Диссертация (1139719), страница 62
Текст из файла (страница 62)
«Масла жирные растительные»,что затрудняет оценку безопасности применения МЭ по накоплению альдегидов и кетонов [328].Более прогрессивным в вопросах стандартизации, оценки качества и стабильности масел и МЭ, внастоящее время, является подход, основанный на определении содержания БАВ (витаминов Е, А, D, К идр.), обусловливающих фармакологическую активность [164,365].7.2.3. Определение БАВ в изучаемых масляных экстрактахРМ являются важным источником липофильных БАВ (витаминов, стеринов, ПНЖК, эссенциальных ФЛ и др.) в рационе питания человека.
[157, 164,245,376]. Многие РМ давно используются для лечения различных заболеваний в качестве ценных индивидуальных ЛП или всоставе комбинированных лекарственных средств. Однако, большинство РМ и МЭ еще применяются в странах Северной Америки и Евросоюза как БАД к пище.
Известно, что химическийсостав БАВ (качественный и количественный) в РМ, как и в ЛРС, подвержен существеннымизменениям и зависит от таких факторов, как климатические условия, место произрастания иусловия культивирования. Кроме того, на содержание БАВ в МЭ влияют также: период заготовки исходного ЛРС; способ сбора и консервации ЛРС; технология изготовления РМ и МЭ исоблюдение всех условий хранения на этапах доведения готового продукта до конечного потребителя, обеспечивающих эффективность и безопасность их применения.327Согласно требованиям ОФС ГФ XIII изд. «Экстракты», в МЭ в т.ч.
качественное и количественное содержание БАВ не нормируется. В то же время, данный показатель должен являться определяющим для обоснования целесообразности разработки и выведения на фармацевтический рынок нового МЭ на основе какого-либо ЛРС, что позволит регулировать численность иобеспечит население эффективными и безопасными ЛРП.7.2.3.1. Экспресс-анализ БАВ в оценке качества масляных экстрактовДополнение НД на жирные РМ и МЭ простыми, доступными и достаточно точными методами контроля содержания БАВ, например, качественный экспресс-анализ, приобретает, внастоящее время, особую актуальность [365].Определение витамина Е (для светлых МЭ): к 0,5 мл МЭ приливают 0,5 мл конц.
азотной кислоты. Через 1 мин. на границе раздела фаз масло – кислота появляется широкое кольцокоричнево-красного цвета. При взбалтывании раствор окрашивается в оранжево-красный цвет.Для темноокрашенного облепихового масла идентификацию токоферолов можно проводитьметодом ТСХ по значению величины Rf, как описано в п.
7.2.3.3 данной главы.Определение витаминов группы К (в присутствии витаминов группы А и Е). К 1-2 млМЭ добавляли несколько кристалликов резорцина и 3-4 капли конц. серной кислоты. Появляется темное красно-коричневое окрашивание (для светлых МЭ) или темно-синее (для темноокрашенных МЭ).Определение каротиноидов. Методика 1: к 0,5 мл МЭ прибавляли 1-2 капли конц. сернойкислоты и наблюдали появление темно-синего окрашивания. Методика 2: к 0,5 мл МЭ прибавляли 1,0 мл конц. азотной кислоты.
Через 1 мин. при перемешивании появляется темно-зеленоеокрашивание, переходящее при стоянии в течение 10 мин. в темно-вишневое.Для качественного экспресс-анализа МЭ целесообразно использовать способность маселк флуоресценции в УФ-свете, обусловленной наличием хлорофиллов, витаминов групп А, К, Еи D [365]. При оценке качества пищевых масел данный метод зарекомендовал себя в качествеспособа установления первых стадий окислительной порчи и фальсификации продукции. Втаблице 216 приведены данные по цвету флюоресценции изучаемых МЭ под действием УФсвета при λ=365 нм.Таблица 216№ п/п12Флуоресценция изучаемых МЭ [365]МЭЦвет флуоресценцииОблепиховое маслоЗеленовато-желтаяМЭ листьев крапивыГрязно-розовая328Таким образом, предварительный качественный экспресс-анализ МЭ на присутствие вних различных групп БАВ возможно и целесообразно проводить по оценке флюоресценции.Однако, несомненно, окончательные выводы о качестве МЭ можно делать только после всестороннего исследования органолептических, физико-химических, спектральных характеристик, атакже количественного содержания БАВ [365].7.2.3.2.
