Диссертация (1139725), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Полученную массу растирали, переносили впатрон из фильтровальной бумаги и экстрагировали гексаном в аппарате Сокслета. Гексановый экстракт сгущали до начала процесса кристаллизации и охлаждали до 0 °C. После охлаждения массу переносили на фильтр Шотта (пор40) и продували воздухом до отсутствия запаха гексана.Методика 2: 0,4 г (2,5 ммоль) 1,5-нафталиндиола поместили в колбу вместимостью 250 мл, снабжённую обратным холодильником, добавили 50 мл ацетона, 5 мл диметилформамида, 2,5 г катализатора S-(2-этил-полистирол)N1,N4-бис(салицилиден)изотиосемикарбазоната кобальта (II), пришитого наполимерный носитель (0,25 ммоль каталитических групп). Через реакционнуюмассу пропускали воздух в течение 7 часов со скоростью 0,5 л/мин., добавляяацетон в реакционную колбу по мере его испарения.
По истечении временипропускания воздуха, содержимое фильтровали освобождая от катализатора,упаривали до начала кристаллизации и охлаждали до 0 °C. После охлаждениямассу переносили на фильтр Шотта (пор 40), отделяли маточник, промываликристаллы юглона порцией охлажденного гексана и продували воздухом до отсутствия запаха гексана.Выход юглона, полученного по обеим методикам, представлен в таблице 22.Таблица 22 – Выход юглонаМетодикаСоотношение1,5-нафталиндиол : катализатор, мольВыход,г/ %Температураплавления, C110 : 10,26/60157-160210 : 10,36/82162-163Как следует из полученных данных, использование второй методики синтеза юглона обеспечивает более высокий выход (82 %).103Методика 2 менее материально затратная, требует минимум манипуляцийпо выделению и очистке конечного продукта.
Кроме того, катализатор, фиксированный на полимерном носителе, может применяться повторно, так как снижение выхода юглона наблюдается после четвертого использования и составляет 67 %, после пятого использования падает ещё на 10 %, дальнейшее его использование не рационально.Полученный юглон имел вид оранжево-коричневых кристаллов. Дополнительную очистку проводили методом сублимации, получая в результатеигольчатые кристаллы оранжевого цвета.Хроматографические и спектральные характеристики полученного юглона совпали с данными СО юглона (Sigma-Aldrich).Физико-химические и органолептические показатели юглона-СО позволили определить требования и нормы его качества, указанные в таблице 23.Таблица 23 – Нормы качества СО юглонаНаименование показателяВнешний видРастворимостьПодлинностьТемпература плавления, °CВода, % не болееХимическая чистота, %не менееНормаКристаллический порошок жёлто-оранжевого цвета, легкосублимируемыйМало растворим в воде, растворим в спирте, диэтиловомэфире, хлороформеЯМР-1Н-спектр юглона – СО в ацетоне должен содержатьтолько те сигналы, что и на рисунке 35УФ-спектр 0,002 % раствора Б юглона – СО в этаноле 95 %в области от 220 до 500 нм должен иметь максимумыпоглощения при (250 ± 2) нм, (410 ± 2) нм155-1560,599,5Внешний вид определяли визуально на белой фильтровальной бумаге.Для подтверждения подлинности использовали ЯМР-1Н-спектроскопию иУФ-спектрофотометрию:1.
ЯМР-1Н-спектроскопияОколо 0,02 г СО юглона растворяли в 0,5 мл дейтерированного ацетона.ЯМР-1Н-спектр (рисунок 35) регистрировали на спектрометре Varian Gemini200 согласно ГФ XIII ОФС.1.2.1.1.0007.15 [18].ОС5489 ЮГЛОН ЗИ ацетон 7-10-15 G-200 Н10413122.852.057.111110987.17.06.92.062.027.27.007.357.57.47.3Chemical Shift (ppm)7.067.057.67.347.711.927.87.317.307.597.597.567.557.787.747.827.342.047.067.05Acetone-d6765Chemical Shift (ppm)43210-1-2Рисунок 35 – ЯМР-спектр синтезированного юглона2.
УФ-спектрофотометрияОколо 0,05 г СО юглона помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл,прибавляли 80 мл этанола 95 %, растворяли при перемешивании и затем доводили объём тем же растворителем до метки, снова перемешивали (раствор А).1 мл раствора А переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводилиобъём этанолом 95 % до метки и перемешивали (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряли в кювете согласно ГФ XIII ОФС.1.2.1.1.003.15 [18].Спектр представлен на рисунке 36.Рисунок 36 – УФ-спектр синтезированного юглона1054.3.2 Разработка методик качественного и количественного анализаюглона в лекарственном растительном сырьеСвободный юглон может обнаруживаться в ЛРС, но часто его присутствие является артефактом, связанным с процессом сушки. Воспроизводимостьрезультатов его анализа в нативных извлечениях из некоторых образцов ЛРСнизкая, что не позволяет использовать подобный подход для целей стандартизации ЛРС.Юглон присутствует в ЛРС как в свободном, так и гликозидированномвиде, в восстановленной или окисленной форме (рисунок 37).OHOHOHCH 2OH OOOHOHO++H2O-2 H-H2O+2 H+OH OHгидроюглонOH OюглонOHгидроюглона b-глюкозидРисунок 37 – Редокс-система гидроюглон – юглонАнализ суммы гликозидов в пересчёте на гидроюглона глюкозид в листьях Juglans regia проводили по модифицированной методике C.
