Диссертация (1139719), страница 49
Текст из файла (страница 49)
Затем колбы с содержимым быстро охлаждали до комнатной температуры. Извлечения фильтровали через бумажные фильтры в мерные колбы объемом 200 мл. Фильтры с частицами сырья помещали обратно в конические колбы, где проводили экстракцию. Извлечениепроводили дважды. Вторые порции экстрактов фильтровали через те же бумажные фильтры, вте же мерные колбы объемом 200 мл, отжимая остатки сырья. При необходимости доводилирастворы водой до метки.Для сравнительного исследования влияния способа экстракции на выход АЦ, извлеченияготовили следующим образом: по 1,0 г измельченного ЛРС (т.н.), помешали в конические колбы объемом 200 мл, добавляли по 100 мл 80% этилового спирта, подкисленного HCl до концентрации 1%.
В одном случае, колбу нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин (экстракт 1). В другом, колбу помещали в ультразвуковую баню на 30мин при температуре 80±5 °С (экстракт 2). Затем колбы с содержимым быстро охлаждали докомнатной температуры, извлечение фильтровали через бумажный фильтр, смоченный тем жеподкисленным спиртом, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.Количественное определение исследуемых групп БАВ в экстрактах проводили по методикам, описанным ранее в данной главе (п.
5.3.1 и 5.5). Содержание суммы свободных АК всвежих плодах (в пересчете на абсолютно сухое сырье) в пересчете на кислоту глутаминовуюсоставило 6,701% (экстракт 1) и 5,612% (экстракт 2).251Результаты количественного определения суммы АЦ в пересчете на цианидин-3-Оглюкозид в исследуемом ЛРС (в пересчете на абсолютно сухое сырье) показали, что содержание составило 1,649% (экстракт 1). Исследование спектральных характеристик экстракта 2 показало отсутствие максимума, характерного для АЦ в диапазоне λ = 510-600 нм. Следовательно,температурный режим ультразвуковой бани не способствует переходу предшественников АЦ всобственно АЦ.Ряд исследований, представленных в литературе, также указывал на возможность повышения эффективности процесса экстракции при сочетании ультразвукового и термическоговоздействия.
Для изучения этого эффекта на выход АЦ из плодов облепихи, экстракцию проводили на водяной бане, как описано выше, с последующим озвучиванием в течение 30 минут.Температурный режим был установлен исходя из задачи максимального выхода БАВ из ЛРС.Содержание суммы АЦ в свежих плодах облепихи крушиновидной при этом составило 1,475%.Несмотря на имеющиеся в литературе сведения о росте выхода БАВ в извлечение при озвучивании, полученные результаты не показали значительного эффекта увеличения содержаниясуммы свободных АК и АЦ при интенсификации процесса экстракции по средствам ультразвука [27].Таким образом, серия проведенных исследований не подтвердила целесообразностьприменения ультразвукового воздействия в технологии экстракции свободных АК и АЦ изсвежих плодов [27].5.5. Исследование липофильных групп БАВ плодов5.5.1.
Определение каротиноидов в плодах облепихи крушиновиднойДанные о каротиноидном составе плодов и масла облепихи в литературе носят противоречивый характер, хотя их стандартизация проводится по содержанию этих важнейших компонентов. По данным ряда работ, облепиха крушиновидная является одним из важнейших источников не только каротинов (α-, β-каротины, ликопин), но и ксантофиллов (зеаксантин, лютеолин) в отличие от β-каротина, не обладающих провитаминной (А) активностью, но необходимых для предупреждения возрастной дегенерации макулы.
Кроме того, β-каротин, как и иныекаротиноиды, имеет существенный недостаток – его молекула нестабильна и подвергается разложению под действием многих факторов, в первую очередь кислорода воздуха, с которым постоянно контактирует сырье при его технологической обработке, а также облучения УФ-света.Каротиноиды, как представители липофильной группы БАВ, максимально экстрагируются из плодов при изготовлении МЭ и определяют его эффективность. Следовательно, стандартизацию подобного ЛРС и МЭ следует проводить в том числе по данной группе БАВ. По-252этому исследования по разработке методик сквозной стандартизации растительных объектов, атакже полученных на их основе МЭ фармацевтического назначения по содержанию каротиноидов, являются особенно актуальными.5.5.1.1.
Исследование каротиноидного состава плодов и масла облепихиС целью идентификации в плодах и масле основного каротиноида - β-каротина, был проведен ТСХ-анализ: растворов масла в хлороформе в соотношении масло – растворитель (1:2);свежевыжатого сока плодов облепихи крушиновидной; хлороформенных вытяжек из свежихизмельченных плодов, полученных методом простой экстракции в соотношении сырье – экстрагент (1:3).
На хроматографическую пластинку (рис. 125) наносили 5 - 10 мкл хлороформенной вытяжки(точка 2, рис. 125), 3 - 5 мкл раствора масла в хлороформе в соотношении масло – растворитель(1:2) (точка 1, рис. 125), 10 мкл стандартного спиртового раствора β-каротина с содержанием 1мг/мл (точка 4, рис. 125), 20 - 30 мкл сока свежих плодов (точка 3, рис. 125) и хроматографировали всистеме растворителей гексан:н-пропанол:вода (10:1:0,2) [321] восходящим способом.
