5), смесь 2 (петролейный эфир – диэтиловыйэфир – муравьиная кислота 7 : 3 : 0,2) и смесь 3 (бензол – петролейный эфир1 : 1).
Юглон идентифицировали в виде зоны адсорбции жёлтого цвета, меняющей окраску на фиолетовую при обработке парами аммиака, соответствующей зоне адсорбции СО юглона. Результаты эксперимента представлены втаблице 54.Таблица 54 – Результаты ТСХ-анализа испытуемых растворовRf в смесиОкраскаЛРС123безобработкипосле обработкипарами аммиакакора0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетоваялистья0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетоваякора0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетоваялистья0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетовая0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетовая0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетоваякора0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетоваялистья0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетовая0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетовая0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетовая0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетоваяJuglans cinerea L.Juglans nigra L.Juglans regia L.Юглон СОплодывысушенныеплодысвежиеплодывысушенныеплодысвежие175Таким образом, в испытуемых растворах, полученных после гидролизаизвлечений из исследуемого ЛРС, идентифицировали юглон.Для количественного определения суммы нафтохинонов в пересчёте наюглон в ЛРС видов рода Juglans использовали разработанную нами методикуфотоколориметрического определения (п.
4.3.2). Эксперименты по каждомуобъекту проведены в шести повторностях. Результаты анализа, обработанныестатистически, представлены в таблице 55.Таблица 55 – Содержание суммы нафтохинонов в пересчёте на юглон в ЛРСвидов рода Juglansfxs210-7s50,0588,10,00099550,0322,50,0005кора0,11; 0,12; 0,11;50,12; 0,11; 0,110,1144листья0,24; 0,25; 0,23;50,25; 0,23; 0,240,24плоды0,19; 0,18; 0,18;5высушенные 0,20; 0,19; 0,19ЛРСХi, %кораJ. cinereaлистьяJ. nigra0,028; 0,028;0,027; 0,028;0,028; 0,0290,037; 0,037;кора0,038; 0,040;0,036; 0,0400,083; 0,085;листья0,082; 0,085;0,083; 0,810,070, 0,071,плоды0,064, 0,070,высушенные0,071, 0,0700,0058; 0,0057;плоды0,0058; 0,0059;свежие0,0056; 0,0057плодысвежиеJ. regia0,057; 0,057;0,058; 0,060;0,060; 0,0540,032; 0,030;0,032; 0,033;0,034; 0,032Р T(P,f)∆xε2,570,0024,10952,570,0014,340,0021952,570,0054,781400,0037952,570,0093,910,195600,0075952,570,0084,1950,0284,00,00063 952,570,0012,3750,0384,90,0007952,570,0024,6250,0834,90,0007952,570,0022,0250,0690,10,0001952,570,0034,0250,005812,00,0011952,57 0,0001 1,91176Как следует из полученных данных, максимальное содержание суммынафтохинонов в пересчёте на юглон зафиксировано в листьях J.
nigra(0,24 ± 0,009 %).6.4 Анализ дубильных веществ в лекарственном растительном сырьевидов рода JuglansДля морфологической группы ЛРС «Коры» характерной группой БАВявляются дубильные вещества. Определение содержания дубильных веществпроводили перманганатометрическим титрованием в пересчете на танин по методике ГФ XIII [18]. Результаты представлены в таблице 56.Таблица 56 – Содержание дубильных веществ в ЛРС видов рода Juglans в пересчете на танинСодержание дубильных веществ в пересчётена танин, %ЛРСкора5,28 0,05; ε= 1,01 %листья3,25 0,06; ε= 1,89 %кора7,39 0,07; ε= 1,02 %листья8,67 0,20; ε= 2,25 %плоды высушенные8,75 0,18; ε= 2,07 %плоды свежие8,21 0,10; ε= 1,18 %кора4,79 0,05; ε= 1,13 %листья2,43 0,05; ε= 2,01 %плоды высушенные3,48 0,07; ε= 2,05 %плоды свежие2,98 0,05; ε= 1,66 %J.
cinereaJ. nigraJ. regiaЛРС видов рода Juglans по содержанию дубильных веществ сопоставимос фармакопейными видами ГФ XIII (например, кора калины – не менее 4,0 % впересчёте на танин).1776.5 Анализ прочих фенольных соединений в лекарственном растительномсырье видов рода JuglansИзучение состава фенольных соединений листьев ореха грецкого и орехачёрного и плодов ореха грецкого незрелых высушенных проводили методомВЭЖХ. Получали извлечения по следующей методике: 2,0 г измельченногоЛРС помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл спирта этилового 70 % и выдерживали при периодическом перемешивании в течение 2 сут.Затем извлечения фильтровали через бумажный фильтр «красная лента» (испытуемый раствор).
