Диссертация (1139719), страница 48
Текст из файла (страница 48)
Аналитическую пробу высушенного сырья измельчают(свежие плоды разминают стеклянной палочкой) до размера частиц менее 0,5 мм. Около 1,5 г(т.н.) измельченного высушенного ЛРС или около 10,0 г (т.н.) измельченного свежего ЛРС экстрагируют в конической колбе объемом 100 мл с 40 мл воды и 4 мл кислоты соляной концентрированной при нагревании на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45мин. Затем колбу быстро охлаждают под струей холодной воды и процеживают через 5 слоевмарли в мерную колбу вместимостью 100 мл. Остатки сырья в колбе промывают 10 мл воды.Марлю с остатками сырья помещают в ту же колбу с сырьем и экстракцию повторяют еще одинраз указанным выше способом.
Полученное извлечение процеживают через 5 слоев марли в туже мерную колбу, марлю промывают, доводят объем извлечения водой до метки и перемешивают (раствор А). В коническую колбу объемом 50 мл помещают 10,0 мл раствора А, прибавляют по каплям натрия гидроксида раствор 40 % до получения раствора с рН 4,0 – 4,5. Растворколичественно переносят в мерную колбу объемом 50 мл, доводят объем раствора водой дометки и перемешивают.
Затем фильтруют через бумажный фильтр (раствор Б), отбрасывая первые 10 – 15 мл фильтрата. В мерную колбу объемом 100 мл помещают 2,5 мл пикриновой кислоты раствора 1 % и 7,5 мл натрия карбоната раствора 20 %, перемешивают. В эту же мернуюколбу помещают 5,0 мл раствора Б и колбу с содержимым нагревают на кипящей водяной банев течение 10 мин.
Затем мерную колбу охлаждают до комнатной температуры, доводят объемраствора водой до метки и перемешивают (раствор В). В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2,5 мл пикриновой кислоты раствора 1 %, 7,5 мл натрия карбонатараствора 20 % и 5 мл воды, помещенных в мерную колбу объемом 100 мл. Мерную колбу с содержимым нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин, после чего охлаждают докомнатной температуры, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Оптическуюплотность раствора В измеряют относительно раствора сравнения на спектрофотометре в максимуме поглощения в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно измеряли оптическую плотность стандартного образца глюкозы, обработанного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы полисахаридов и свободных сахаров в пересчете на глюкозу в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле 25:(25)где Ах – оптическая плотность раствора В; Аст – оптическая плотность раствора стандартногообразца глюкозы, обработанного аналогично испытуемому раствору; a – навеска сырья, г; а0навеска глюкозы, г; W – влажность сырья, %.246Приготовление антронового и орцинового реактивов, раствора пикриновой кислоты, а такжедругих вспомогательных реактивов осуществляли по ОФС ГФ XIII изд. «Определение сахаровспектрофотометрическими методами» и ФС «Мать-и-мачехи листья» [93].Таблица 161Результаты определения содержания суммы полисахаридов и свободных восстанавливающихмоносахаридов в плодах облепихи крушиновидной с применением различных расчетных способов№Способ расчетаСумма полисахаридов и свободныхп/пвосстанавливающих моносахаридов,%1С использованием величины удельного21,5967±3,1013показателя поглощения комплекса глюкозы с пикриновой кислотой2С использованием оптической плотности29,6289±4,2547продуктов реакции стандартного образцаглюкозы с пикриновой кислотойМетрологическая оценка результатов количественного определения приведена в таблице162.Таблица 162Метрологическая оценка метода анализа (P = 95 %; n = 5)xсрS2SSxcp∆x∆xcpεср, %20,900626,066202 2,463 1,09955 6,847 3,0567 14,62Валидационную оценку методики осуществляли по параметрам: специфичность, линейность, предел обнаружения (ПО), повторяемость и внутрилабораторная воспроизводимость.В данном случае методика специфична, так как ни растворитель, ни реактивы, ни компоненты плацебо не искажают результат (рис.
121).Экстрагент с пикриновойкислотой в щелочнойсредеИзвлечение спикриновой кислотой вщелочной средеоптическая плотность10,80,60,40,20200250300350400 450 500 550длина волны, нм600650700Рис. 121. Определение специфичности СФ-методики количественного определения суммы полисахиров и простых сахаров в пересчете на глюкозу в плодах облепихи крушиновиднойЛинейность определяли на восьми уровнях концентраций. Растворы готовили путемувеличения аликвоты по следующей схеме: аликвота раствора Б от 1,0 до 8,0 мл – объем раствора В 100,0 мл (20,0 – 160,0%). График зависимости оптической плотности раствора В от247концентрации в нем простых сахаров и уравнение регрессии представлены на рис.
122. Другиехарактеристики линейности (наклон прямой, отрезок на оси ординат) приведены в таблице 163.Внутрилабораторную воспроизводимость и повторяемость методики определяли в соответствии с рекомендациями, изложенными в литературе [21,22]. Критерий приемлемости выражается величиной относительного стандартного отклонения (RSD, %), который находился око-Оптическая плотность, Ало 5%, что свидетельствует о соответствии разработанной методики по параметру сходимости.10,90,80,70,60,50,40,30,20,10y = 0,1533x + 0,13R² = 0,98930,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6Содержание суммы простых сахаровв анализируемом растворе, г/мл ·10-5Рис. 122.