Определение каротиноидов в масляных экстрактахОпределение содержания суммы каротиноидов в исследуемых объектах в пересчете на βкаротин осуществляли с помощью спектрофотометрии в видимой области [32,349,351,354].Пробоподготовка МЭ проведена как описано в п. 2.12.5 (глава 2). Полученные данные и статистическая обработка результатов определения представлены в таблице 217.№п/п12Таблица 217Содержание β-каротина в МЭ [180,365]Содержание β-каротина, мг%; (Р=95%, n= 4)МЭSS2ε,%Облепиховое масло213,720,396 0,157 3,57213,72±3,571,67МЭ листьев крапивы5,990,190 0,037 0,305,99±0,305,0Облепиховое масло имеет спектр поглощения в диапазоне длин волн 400-500 нм с мак-симальным значением оптической плотности в этаноле при 450 нм (рис.
182), что характернодля β-каротина [32,180,352,354].В облепиховом масле содержание суммы каротиноидов на порядок выше по сравнению стаковым в МЭ листьев крапивы двудомной (таблица 217), что согласуется с результатами определения данных БАВ в ЛРС (глава 5, п. 5.7.2 и глава 6, п. 6.1).Оптическая плотность0,45Бета-каротин0,4Облепиховоемасло0,350,30,250,20,150,1350400450500550Длина волны, нмРис.
182. Спектры поглощения облепихового масла и β-каротина в этанолеСодержание β-каротина в МЭ прямо пропорционально его количеству в исходном сырье.Кроме того, содержание суммы каротиноидов в МЭ зависит от места районирования и сорта329растения, времени сбора, условий хранения и способа консервации сырья [129]. Из литературных источников известно, что МЭ и плоды облепихи характеризуется чрезвычайно разнообразным составом каротиноидов (каротины, фитоксантины и лютеины) [376]. Данные по количественному содержанию суммы каротиноидов в МЭ листьев крапивы двудомной свидетельствуют о преобладании в исходном ЛРС ксантофилловой группы, мало извлекаемой жирнымимаслами, что согласуется с результатами определения указанных БАВ в сырье (Глава 6, п. 6.1.1и 6.1.2).Разработанная ранее методика идентификации β-каротина (глава 3, п. 3.1.1) была апробирована на изучаемом МЭ плодов облепихи, так как содержание суммы каротиноидов в нем,по данным количественного определения, почти на два порядка больше.
Для проведения ТСХанализа, выбран раствор МЭ в хлороформе марки х.ч. в соотношении масло – растворитель(1:2). В описанных в работах [362,370] условиях осуществляли хроматографирование проб объемом 5 мкл. Полученная хроматограмма представлена на рис. 183. Кроме зоны β-каротина,идентифицированной по величине Rf (табл. 218), обнаружены хроматографические зоны другиекаротиноидов (имели желто-оранжевое окрашивание, постепенно исчезающее под действиемсвета). Результаты представлены в таблице 218.12Рис.
183. Вид хроматограммы: точка 1 – 5 мкл раствора облепихового масла в хлороформе(1:2); точка 2 – 10 мкл 0,1% спиртового раствора стандартного образца β-каротинаВ использованной элюирующей системе наблюдается приемлемое разделение зон каротиноидов на хроматограммах, так как значение селективности сорбции больше единицы (таблица 218).330Таблица 218Идентификация β-каротина и параметры хроматографического разделениякаротиноидов в облепиховом масле [362,370]№ пятнаВеличина RfKОблепиховое масло (точка 1)1 - β-каротин0,37±0,011,70320,58±0,010,724L = К1/К22,351,8630,72±0,010,3940,87±0,0010,152,6Предложенная методика определения и разделения каротиноидов методом ТСХ имеетпреимущества по сравнению с рекомендованной в существующей НД с применением спектрофотометрии в видимой области.