Daglish [152]:около 1,0 г (точная навеска) измельчённого ЛРС, проходящего сквозь сито сразмером отверстий 1 мм, помещали в колбу вместимостью 100 мл с притёртойпробкой, добавляли 50 мл спиртового раствора кислоты хлористоводородной0,27 моль/л и перемешивали в течение 30 мин на магнитной мешалке. Извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажныйфильтр «красная лента», доводили до метки спиртовым раствором кислотыхлористоводородной 0,27 моль/л, перемешивали. 2 мл полученного растворапереносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили до метки тем жераствором, перемешивали и измеряли оптическую плотность на спектрофотометре СФ-2000 при длине волны 341 нм в кювете с толщиной рабочего слоя1061 см относительно раствора кислоты хлористоводородной 0,27 моль/л.
Содержание суммы гликозидов в пересчёте на гидроюглона глюкозид (Х) в процентах проводили по формуле (3):(3)где А – оптическая плотность испытуемого раствора;l – толщина рабочего слоя кюветы, см;а – навеска ЛРС, г;W – влажность ЛРС, %;– удельный показатель поглощения гидроюглона глюкозида, 174,2.Результаты эксперимента, статистически обработанные с использованиемкритерия Стьюдента, представлены в таблице 24.Таблица 24 – Результаты количественного определения суммы гликозидов впересчёте на гидроюглона глюкозид в листьях Juglans regia (влажность ЛРС8,0 %)Хi, %fxs2sРT(P,f)∆xε3,96; 3,78; 3,82;3,75; 3,86; 3,8753,840,00560,075952,570,0782,04Как следует из данных, представленных в таблице, содержание суммыгликозидов в пересчёте на гидроюглона глюкозид и абсолютно сухое ЛРС составило 3,84 ± 0,08 %.Недостатком данной методики является тот факт, что анализируется юглон в восстановленной форме – очень нестабильной, легко окисляемой.
Крометого, используемая аналитическая длина волны не является специфичной длягидроюглона, в этой области многие фенольные соединения также имеют максимум светопоглощения.Учитывая растворимость юглона и гидроюглона глюкозида, нами разработана оригинальная методика, для которой пробоподготовка включала в себя107экстракцию, окисление, гидролиз и фракционирование для получения испытуемых растворов.ЛРС для анализа измельчали до размера частиц, проходящих сквозь ситос размером отверстий 2 мм, тщательно перемешивали для достижения однородности.При получении извлечения с целью снижения возможного мешающеговлияния липофильных веществ в качестве экстрагента ЛРС использовалсяспирт этиловый 20 %. Нафтохиноны, которые в ЛРС представлены восстановленными, конденсированными и гликозидированными производными, подвергались кислотному гидролизу и окислению в присутствии катионов железа (III).Далее агликоны, производные нафтохинонов, селективно извлекались из реакционной среды неполярным экстрагентом и переводились в спиртовой раствор,в котором определялась оптическая плотность.Методика: около 2,0 г (точная навеска) измельченного до размера частиц2 мм ЛРС помещали в коническую колбу, прибавляли 100 мл спирта этилового20 % и перемешивали на магнитной мешалке в течение 1 ч.
Затем фильтроваличерез бумажный фильтр «красная лента», декантируя извлечение с ЛРС. Операцию повторяли еще 2 раза в тех же условиях. Фильтрат упаривали на роторном испарителе под вакуумом при температуре 85-90 °C до достижения объемаостатка около 20 мл. Остаток с помощью 20 мл воды количественно переносили в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 10 млраствора железа (III) хлорида 1 %, 40 мл кислоты хлористоводородной разведенной 8,3 %, присоединяли обратный холодильник и нагревали на водяной бане при температуре 60 C в течение 1 часа. Смесь охлаждали, затем с помощью20 мл воды количественно переносили в делительную воронку вместимостью250 мл и экстрагировали порциями по 40 мл эфира диэтилового в течение 2 минтрижды.
Эфирные извлечения последовательно фильтровали через бумажныйфильтр «белая лента» с 2 г натрия сульфата безводного в сухую колбу. Эфирное извлечение упаривали на роторном испарителе под вакуумом температуре40 °C досуха, остаток растворяли в 15 мл этанола 95 % и переносили с помо-108щью 5 мл того же растворителя количественно в мерную колбу вместимостью25 мл. Объём раствора доводили этанолом 95 % до метки и перемешивали (испытуемый раствор).Раствор СО юглона готовили следующим образом: около 0,01 г (точнаянавеска) юглона помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в15 мл этанола 95 %, затем объем доводили тем же спиртом до метки и перемешивали.
1,0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью10 мл, доводили до метки этанолом 95 % и перемешивали.Так как нафтохиноны являются окрашенными соединениями, способными изменять цвет под воздействием растворов щелочей, то целесообразно обнаруживать эту группу БАВ в ЛРС с помощью качественных реакций и ТСХ сдетекцией парами аммиака.Юглон обнаруживался в извлечении органическим растворителем, придавая ему жёлтый цвет, только после гидролиза.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
