Диссертация (1139725), страница 13

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 13)

Пластинку с нанесенными пробами подсушивали и хроматографировали в камере, предварительно насыщенной парами смеси петролейный эфир – диэтиловый эфир (10 : 3,5) по методике, описанной в главе 2.Хроматограмму сканировали, данные полученных графических файловподвергали обработке программой Sorbfil TLC Videodensitometer, получая в результате площади пиков (S), отношение площади каждого пика к сумме площадей всех пиков в треке (S %), высоты пиков (H), отношение высоты каждогопика к сумме высот всех пиков (%H) в треке (рисунок 30).Рисунок 30 – Денситограмма СО шиконина95Используя значения площади пиков, строили градуировочный график(рисунок 31).Рисунок 31 – Градуировочный график – зависимость площади пика отколичества шиконина, нанесенного на хроматографическую пластинкуАнализируя полученные данные, можно заключить, что в диапазоне0,5-3,5 мкг наблюдается линейная зависимость между площадью пика и количеством шиконина.Для определения содержания нафтохинонов в корнях Echium russicum налинию старта хроматографической пластинки наносили микрошприцем 0,02 млизвлечения, полученного в следующих условиях: около 2,0 г (точная навеска)ЛРС, измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметромотверстий 2 мм, помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 10 мл спирта этилового 95 %, присоединяли обратный холодильник, нагревали на водяной бане при 60 °C в течение 15 минут, затем охлаждали ифильтровали извлечение в мерную колбу вместимостью 25 мл через бумажныйфильтр «красная лента».

Фильтр с частицами ЛРС возвращали в колбу со шлифом, прибавляли 10 мл спирта этилового 95 % и операцию повторяли. Извлечение доводили до метки спиртом этиловым 95 %, перемешивали. Хроматогра-96фирование вели в условиях, использованных для построения градуировочногографика. Хроматограммы сканировали и данные полученных графических файлов подвергали программной обработке Sorbfil TLC Videodensitometer (рисунок 32).Рисунок 32 – Денситограмма нафтохинонов корней Echium russicumКоличественное содержание суммы нафтохинонов в корнях Echium russicum в пересчёте на шиконин и абсолютно сухое ЛРС рассчитывали, используясумму площадей пиков и градуировочный график, по формуле (1):(1)где S – площадь пика;а – навеска ЛРС, г;V – объём пробы, нанесённой на пластинку, мл;W – влажность ЛРС, %.Полученные при этом результаты представлены в таблице 19.97Таблица 19 – Содержание суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконин в корнях Echium russicumХi, %fxs2sРT(P,f)∆xε2,34; 2,18; 2,23;2,21; 2,14; 2,1152,200,0060,08952,570,083,85Как следует из полученных экспериментальных данных, денситометрическое определение шиконина возможно использовать для экспресс-анализа ЛРС.4.2.3 Спектрофотометрическое определение суммы нафтохинонов впересчёте на шиконинРанее нами были подобраны условия получения извлечения из корнейEchium russicum для спектрофотометрического анализа суммы нафтохинонов впересчёте на шиконин в ЛРС [32].Спектр хлороформного извлечения из корней Echium russicum имеет четыре чётких максимума поглощения при 275 ± 2 нм, 493 ± 2 нм, 525 ± 2 нм,568 ± 2 нм, совпадающих с максимумами поглощения СО шиконина, при этомлинейная зависимость величины оптической плотности от концентрации наблюдается в длинноволновой области спектра (рисунок 33).Рисунок 33 – УФ-спектр хлороформного извлечения из корней Echium russicum98Методика: около 0,2 г (точная навеска) ЛРС, измельчённого до частицразмером 1 мм, помещали в коническую колбу, добавляли 10 мл хлороформа,присоединяли обратный холодильник, нагревали на водяной бане при температуре 60 °C 15 мин.

Извлечение фильтровали через бумажный фильтр «краснаялента» в мерную колбу объёмом 25 мл. Фильтр возвращали в колбу с ЛРС иоперацию повторяли дважды. Извлечение в мерной колбе доводили до меткитем же растворителем и перемешивали. 5 мл полученного раствора помещали вмерную колбу вместимостью 25 мл, доводили хлороформом до метки, перемешивали и измеряли оптическую плотность при длине волны 525 нм на спектрофотометре СФ-2000 относительно хлороформа в кювете толщиной 1 см.Концентрацию шиконина определяли с использованием удельного показателяпоглощения. Содержание нафтохинонов в пересчёте на шиконин в абсолютносухом ЛРС в % (Х) вычисляли по формуле (2):,(2)где А – оптическая плотность;– удельный показатель поглощения шиконина;а – навеска ЛРС;W – влажность ЛРС.Результаты эксперимента представлены в таблице 20.Таблица 20 – Содержание суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконин в корнях Echium russicumКорниСинякарусскогоХi, %fxs21,38; 1,41; 1,42;1,41; 1,43; 1,4951,420,0013sР0,0359 95T(P,f)∆xε2,570,0382,64Как следует из данных, представленных в таблице 20, относительнаяошибка предложенной методики не превышает 5 %.994.2.4 Валидация методик анализа шиконинаВалидацию методик подтверждения подлинности и количественного определения нафтохинонов в ЛРС, предназначенных для включения в НД, проводили в соответствии с ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методик»ГФ XIII [18].

