Диссертация (1139719), страница 63
Текст из файла (страница 63)
Основные характеристики методик представлены в таблице 222.Данные таблицы 222 позволяют сделать вывод о том, что разработанная ТСХ-методикаимеет существенные преимущества по сравнению с методикой ГОСТ [68]. Во-первых, выделение из МЭ токоферолов проводится экстракцией методом реперколяции, что способствует достижению максимального выхода, а также минимизирует потери витамина Е в случае проведения щелочного омыления в соответствии с методикой ГОСТ [68]. Во-вторых, предложенная методика может быть реализована при минимальном наборе простых и доступных материалов иреактивов, что делает ее приемлемой для любой лаборатории.
В дополнении, предлагаемыйспособ определения токоферолов характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью. ТСХ-методика более экспрессна, так как позволяет сократить время анализа примерно впять раз.Анализ витамина Е методом ГХ требует получения летучих производных, что крайне затруднительно при анализе ЖРВ. Следует отметить, что рефрактометрический способ не уступает по точности современным хроматографическим методам и позволяет сократить затратывремени в 25 – 60 раз.Однако, ограничением данного метода является минимально определяемый уровень содержания витамина Е в масле приблизительно 15 – 20 % [230].Использование больших количеств ртути, невысокая чувствительность и сложность автоматизации анализа ограничивает применение полярографического метода в аналитическойпрактике для количественного определения витамина Е [174,290].Таким образом, разработанная методика ТСХ с количественной оценкой содержания токоферолов в МЭ с помощью компьютерного сканирования, может быть рекомендована для серийного анализа МЭ не только фармацевтического назначения, но и применяемых в пищевой икосметологической промышленностях.
Она удовлетворяет основным метрологическим характеристикам, а также является экспрессной и доступной.333Таблица 222Сравнительные характеристики методов определения витамина Е в РМ и МЭТСХ [235,236]ГОСТ [68]12СФМ3ВЭЖХГХ[152,158,174,290]45Предподготовка пробыДВА*6РФМ*[230]7ПГФ*[174,290]8Получение неомыляеЭкстракция токомых веществ из масла сЭкстракция с исферолов из образПолучение неомыляемых веществ изПолучение неомыляемыхпоследующим выделепользованием аппаца методом репермаславеществ из масланием витамина Е с пората Сокслеттаколяциимощью ТСХВремя анализа, ч1 – 1,54,5 – 54-51-21-20,5 -15 -7 мин4-5Вспомогательные реактивыЭтанол,хлороформ, конц.азотная кислотаГидроксид калия, этанол, натрия сульфат,кальция хлорид, диэтиловый эфир, хлороформ, кислота аскорбиновая, калия перманганат, фенолфталеин, офенантролин, хлориджелеза (III), гексан7,110Не требуется24 – 36 ч+-Этанол, калия гидКалия гидроксид, этанол,роксид, кислотаГазнатрий сульфат, кальцияаскорбиновая,носитель –хлорид, диэтиловыйдиэтиловый эфир,гелий илиХлороформ, ацетоэфир, хлороформ, кислонатрия сульфат, Гексан, азот осоСоевоенитрил, натрия перта аскорбиновая, калияпалладиевый ката- диэтило- бой чистомаслохлоратперманганат, фенолфтализатор, силика- вый эфир ты, цетиллеин, ацетатный буфер,гель, опальмитат,комплексная соль аммофенантролин,гексаннийнитрата церияхлорид железа (III)Относительная ошибка, %Подготовка реактивов для анализаСпецифичность++60,5 – 1,0------+33412345678Предел обнаружения-6-315 – 20 %10-4 – 10-5 моль/л3·10 г10 г10-8 г10-8 г1,1·10-5 гАппаратура, материалыХроматографГЖХ хроВЭЖХ,матограф,микмикФотоэлектроколорирошприц,Планшетный скарошприц,метр, пластинки дляводянаянер, программаводянаяТСХ, микрошприц,Водяная баня сбаня с«Sorbfil Videodenбаня схроматографическаяобратным холо- обратРефрак Водяная баня с обратsitometer», плаобратнымкамера, делительная дильником, дели- ным хофракным холодильником,стинки для ТСХ,хоВольтамперометворонка, сушильныйтельная воронка, лодильтометрделительная воронка,микрошприц,лодильни- рический анализашкаф, пульверизатор, колба для отгона ником,ИРФколба для отгона в токехроматографичеком, дели- тор, три электродаводяная баня с обратв токе азота илидели454Б2азота или под вакууская камера, делительнаяным холодильником,под вакуумом, тельнаяМмом, полярографтельная воронка,воронка,персональный компью- спектрофотометр воронка,холодильник, суколба длятер, установка для ваколбашильный шкафотгона вкуумной сушкидля отготоке азотана в токеили подазота иливакуумомпод вакуумомДиапазон линейности0,011 –0,015 – 0,220 – 500,03 – 5,0 %0,03 – 0,255 г/кг 0,045г/кг%г/кгДВА* - дифференциальная вольтамперометрия; РФМ* - рефрактометрия; ПГФ* - полярография.3357.2.3.4.
