Диссертация (1139725), страница 15

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 15)

При добавлении к гидролизатураствора натрия гидроксида 5 %, образовывалось оранжево-красное окрашивание.Нафтохиноны способны возгоняться, поэтому для экспресс-анализа использовали реакцию микросублимации, нагревая около 0,2 г ЛРС в фарфоровомтигле на электрической плитке. При наличии нафтохинонов сублимат конденсировался на стенках тигля в виде мелких капель жёлтого цвета (юглон). Приперенесении капель сублимата в пробирку и добавлении раствора натрия гидроксида 5 % образовывалась оранжевая окраска.Результаты качественного анализа листьев ореха грецкого и ореха чёрного представлены в таблице 25.Таблица 25 – Результаты первичного экспресс-анализа нафтохинонов в образцах ЛРСОкраскаЛистьяизвлеченияс раствором натриягидроксидасублиматJuglans regiaжёлтаяоранжеваяжёлтаяJuglans nigraжёлтаяоранжеваяжёлтая109Юглон в испытуемых растворах идентифицировали методом ТСХ.Микропшприцем наносили по 0,02 мл испытуемых растворов и раствораСО юглона на линию старта хроматографической пластинки, хроматографирование вели в условиях, описанных в главе 2, используя смесь 1 (петролейныйэфир – диэтиловый эфир 10 : 3,5), смесь 2 (петролейный эфир – диэтиловыйэфир – муравьиная кислота 7 : 3 : 0,2) и смесь 3 (бензол – петролейный эфир1 : 1).

Юглон идентифицировали в виде зоны адсорбции жёлтого цвета, меняющей окраску на фиолетовую при обработке парами аммиака, соответствующей зоне адсорбции СО юглона (рисунок 38). Результаты экспериментапредставлены в таблице 26.Линия финишаЮглонЛиния стартаАБВА – хроматограмма без обработки; Б – хроматограмма после обработки парами аммиака;В - схема хроматограммыРисунок 38 – ТСХ гидролизованного извлечения из листьев Juglans nigra (1) иСО юглона (2)Таблица 26 – Результаты ТСХ-анализа испытуемых растворовсмесь 1смесь 2смесь 3безобработкиОкраскапосле обработки парамиаммиака0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетовая0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетовая0,80,80,4жёлтаясветло-фиолетоваяRfЛистьяJuglansregiaJuglansnigraЮглон СО110Таким образом, в извлечениях из листьев Juglans regia и Juglans nigra после гидролиза идентифицировали юглон.Для анализа юглона методом денситометрии хроматограммы сканировали и данные полученного графического файла обрабатывали программойSorbfil TLC Videodensitometer (рисунок 39).Рисунок 39 – Денситограма СО юглонаВ таблице 27 представлены результаты денситометрии испытуемого извлечения из листьев Juglans regia.Таблица 27 – Обработка изображения ТСХ программой Sorbfil TLCVideodensitometer после испытуемого извлечения из листьев Juglans regiaПикRfS%SH%H1-0,0110884113,6814920,620,0312453615,6750319,030,099694912,127026,840,22505706,323125,950,3113528316,9491912,560,3911246214,1536913,670,618883411,1586414,880,858217110,326746,8Сумма79964639492111Так как нафтохиноны имеют собственную окраску, то для ихколичественного определения применим метод фотоколориметрии, доступныйи простой в исполнении и аппаратурном оснащении.Линейная зависимость оптической плотности растворов юглона, определенная фотоэлектроколориметрическим методом, наблюдается в диапазонеконцентраций от 8 до 72 мкг/мл.Измеряли оптическую плотность испытуемых и стандартного растворов(описаны в пробоподготовке) на фотометре фотоэлектрическом КФК-3-01 придлине волны 440 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения использовали этанол 95 %. При условии, что оптическаяплотность превышает 0,8, испытуемый раствор разводили этанолом 95 % и вычисляли коэффициент разведения (К).Содержание суммы нафтохинонов в пересчете на юглон и абсолютно сухое ЛРС (Х) в процентах рассчитывали по формуле (4):(4)где A – оптическая плотность испытуемого раствора;A0 – оптическая плотность стандартного раствора;a – навеска ЛРС, в граммах;a0 – навеска юглона, в граммах;К – коэффициент разведения испытуемого раствора;W – влажность ЛРС, в процентах.Эксперименты по каждому объекту проведены в шести повторностях. Результаты анализа, обработанные статистически, представлены в таблице 28.Таблица 28 – Содержание суммы нафтохинонов в пересчёте на юглон в ЛРСЛистьяJuglansregiaJuglansnigraХi, %0,083; 0,085; 0,082;0,085; 0,083; 0,810,24; 0,25; 0,23;0,25; 0,23; 0,24fxs2sРT(P,f)∆xε50,0834,910-70,0007952,570,0022,0250,241,410-50,0037952,570,0093,91Как следует из данных, представленных в таблице 20, относительнаяошибка предложенной методики не превышает 5 %.1124.3.3 Валидация методик анализа юглонаПриготовление раствора СО юглона: около 0,01 г (точная навеска) СОюглона помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в 15 млспирта 95 %, затем объем доводили тем же спиртом до метки и перемешивали.1,0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл,доводили до метки спиртом 96 % и перемешивали.Приготовление испытуемых растворов: около 2,0 г (точная навеска) ЛРС,измельчённого до размера частиц 2 мм, помещали в коническую колбу, прибавляли 100 мл спирта этилового 20 % и перемешивали на магнитной мешалке втечение 1 ч.