Вид полученной хроматограммы представлен на рис. 125.Рис. 125. Вид хроматограммы исследуемых объектов в системе растворителей гексан:н-пропанол:вода(10:1:0,2)Как видно из рис. 125, состав каротиноидов плодов и масла одинаков, что подтверждаетотсутствие данной группы БАВ в рафинированном подсолнечном масле, используемом в качестве экстрагента при производстве МЭ. На хроматограммах обнаруживалось семь зон с характерной желто-оранжевой окраской в видимом свете. Были идентифицированы зоны β-каротина позначению величины Rf = 0,98 в сравнении с достоверным стандартным образцом (таблица 165).Для надежной идентификации каротиноидов необходимо проводить сравнение величинR f со стандартными образцами, что не всегда возможно ввиду высокой стоимости последних илабильности веществ группы каротиноидов под действием факторов внешней среды.
Болееточной оценкой хроматографической подвижности, мало чувствительной к влиянию случайных253отклонений в условиях проведения эксперимента, является величина Rs, представляющая собойотношение величины R f одного вещества к величине Rf другого вещества, принятого за стандарт [91]. В таблице 165 представлены значения величин Rs для каротиноидов, выявленных нахроматограммах плодов и масла облепихи.Таблица 165Идентификация β-каротина и параметры хроматографического разделениякаротиноидов в плодах и масле облепихи крушиновидной [321]№ зоныВеличина RfВеличина RsKL = К1/К210,071±0,020,07213,0819,3820,129±0,010,1326,7530,176±0,010,1804,681,441,4440,235±0,010,2403,26567 - β-каротин0,553±0,020,600±0,020,980±0,020,5640,6121,000,810,670,024,021,2133,50В качестве стандарта был принят β-каротин (точка 4, рис.
125). В использованной элюирующей системе наблюдается удовлетворительное разделение хроматографических зон каротиноидов, так как значение селективности сорбции больше единицы (таблица 165).Разработанная методика может быть включена в НД в качестве способа экспрессанализа состава каротиноидов и идентификации β-каротина в масле и плодах облепихи крушиновидной.
Предложенная методика может найти применение для серийных анализов облепихового масла на предмет фальсификации и каротиноидного состава.5.5.1.2. Количественное определение суммы каротиноидов в плодах облепихи методомспектрофотометрии в видимой областиСвежие и высушенные плоды облепихи крушиновидной традиционно стандартизируютсяпо содержанию суммы каротиноидов в пересчете на β-каротин [15]. Суммарное содержание каротиноидов принято определять с помощью спектрофотометрии в видимой области[222,349,351,354], так как данные соединения имеют максимумы поглощения на спектрах при422-428, 444-450, 472-484 нм.
Согласно различной НД расчет содержания данных БАВ в плодахосуществляется по-разному. Используется, как способ расчета по значению Е1%1см стандартногообразца β-каротина, так и способ, основанный на сравнении светопоглощения испытуемого извлечения с абсорбцией раствора K2Cr2O7 определенной концентрации. Кроме того, методика254извлечения каротиноидов из плодов отличается разнообразием: от используемого экстрагентадо температурного режима и других технологических параметров и приемов экстракции [337].В виду отсутствия в отечественных ГФ ФС на данный вид ЛРС, очевидно возникает необходимость разработки проектов ФС, в том числе на плоды высушенные и замороженные [338].Спектры поглощения извлечений, полученных с применением 95% этанола, в диапазоне400 – 500 нм как из высушенных, так и свежих плодов, имеют максимум оптической плотностипри 448±2 нм (рис.
126).На степень извлечения любой группы БАВ существенным образом оказывает влияниеприрода экстрагента. При варьировании полярностью растворителя установлено, что с увеличением значения данного показателя до 5,5 единиц (рис. 127) происходит повышение выходакаротиноидов в извлечение [222,337]. Применение как менее полярных, так и более полярныхэкстрагентов нецелесообразно, ввиду снижения содержания данных БАВ в извлечении (рис.127), что свидетельствует о преиммущественном присутствии в плодах каротиноидов ксантофилловой группы.Анализ литературы показывает, что для выделения суммы каротиноидов из плодов облепихи чаще всего используются водно-спиртовые смеси в различных соотношениях и хлороформ.
Данные по зависимости степени извлечения каротиноидов (в пересчёте на β-каротин) изплодов облепихи от используемого экстрагента приведены в таблице 166. Лучшим экстрагентом, как показывают результаты эксперимента, для выделения данных БАВ из анализируемыхплодов является 95% этанол.Таблица 166Влияние экстрагента на извлечение каротиноидов из плодов облепихи [337]№ЭкстрагентНайдено каротиноидов, мг%п/пСвежие плодыВысушенные плоды12345ГексанХлороформ95% этанол70% этанол40% этанол18,2274±0,716315,8852±0,595751,1893±1,919618,6579±0,69978,7809±0,329335,5935±1,438029,3023±1,183755,5479±2,261217,3056±0,698915,9742 ±0,59906Вода4,2843±0,160715,0815±0,6092В ходе эксперимента установлено, что для выделения суммы каротиноидов из ЛPC, оптимальным соотношением является 1:50 для высушенных и 1:100 для свежих плодов (таблица167), а наилучшее время экстракции, при котором будет наблюдаться максимальный выходданных БАВ, составляет 60 и 90 минут соответственно (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