Экспериментально оценивали линейность, специфичность, правильность, повторяемость, межоперационную точность, точность.Для проведения испытания брали две параллельные пробы из образцовЛРС трёх серий. Растворы готовили по методике: около 1,0 г (точная навеска)ЛРС, измельчённого до размера частиц 2 мм, помещали в термостойкую колбусо шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 15 мл хлороформа, присоединяли обратный холодильник и нагревали на водяной бане при температуре 60 °C15 минут, затем охлаждали и фильтровали извлечение через бумажный фильтр«красная лента» в мерную колбу вместимостью 50 мл.

Фильтр с частицами ЛРСвозвращали в колбу со шлифом, прибавляли 15 мл хлороформа и операцию повторяли ещё дважды. Извлечение доводили до метки хлороформом, перемешивали (раствор А).0,5 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили хлороформом до метки, перемешивали (испытуемый раствор).Определяли специфичность процедуры анализа подлинности ЛРС синякарусского корни цельные, измельчённые и порошок «ангро» при определениинафтохинонов: качественная реакция с раствором натрия гидроксида 5 %; тонкослойная хроматография (ТСХ); спектрофотометрический метод.Аналитические методики определения подлинности ЛРС «Синяка русского корни цельные, измельчённые и порошок “ангро”» удовлетворяют критериям приемлемости, указанным в протоколе валидации: визуальная оценка качественной реакции – наблюдается обесцвечивание первоначально красного хлороформного слоя и окрашивание в синий цвет водного (нафтохиноны);100 ТСХ – на хроматограмме наблюдается не менее двух зон адсорбции сRf от 0,1 до 0,8 розового, красного или красно-фиолетового цвета (припросматривании в дневном свете), меняющих окраску на синюю приобработке парами аммиака (β-оксоизовалерилшиконин 0,1, шиконин0,2, ацетилшиконин 0,4, изобутирилшиконин 0,6, дезоксишиконин 0,8); спектрофотометрический метод – спектр поглощения испытуемогораствора, полученный на спектрофотометре в диапазоне длин волн от250 до 600 нм, имеет четыре максимума поглощения при 275 ± 2 нм,493 ± 2 нм, 525 ± 2 нм, 568 ± 2 нм.Количественное определение содержания суммы нафтохинонов в пересчете на шиконин и абсолютно сухое ЛРС в синяка русского корнях цельных,измельчённых и порошке «ангро» проводилось спектрофотометрическим методом.

Для подтвержения обоснованности выбора метода анализа валидационнойоценке подвергались величины, полученные экспериментальным и расчетнымпутем.Проверяли такие параметры, как линейность, специфичность, правильность, повторяемость, межоперационная точность. Результаты валидационнойоценки представлены в таблице 21.Таблица 21 – Результаты валидационной оценки методики количественного определения суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконин в корнях синяка русскогоПоказателиКритерий приемлемостиРезультатy = a + bx,|r| ≥ 0,99y = 0,003 + 0,018xr = 0,99695 - 105100,07 относительная систематическая ошибка, δ %51,34Повторяемость, RSD ( %)20,08Межоперационная точность,RSD ( %)30,66ЛинейностьСпецифичность открываемость, %101Таким образом, установлено, что спектрофотометрический метод определения содержания суммы нафтохинонов в пересчете на шиконин и абсолютносухое ЛРС в ЛРС синяка русского корни цельные, измельченные и порошок«ангро» соответствует критериям приемлемости.4.3 Получение и анализ стандартного образца юглона4.3.1 Синтез юглонаИз-за сложности и трудоёмкости выделения юглона (5-гидрокси-1,4нафтохинона) из ЛРС оптимальным способом получения СО является синтез[39, 120], который проводили совместно с Д.

Д. Винюковым на базеООО «Сигмабиосинтез» (Россия, Ставропольский край, г. Георгиевск) по схеме, представленной на рисунке 34.OOHOOCoHNNHN[O],SnOH OOHРисунок 34 – Схема синтеза юглонаЮглон получали окислением 1,5-нафталиндиола [66, 228] кислородомвоздуха c использованием двух катализаторов: S-метил-N1,N4-бис(салицилиден)-изотиосемикарбазоната кобальта (II)(методика 1); S-(2-этил-полистирол)-N1,N4-бис(салицилиден)изотиосемикарбазонатакобальта (II), пришитый на полимерный носитель (методика 2).Методика 1: 0,4 г (2,5 ммоль) 1,5-нафталиндиола поместили в колбу вместимостью 250 мл, снабжённую обратным холодильником, добавили 50 мл ацетона, 5 мл диметилформамида, 2,5 г катализатора S-метил-N1,N4-бис (салицилиден)-изотиосемикарбазонатакобальта(II)(0,25 ммолькаталитическихгрупп).

Через реакционную массу пропускали воздух в течение 7 часов со ско-102ростью 0,5 л/мин., добавляя ацетон в реакционную колбу по мере его испарения. Затем ацетон отгоняли на роторном испарителе, остаток переносили в выпарительную чашку вметимостью 25 мл, используя при этом 2-3 мл ацетона. Костатку добавляли 10,0 г натрия сульфата безводного и растирали при нагревании до высыхания массы в чашке.

Характеристики

Список файлов диссертации