Диссертация (1139725), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Полученные фракции взвешивали и рассчитывали процентное содержание от массы ЛРС (рисунок 51).137Рисунок 51 – Фракции травы Onosma armeniaca, O. caucasica и O. sericea(% от массы ЛРС)Как следует из данных, представленных на рисунке 51, при последовательном выделении фракций БАВ из ЛРС различия в их распределении междувидами рода оносма небольшие.Для идентификации основных групп БАВ получали раствор каждойфракции по следующей методике: около 0,1 г фракции помещали в мернуюколбу вместимостью 25 мл, добавляли соответствующий растворитель, растворяли при перемешивании, доводили до метки и перемешивали.
Полученныерастворы анализировали с помощью: качественных реакций, перечисленных в главе 2, ТСХ в смесях растворителей петролейный эфир – диэтиловый эфир(10 : 3,5), хлороформ – метанол (8 : 2), хлороформ – муравьиная кислота – вода (6 : 3 : 1), этилацетат – муравьиная кислота – вода (10 : 2 : 3), спектрофотометрии (максимумы поглощения обнаружены только в извлечениях, полученных хлороформом, спиртом 95 % и спиртом 70 %).Результаты анализа представлены в таблице 39.138Таблица 39 – Результаты качественного анализа фракций, выделенных из травывидов рода OnosmaТраваФракцииХO. armeniacaДубильные вещества, сапонины, алкалоидыЭ-70Дубильные вещества, флавоноиды, фенолкарбоновые кислотыДубильные вещества, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты,сапониныВПолисахаридыХХлорофилл, каротиноиды, алкалоиды, нафтохиноны (следы)Э-95Дубильные вещества, сапонины, алкалоидыЭ-70ВДубильные вещества, флавоноиды, фенолкарбоновые кислотыДубильные вещества, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты,сапониныПолисахаридыХХлорофилл, алкалоиды, каротиноидыЭ-40O.
sericeaХлорофилл, каротиноиды, алкалоиды, нафтохиноны (следы)Э-95Э-40O. caucasicaОбнаруженные группы БАВЭ-95Дубильные вещества, сапонины, алкалоидыЭ-70Дубильные вещества, флавоноиды, фенолкарбоновые кислотыДубильные вещества, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты,сапониныЭ-40ВПолисахаридыКак следует из данных, представленных в таблице 39, нафтохиноны присутствуют в следовых количествах, что не позволяет использовать эту группуБАВ, как для подтверждения подлинности, так и для оценки качества ЛРС.Перспективным являются исследование фенольных соединений.Изучение состава фенольных соединений проводили методом ВЭЖХ.
Изобразцов травы видов рода Onosma получали извлечения по следующей методике: 2,0 г измельченного до размера частиц 2 мм ЛРС помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл спирта этилового 70 % и выдерживалипри периодическом перемешивании в течение 2 суток при комнатной температуре. Затем извлечение фильтровали через бумажный фильтр «красная лента»(испытуемый раствор). Параллельно готовили серию растворов СО в спиртеэтиловом 70 %.139ВЭЖХ-анализ проводили в условиях, описанных в главе 2. Полученныехроматограммы представлены на рисунках 52-54.1 - collagen hydrolysat #26 [modified by Lab_1]2 - collagen hydrolysat #26 [normalized]1 100 3 - collagen hydrolysat #26 [normalized]mAUUV_VIS_1UV_VIS_3UV_VIS_4WVL:220 nm3 - 9,4398006001 - 4,5904002 - 8,7222005 - 12,7176 - 14,0034 - 10,6077 - 32,936123-200,0min5,010,015,020,025,030,035,0Рисунок 52 – ВЭЖХ фенольных соединений травы Onosma armeniaca1 - collagen hydrolysat #24 [modified by Lab_1]2 - collagen hydrolysat #24 [normalized]onosma gunib3collagenhydrolysat#24[normalized]onosma gunib900mAUUV_VIS_1UV_VIS_3UV_VIS_4WVL:220 nm8 - 9,4391 - 4,5846007 - 9,14712 - 13,44940015--14,97715,177 16 - 19,100149 - 10,1486 - 8,88011 - 12,8825 - 8,48610 - 10,62113 - 14,0574 - 8,0753 - 7,5792 - 6,419200123-200,0min5,010,015,020,025,030,0Рисунок 53 – ВЭЖХ фенольных соединений Onosma caucasica35,01401 - collagen2 - collagen1 700 3 - collagenmAUhydrolysat #22 [modified by Lab_1]hydrolysat #22 [normalized]hydrolysat #22 [normalized]UV_VIS_1UV_VIS_3UV_VIS_4WVL:220 nm1 - 4,5641 2501 00075050010 - 19,0607 - 15,1916 - 13,46411 - 21,8198 -916,025- 10 kDA - 16,7584 - 11,0305 - 12,7633 - 8,5322 - 6,42425012 - 32,941123-200,0min5,010,015,020,025,030,035,0Рисунок 54 – ВЭЖХ фенольных соединений травы Onosma sericeaИдентифицировали вещества сравнивая время удерживания СО и данных,полученных для испытуемых растворов.