Затем смесь выдерживали в течение 15 мин и фильтровали черезбумажный фильтр «красная лента», декантируя извлечение с ЛРС. Операциюповторяли еще 2 раза в тех же условиях. Фильтрат упаривали на роторном испарителе под вакуумом при температуре 85-90 °C до достижения объема около50 мл. Остаток количественно с помощью 20 мл воды переносили в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 10 мл раствора железа (III) хлорида 1 %, 40 мл кислоты хлористоводородной разведенной 8,3 %,присоединяли обратный холодильник и нагревали на водяной бане при температуре 60 C в течение 1 часа.

Смесь охлаждали, затем количественно переносили с помощью 20 мл воды в делительную воронку вместимостью 250 мл иэкстрагировали эфиром диэтиловым 5 раз порциями по 40 мл, каждый развзбалтывая в течение 2 мин. Эфирные извлечения последовательно фильтровали через бумажный фильтр «белая лента» с 2 г натрия сульфата безводного всухую термостойкую круглодонную колбу. Эфирное извлечение упаривали притемпературе 40 °C досуха, остаток растворяли в 15 мл этанола 95 % и количественно с помощью 5 мл того же спирта переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл.

Объём раствора доводили тем же спиртом до метки и перемешивали (испытуемый раствор).Для подтверждения обоснованности выбора методики качественного анализа листьев Juglans nigra и листьев J. regia цельных, измельченных и порошка113«ангро» оценивали специфичность процедуры при определении нафтохиноновметодом ТСХ.Критерий приемлемости: на хроматограмме должна наблюдаться зона адсорбции с Rf около 0,8 жёлтого цвета (при просматривании в дневном свете),меняющая окраску на фиолетовую при обработке парами аммиака, соответствующая зоне адсорбции СО юглона. На хроматограмме допускается не менееодной и не более трёх зон адсорбции.Для проведения испытаний использовали образцы ЛРС трех серий, из которых подготовлено по две параллельные пробы.Микрошприцем наносили по 0,02 мл испытуемого раствора и раствораСО юглона на линию старта хроматографической пластинки, подсушивали навоздухе, помещали в камеру, предварительно насыщенную парами смеси петролейный эфир – диэтиловый эфир (10 : 3,5) в течение 30 мин, и хроматографировали восходящим способом.

Когда фронт растворителей прошел расстояние10 см, пластинку вынмали из камеры, высушивали на воздухе в течение5 минут. Результаты анализа представлены в таблице 29.Таблица 29 – Оценка специфичности анализа нафтохинонов в листьях Juglansregia и J. nigra методом ТСХИспытуемоеЛРСRf1212120,80,80,80,80,80,8121серия 221серия 32СО юглона0,80,80,80,80,80,80,8серия 1серия 2серия 3серия 1Окраскапри обработке парамив дневном светеаммиакаЛистья Juglans regiaжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяЛистья Juglans nigraжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетоваяжёлтаяфиолетовая114Так как на хроматограммах наблюдается зона адсорбции с Rf 0,8 жёлтогоцвета (при просматривании в дневном свете), меняющая окраску на фиолетовую при обработке парами аммиака, соответствующая зоне адсорбции СО юглона.

Аналитическая методика удовлетворяет критериям приемлемости.Количественное определение содержания суммы нафтохинонов в пересчете на юглон и абсолютно сухое ЛРС в ореха грецкого листьях и ореха чёрного листьях цельных, измельченных и порошка «ангро» проводили фотоколориметрического методом. Для подтвержения обоснованности выбора метода анализа валидационной оценке подвергались величины, полученные экспериментальным и расчетным путем.Проверяли такие параметры, как линейность, специфичность, правильность, повторяемость, межоперационная точность.

Результаты валидации представлены в таблице 30.Таблица 30 – Результаты валидации методики количественного определениясуммы нафтохинонов в пересчёте юглон в листьях Juglans regia и J. nigraПоказателиЛинейностьКритерийприемлемостиУстановленные для листьевJ. regiaJ. nigray = a + bx,|r| ≥ 0,99y = 0,0147 + 0,0045xr = 0,996y = 0,187 + 0,003xr = 0,99695 – 105100,40100,0451,010,6697 – 103100,0399,8930,770,8320,020,0130,020,05Специфичность открываемость, % относительнаясистематическаяошибка, δ %Правильность, RSD (%) открываемость, % относительнаясистематическаяошибка, δ %Повторяемость, RSD(%)Межоперационнаяточность, RSD (%)115Таким образом, разработанные методики количественного определениясодержания суммы нафтохинонов в пересчете на юглон и абсолютно сухое ЛРСфотоколориметрическим методом в листьях Juglans nigra и J.

regia цельных,измельчённых и порошке «ангро» соответствуют критериям приемлемости.4.4 Выводы по главе1. Разработаны методики получения СО шиконина и юглона, установлены показатели и нормы их качества.2. По результатам проведённых исследований разработан и внедрён в фармацевтическую практику лабораторный регламент производства референтноговещества «Шиконин-стандартный образец» (приложение 5).3.

Усовершенствованы и валидированы методики качественного и количественного анализа суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконин в корняхEchium russicum с использованием полученного СО.4. Разработаны и валидированы методики качественного и количественногоанализа суммы нафтохинонов в пересчёте на юглон в листьях Juglans nigra иJ. regia с использованием полученного СО.116ГЛАВА 5 СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГОРАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ СЕМ.

Характеристики

Список файлов диссертации