Последняя позволяет установить только суммарное содержание каротиноидов в маслах и МЭ. Применяя разработанную методику, можно определить качественный состав БАВ этого класса.7.2.3.3. Определение токоферолов в масляных экстрактахВыделение токоферолов из МЭ проводили по ранее разработанной методике [235], описанной в Главе2 (п. 2.12.6). Затем вытяжки объемом 10 мкл наносили на силикагелевую пластинку марки «Sorbsill» размером10×10 см ПТСХ-П-А и хроматографировали в выбранном элюенте (Глава 3, п.
3.1.4). Далее пластинку подсушивали и обрабатывали предложенным проявителем. Количественное определение токоферолов проводили,как описано в Главе 3 (п. 3.1.4). По калибровочному графику (рис. 15, глава 3) рассчитывали содержание витамина Е в исследуемых объектах.Так как, в условиях промышленного производства МЭ в качестве экстрагентов чаще всего используются подсолнечное, соевое или оливковое масла, которые сами содержат нативные токоферолы [376], существует необходимость оценки содержания токоферолов в ЛРС, на основе которого их получают. Для этого были проанализированы спиртовые экстракты изучаемых видов ЛРС (Глава 2, п.
2.12.6) методом ТСХ. 10 мклизвлечений хроматографировали в условиях, описанных выше, а полученные результаты оценивали при помощи компьютерной программы «Sorbfil Videodensitometer» [237, 238,365]. Результаты представлены в таблице 219.Экспериментально установлено, что содержание витамина Е в изучаемых МЭ представляет собой сумму токоферолов масла-экстрагента и ЛРС [365].Для оценки достоверности результатов, полученных по разработанной методике, проводили определение витамина Е в исследуемых маслах с применением аттестованной методики331ГОСТ 30417 [68], в соответствии с которой дополнительно установили содержание витамина А(таблица 219).Таблица 219№п/п12Результаты определения витаминов А и Е в МЭ по ГОСТ [68,326]Содержание витамина ЕСодержание БАВ в МЭ по(разработанная методика),ГОСТ 30417мг/кгЛРСВитамин Е,Витамин А,ЛРСМЭмг/кгМЕ/гЛистья крапивы447,5менее 3Менее 300,0Плоды облепихи714,5менее 3560860,0Найденное содержание витамина А соответствует его порогу определения данным мето-дом, что подтверждает данные научной литературы о присутствии в МЭ витамина А в провитаминной форме – β-каротина [376].
Данные таблицы 219 также свидетельствуют о сопоставимости полученных результатов, а значит правомерности использования разработанной методики.Содержание витамина Е в облепиховом масле в несколько раз больше, чем в МЭ листьвкрапивы двудомной (таблица 219). Полученные результаты согласуются с данными определениямассовой доли неомыляемых веществ в исследуемых образцах, определение которой проводили,как описано в п. 2.12.5 (Глава 2).
Результаты представлены в таблице 220.Токоферолы, как и другие БАВ входят во фракцию неомыляемых веществ в жирных маслах.Данные таблицы 220 также свидетельствуют, что содержание БАВ, в т.ч. и витамина Е, в облепиховом масле в 2-3 раза превышает таковое в МЭ листьев крапивы двудомной.Таблица 220Результаты определения массовой доли неомыляемых веществ в исследуемыхобразцах [326]№п/пМЭМассовая доля неомыляемых веществ, %12МЭ листьев крапивы двудомнойОблепиховое масло0,762,50В состав липофильной фракции МЭ входят также ФЛ.
Массовую долю фосфорорганических соединений в пересчете на Р2О5 в исследуемых образцах определяли в соответствии сГОСТ Р 52676 (Глава 2, п. 2.12.5). Следует отметить, что ФЛ обнаружены не были, что согласуется с литературными данными об их отсутствии в рафинированных РМ, используемых в процессе производства.Для выявления преимуществ разработанной методики количественного анализа токоферолов в МЭ, она была сравнена со стандартной методикой определения массовой доли витами-332на Е, рекомендованной ГОСТ 30417-98 [68], а также иными способами, предложенными в литературе [174,230,290].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