Результаты эксперимента представлены в таблице 40.Таблица 40 – Фенольные соединения травы видов рода Onosma, идентифицированные методом ВЭЖХO. armeniacaO. caucasicaO. sericeaСОt, минt, минX, %t, минАрбутин3,5----Гесперидин4,3----Лютеолина 7-глюкозид4,54,5923,044,55Протокатеховая кислота7,0---НИВ--6,433,446,42НИВ--7,603,07---8,102,09-НИВ--8,533,658,53НИВ8,726,73---8,88-----9,16Обнаруженные веществаХлорогеновая кислотаНИВп-ГидроксибензойнаякислотаНИВ8,19,3X, %12,81t, мин4,56X, %55,61-2,91-8,93-1,392,15141Обнаруженные веществаСОt, минНИВO.
armeniacaO. caucasicaO. sericeat, минX, %t, минX, %t, мин9,4436,549,469,01-Эскулетин9,7---Ванилиновая кислота9,9--10,14Кофейная кислота9,9----Гентизиновая кислота10,5----НИВ----НИВ10,618,04------НИВ---11,03НИВ--11,293,72-Эллаговая кислота--11,904,64-12,7213,3912,787,0512,76-------Рутин11,0НИВСкополетин5,22-Феруловая кислота13,0-Умбеллиферон13,3---13,44-----Вератровая кислотаРозмариновая кислота14,7X, %14,1413,463,743,225,26НИВ14,00НИВ-14,943,94-Мирицетин-15,187,6315,19---НИВ--16,035,20НИВ--16,763,58Бензойная кислота15,610,03Лютеолин17,8---Кверцетин18,1---Корихниновая кислота19,3---НИВ-19,09НИВ-Шиконин31,8НИВ32,94НИВ-2,243,828,1719,067,68-21,823,75--32,942,2532,9433,281,68-0,24Олеаноловая кислота35,0Примечание: НИВ – неидентифицированное вещество; t – время удерживания в минутах,X, % – содержание обнаруженного вещества в процентах от суммы фенольных соединений.142Как следует из данных, представленных в таблице 40, в извлечениях извсех исследуемых образцов идентифицирован лютеолин-7-глюкозид (впервыедля O.
armeniaca и O. sericea), который является доминирующим компонентомсуммы фенольных соединений. Вератровая, хлорогеновая, эллаговая кислоты,скополетинимирицетиндляисследуемыхвидовродаOnosmaидентифицированные впервые.Таким образом, установлено, что основной аналитической группой БАВпри содержании нафтохинонов ниже предела обнаружения в траве видов родаOnosma должны быть флавоноиды (сумма в пересчете на лютеолин-7глюкозид), фенолкарбоновые кислоты и дубильные вещества.Для анализа суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-глюкозид втраве видов рода Onosma разработали методику спектрофотометрического количественного определения.Методика: около 1,0 г (точная навеска) ЛРС, измельченного до размерачастиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, помещали в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 100 мл спирта70 % и взвешивали с погрешностью ± 0,01 г.
Колбу присоединяли к обратномухолодильнику, нагревали на водяной бане температуре 60 °C в течение 60 минут, периодически встряхивая для смывания частиц ЛРС со стенок. Затем колбус содержимым охлаждали до комнатной температуры, взвешивали и при необходимости доводили до первоначальной массы спиртом 70 %. Извлечениефильтровали через бумажный фильтр «красная лента», смоченный тем же растворителем, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).2,5 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 5 мл раствора алюминия хлорида 5 % в спирте 70 % и через 10 мин –1 мл раствора кислоты уксусной 3 %, доводили объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивали и оставляли на 30 мин (раствор Б).Через 30 мин измеряли оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 396 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя вкачестве раствора сравнения раствор, состоящий из 2,5 мл раствора А, 1 мл143раствора уксусной кислоты 3 %, доведенный спиртом 70 % до метки в мернойколбе вместимостью 25 мл.Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-О-глюкозидв абсолютно сухом ЛРС в процентах (А) вычисляли по формуле (5):(5)где А – оптическая плотность раствора Б;– удельный показатель поглощения лютеолин-7-О-глюкозида с алюминия хлоридом в спирте 70 % при длине волны 396 нм, равный 345;а – навеска ЛРС, г;W – влажность ЛРС, %.Результаты эксперимента представлены в таблице 41.Таблица 41 – Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-О–глюкозид в траве видов рода OnosmaХi, %fxs210-5sРT(P,f)∆xεO.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