Определение флавоноидов в экстракционных маслах методом дифференциальнойспектрофотометрииВ литературе приводятся результаты исследований, подтверждающих ярко выраженную зависимость биологического действия экстракционных масел от количественного содержания в них флавоноидов [192]. Недостатками известных способов количественного определения флавоноидов в ЛПрастительного происхождения (титриметрические и спектральные) являются: неточность, таккак масляные растворы плохо титруются; каротиноиды, содержащиеся в этих препаратах (до180 мг%), имеют совпадающие максимумы поглощения в видимой области при 360-490 нм,мешая определению оптическими методами; громоздкость и длительность определений, связанная с затратой времени на приготовление титрованных растворов, реагентов; нестабильностьокрашенных продуктов реакций; недостаточная чувствительность и селективность [192].На рис.
184 показана зависимость оптической плотности спиртовых растворов стандартных образцов рутина (4 мкг/мл) и β-каротина (10 мкг/мл) от длины волны. Вид спектра β-каротина подтверждает интенсивное поглощение в области 360 - 490 нм. Таким образом, проводить количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин в МЭ без предварительного разделения компонентовметодом прямой спектрофотометрии не представляется возможным.оптическая плотность10,820,610,40,20230280330380430480530580длина волны, нмРис.
184. Спектры поглощения спиртовых растворов стандартных образцов (1 – 0,0004 % раствор рутина;2 – 0,001 % раствор β-каротина) [181]В научной литературе описан способ, позволяющий проводить определение флавоноидов в экстракционных маслах в присутствии каротиноидов, основанный на применении метода дифференциальной спектрофотометрии [192], который был использован для исследуемых МЭ (Глава 2, п.2.12.5).336Для количественного определения содержания суммы флаваноидов в пересчете на рутин, проводили спектрофотометрирование 0,2% спиртовых растворов МЭ при длине волны 362,5±2нм.
В качестве раствора сравнения использовали спиртовый раствор стандартного образца βкаротина после предварительного разведения подсолнечным маслом до концентрации, равнойсодержанию каротиноидов в анализируемом объекте, определяемому фотоэлектроколориметрически по общепринятой методике [352,354]. Параллельно проводили измерение спиртовогораствора стандартного образца рутина с содержанием 4 мкг/мл относительно растворителя.
Результаты определения в исследуемом МЭ листьев крапивы двудомной показали отсутствие флавоноидов,в облепиховом масле содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин составило 144,43±5,10 мг%[181].7.2.3.5. Исследование жирнокислотного состава масляных экстрактовРМ в последние годы активно используются в качестве источников ω-6 и ω-3 ПНЖК.Обогощение пищевого рациона ПНЖК снижает риск развития сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний, стимулирует функции иммунной системы, понижает уровень холестерина, повышает устойчивость организма к инфекционным и вирусным заболеваниям и т.д.Соотношение ПНЖК ω-6 к ω-3 в рационе питания здорового человека должно быть 10:1,а при нарушении липидного обмена - от 3:1 до 6:1. Однако, изучение фактического набора пищевых продуктов показало, что у значительной части населения это соотношение составляет от10:1 до 30:1, что свидетельствует о дефиците ПНЖК семейства ω-3 [260-262].
ПНЖК семействаω-3 официально признаны минорными компонентами пищи и установлена их физиологическаяпотребность, составляющая для взрослых 0,8-1,6 г/сут.В качестве критериев оценки подлинности и доброкачественности НД на облепиховоемасло содержит требования к составу ЖК [352,354]. МЭ фармацевтического назначения внастоящее время по составу ЖК не нормируются. Упорядоченная структ ура липопрот еидов эпидермиса требует присутствия строго определенных липидов в определенном соотношении. Экзогенные липиды могут вносить беспорядок в организацию липидных пластов,временно нарушая барьерные свойства и функции кожи. Биологическое действие маселпри нанесении на кожу во многом определяется тем, какие ЖК входят в состав данных жиров.Поэтому актуальным является исследование ЖК-состава не только официнальных РМ длявнутреннего и инъекционного применения, но и МЭ фармацевтического назначения, многие изкоторых применяются в качестве БАД только наружно [336].Исследование состава ЖК липидов исследуемых объектов проводили методом ГЖХ поГОСТ 31663 и 31665 как описано в Главе 2, п.2.12.5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