Вид зависимости оптической плотности раствора от суммарной концентрации полисахаридов и простых сахаровКоличественное определение суммы свободных восстанавливающих моносахаридов полисахаридногокомплекса в извлечениях из ЛРС, полученных с применением кислотного гидролиза было проведено также другими спектрофотометрическими методами, рекомендованными ОФС ГФ ХIII [93]. Были использованыантроновый и орциновый методы (рис. 123-124). Результаты определения представлены в таблице164.Таблица 163Валидационные характеристики методики количественного определения суммы полисахаридови простых сахаров в пересчете на глюкозу в плодах облепихиСтатистические характеристикиРезультаты12Оценка линейности методикиУравнение регрессииу=0,1533х+0,132Коэффициент корреляции (R )0,9893Диапазон линейности (мкг БАВ в 1 мл извлечения)6,80 – 54,40Оценка прецизионности методики по показателю сходимостьСодержание суммы полисахаридов ипробаОптическая плотностьпростых сахаров, %10,2118,918320,25210,651330,2339,848240,2118,91832481250,27311,538960,2369,9750Оценка прецизионности методики по показателю внутрилабораторная воспроизводимостьпробаHitachi U-1900 (Япония)СФ-2000 (Россия)Результаты количественного определения, %18,918310,0680210,65139,649539,848210,532948,918310,9556511,53899,159269,97509,2057Валидационные характеристики9,9750±0,43409,9285±0,31068,9183 - 11,53899,1592 - 10,9556SD=4,35SD=3,13RSD=4,15RSD=7,31Предел определения, гКоличество мкг БАВ в 1 мл извлечения1,50ГлюкозаФруктозаКсилозаРамнозаПлоды облепихи крушиновидной высушенные0,8оптическая плотность0,70,60,50,40,30,20,10350400450500550600650700длина волны, нмРис.
123. Антроновый метод. Спектры поглощения продуктов реакции стандартных образцов простых сахаров и извлечений из изучаемого ЛРС, полученных с применением кислотного гидролиза, с антроном)Таблица 164Результаты определения суммы полисахаридов и простых сахаров в полисахаридном комплексеплодов облепихи крушиновидной высушенных фармакопейными спектрофотометрическимиметодиками (в пересчете на абсолютно сухое сырье)№ п/пМетод определенияСумма полисахаридов и простых сахаров,%1Пикриновый метод27,2482±2,72482Антроновый метод10,5191±1,05193Орциновый метод1,7184±0,1718оптическая плотность2492,42,221,81,61,41,210,80,60,40,20ФруктозаКсилозаРамнозаПлоды облепихи крушиновидной высушенные200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700длина волны, нмРис.
124. Орциновый метод. Спектры поглощения продуктов реакции стандартных образцовпростых сахаров и извлечений из изучаемого ЛРС, полученных с применением кислотного гидролиза, с орцином и хлоридом железа (III)Таким образом, разработана и валидирована методика определения суммы свободных исвязанных сахаров пикриновым методом в плодах облепихи крушиновидной.
Проведено определение суммы полисахаридов и простых сахаров в плодах облепихи крушиновидной антроновым и орциновым методами. Исследована стабильность полисахаридного комплекса в плодахоблепихи крушиновидной при высушивании.5.4.Влияние различных способов экстракции на извлечение некоторых гидрофильныхгрупп БАВ из плодов облепихи крушиновиднойЗначение экстракционных методов в технологии получения ФП в последние годы неиз-менно возрастает, что обусловлено необходимостью внедрения ресурсосберегающих технологий переработки ЛРС и обеспечения максимального извлечения его ценных БАВ [159,160].
Отэффективности протекания этого процесса во многом зависит качество готового продукта, егофармакологическая активность [214]. Задача любого процесса экстракции из ЛРС заключаетсяв том, чтобы экстрагент с как можно меньшими препятствиями преодолевал мембранные преграды клеток и максимально извлекал ценные вещества растительного сырья. Каждый из способов экстракции характеризуется как собственными преимуществами, так и недостатками.Необходимо также учитывать, что большинство способов экстрагирования предполагает использование повышенных температур воздействия. В настоящее время особую актуальностьприобретает поиск технологии «холодных» экстрактов, которые в отличии от «горячих» экстрактов, содержат полный спектр БАВ в неразрушенном состоянии, при этом вместо нагревадля повышения диффузии могут использоваться различные физические приемы воздействия.
В250качестве такого приема можно рассматривать ультразвуковое воздействие [159,160]. В литературе вопросы использования ультразвукового воздействия для ускорения процессов экстракцииосвещены достаточно скудно [214].В настоящее время промышленная переработка плодов облепихи крушиновидной, в основном, ориентирована на получение, чаще всего, облепихового масла или сока, характеризующихся высокой фармакологической активностью. Такая технология обуславливает образование значительных объемов побочной продукции.
Рациональное использование растительныхресурсов является одной из проблем современности [112-115].Для исследований применялся аппарат: ультразвуковая ванна «Град 40-35» (ЗАО «ГрадТехнолоджи», Россия). Для процесса экстракции был определен режим ультразвуковой обработки: частота 50-60 Гц, мощность 180 Вт. Для исследования были выбраны такие группы БАВ,как АК и АЦ, характеризующиеся различной устойчивостью к воздействию ультразвука.Для сравнительного исследования влияния способа экстракции на выход АК, извлеченияготовили следующим образом: по 3,0 г свежего измельченного ЛРС (т.н.) переносили в конические колбу объемом 250 мл, добавляли по 100 мл воды очищенной. В одном случае, колбунагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин (экстракт 1).В другом, колбу помещали в ультразвуковую баню на 30 мин при температуре 80±5 °С (экстракт 2).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