Параллельно готовили серию растворов стандартных образцов в спирте этиловом 70 %. анализ проводили в условиях, описанных в главе 2.В извлечениях, полученных из листьев Juglans regia, обнаружено 20 фенольных соединений (рисунок 70), плодов J. regia – 22 фенольных соединения(рисунок 71), листьев J. nigra – 19 фенольных соединений (рисунок 72).При сравнивании времени удерживания СО и данных, полученных дляиспытуемых растворов, в извлечении из листьев J. regia идентифицированыкофейная кислота, розмариновая кислота, мирицетин, из листьев J. nigra – вератровая кислота, гентизиновая кислота, умбеллиферон (таблица 57).1 - collagen hydrolysat #18 [modified by Lab_1]2 - collagen hydrolysat #18 [normalized]1 400 3 - collagen hydrolysat #18 [normalized]mAUUV_VIS_1UV_VIS_3UV_VIS_4WVL:220 nm12 - 14,66310 - 14,2679 - 13,39711 - 14,4761 0001516 -- 15,83415,9687501314 -- 15,19315,3285001 - 7,5704 - 9,9191718- 10kDA - 17,061- 17,6368 - 12,5753 - 9,130711,174- 12,01256- -10,78825019 - 19,18120 - 21,9112 - 8,446123-200,0min5,010,015,020,025,030,035,0Рисунок 70 – Хроматограмма фенольных соединений листьев J.
regia (ВЭЖХ)1781 - collagen hydrolysat #15 [modified by Lab_1]2 - collagen hydrolysat #15 [normalized]walnut fruit3collagenhydrolysat#15[normalized]walnut fruit1 100mAUUV_VIS_1UV_VIS_3UV_VIS_4WVL:220 nm11 - 11,65580013 - 12,55412 - 12,14015 - 13,45814 - 13,21960010 - 10,4004009 - 10,1677 - 9,1312 - 4,8043 - 5,6808 - 9,6786 - 8,37420017 - 14,68316 - 14,03718 - 15,32719 - 15,60820 21- 16,284- 10 kDA - 17,0715 - 7,5131 - 4,0774 - 6,54822 - 26,162123-200,0min5,010,015,020,025,030,035,0Рисунок 71 – Хроматограмма фенольных соединений плодов J. regia (ВЭЖХ)1 - collagen hydrolysat #13 [modified by Lab_1]2 - collagen hydrolysat #13 [normalized]black nutblack nut2 800 3 - collagen hydrolysat #13 [normalized]mAUUV_VIS_1UV_VIS_3UV_VIS_4WVL:220 nm11 - 12,6082 00013 - 13,48012 - 13,2611 50016 - 15,69714 - 14,0661 00015 - 14,8132 - 4,8495007 - 10,45010 - 12,23117 - 17,1556 - 9,1464 - 7,611 8 - 10,8125 - 8,457 9 - 11,3141 - 4,0913 - 5,77419 - 32,87518 - 24,764123-200,0min5,010,015,020,025,030,035,0Рисунок 72 – Хроматограмма фенольных соединений листьев J.
nigra (ВЭЖХ)179Таблица 57 – Фенольные соединения листьев, плодов J. regia и листьев J. nigra,обнаруженные методом ВЭЖХОбнаруженные веществаАрбутинНИВГесперидинЛютеолин-7-глюкозидГалловая кислотаНИВНИВНИВНИВПротокатеховая кислотаНИВНИВХлорогеновая кислотаНИВНИВНИВп-Гидроксибензойная кислотаЭскулетинВанилиновая кислотаКофейная кислотаНИВНИВГентизиновая кислотаНИВРутинНИВНИВНИВЭллаговая кислотаНИВНИВНИВНИВСкополетинФеруловая кислотаНИВУмбеллиферонНИВВератровая кислотаНИВНИВНИВРозмариновая кислотаНИВСО,t, минJ.
regiaJ. regiaJ. nigraлистьяплодылистьяt, мин Х, % t, мин Х, % t, мин Х, %3,54,081,184,090,984,805,683,323,034,855,525,771,417,612,888,469,151,302,1910,4510,813,271,6611,311,5812,2312,614,5919,9913,2610,2013,4814,0713,0611,3314,815,344,34,54,76,551,607,512,437,07,574,478,459,130,892,488,18,379,39,79,99,99,923,229,134,779,682,4810,1710,403,304,203,8110,792,2811,172,4211,011,6614,4012,149,0011,912,0112,573,353,0312,559,0913,225,5812,913,013,313,4012,6913,514,714,2714,4814,6612,135,3211,0513,4614,049,715,0614,686,05180Обнаруженные веществаСО,t, минJ. regiaJ.
regiaJ. nigraлистьяплодылистьяt, мин Х, % t, мин Х, % t, мин Х, %15,19 3,1715,33 3,15 15,33 3,7015,61 3,0415,70 10,1415,83 5,9015,97 7,1616,28 1,9817,06 3,87 17,07 2,4517,16 3,9117,64Мирицетин15,2НИВБензойная кислота15,6НИВНИВНИВНИВНИВНИВНИВЛютеолин17,8Кверцетин18,1НИВНИВ19,18 6,63Корихниновая кислота19,3НИВ21,91 1,36Юглон22,9НИВ24,76 0,37НИВ26,16 0,41НИВ32,87 0,28Олеаноловая кислота35,0Примечание: НИВ – неидентифицированное вещество; t – время удерживания в минутах,X, % – содержание обнаруженного вещества в процентах от суммы фенольных соединений.Сопоставляя времена удерживания, можно заключить, что качественныйсостав фенольных соединений исследуемого ЛРС видов рода Juglans различен,совпадения обнаружены только для двух неидентифицированных соединений(9,13 и 12,57 мин).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
