Диссертация (1139719), страница 45
Текст из файла (страница 45)
При изучении спектров поглощения водных извлечений в диапазоне длин волн 200-500 нм, было установлено, что водныеизвлечения, разведенные 70% этанолом в соотношении 1:10, имели максимум при длине волны277±1 нм. Аналогичный максимум отмечен для раствора РСО танина на 70% спирте (рис. 106).Для извлечения суммы ДВ из ЛPC, наиболее часто согласно литературным данным, используют в качестве экстрагента воду очищенную. Экспериментальным путем установлено, чтооптимальным соотношением JIPC и экстрагента для извлечения ДВ является 1:200 (таблица147), а наилучшее время экстракции, за которое будет извлекаться максимальное количествоДВ, составляет 30 минут (рис.
107).оптическая плотность2290,310,220,10240260280300320длина волны, нмРис. 106. Спектр поглощения растворов в 70% этаноле в диапазоне длин волн 200-320 нм (1 РСО танина; 2 - извлечение из плодов)2Содержание БАВ, %2002201,81,61,41,210,8154065Время экстракции, мин90115Рис.
107. Влияние времени экстракции на извлечение ДВ из плодовТаблица 147Влияние соотношения сырья и экстрагента на извлечение ДВ из плодов [332]№ п/пЛРС:экстрагентНайдено ДВ, %11:250,99±0,019823451:501:751:1001:1251,14±0,02281,10±0,02201,12±0,02241,18±0,02366781:1501:2001:2501,22±0,02441,62±0,03241,51±0,0302При исследовании влияния кратности экстракции на выход ДВ в извлечение из сырьяоблепихи крушиновидной установлено, что повышение кратности сопровождается снижениемданного показателя. По-видимому, это связано со снижением времени контакта сырья с растворителем (рис.
108).230Содержание ДВ в сырье, %21,621,51,341,352310,501Кратность экстракцииРис. 108. Влияние кратности экстракции на извлечение ДВ из плодовКоличественное определение методом спектрофотометрии. Около 1,0 г (т.н.) измельченного ЛРС переносят в коническую колбу объемом 250 мл, заливают 200 мл кипящей воды икипятят с обратным воздушным холодильником в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость процеживают через несколько слоев марли в коническую колбу, не дожидаясь охлаждения (охлаждение сопровождается снижением растворимости ДВ в воде), так, чтобы частицы сырья не попали в колбу.
Отбирают 5 мл извлечения, полученного в мерную колбуобъемом 50 мл и доводят до метки 70% этанолом. Измеряют оптическую плотность полученного раствора относительно 70% этанола при длине волны 277±1 нм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО танина. Содержание ДВ (Х4) в пересчете на танин в процентах в пересчете на абсолютно-сухое сырье вычисляют по формуле 23:(23)Ах - оптическая плотность исследуемого извлечения при длине волны 277±1 нм; а - масса сырья, г; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; А0 - оптическая плотность РСО танинапри длине волны 277±1 нм.Приготовление РСО танина осуществляли, как описано в п. 2.7 (Глава 2).Известен также метод спектрофотометрического количественного определения суммыДВ в пересчете на кислоту галловую в боратном буферном растворе с рН=9,0 [234].
В данномметоде, по данным авторов [198], проведению анализа препятствует многократное разведениеиспытуемого раствора и использование буфера в качестве раствора сравнения. Однако, результаты, полученные по двум спектрофотометрическим методикам (СФ-метод определения суммыДВ в пересчете на танин в водно-спиртовой среде и СФ-метод определения суммы ДВ в пере-231счете на галловую кислоту в боратном буферном растворе с рН=9,0) оказались сопоставимыми(таблица 148).Описаны в литературе также способы спектрофотометрического количественного определения ДВ, основанные на образовании окрашенных комплексов ДВ с железо-тартратным реактивом [17].
Следует отметить, что метод не может быть рекомендован для этих целей, так каканалитический максимум на спектре поглощения извлечения с реактивом оказывался батохромно сдвинут на 35 нм относительно ожидаемого (545 нм), в результате чего были полученызаниженные результаты при его использовании.Таким образом, наиболее предпочтительным для количественного определения суммыДВ в плодах облепихи крушиновидной оказался метод спектрофотометрии, в основе котороголежит измерение оптической плотности спирто-водной вытяжки из ЛPC при длине волны275±2 нм, так как средняя ошибка определения составляла около 2 %, что в 3-5 раз меньшеошибки при использовании других методов. Результаты определения содержания ДВ в плодахпри помощи различных методик представлены в таблице 148.Таблица 148Сравнительная оценка содержания ДВ в плодах облепихи крушиновидной различными методами [332]№Название методаСодержание суммы ДВ, %п/п12ПерманганатометрияПерманганатометрия(желатиновый метод)6,614±0,48703,307±0,24343СФ-метод определения суммы ДВ в пересчете натанин1,209±0,02294СФ-метод определения суммы ДВ в пересчете нагалловую кислоту (значение удельного показателя поглощения)0,838±0,08405СФ-метод определения суммы ДВ в пересчете нагалловую кислоту (сравнение со стандартным образцом)0,812±0,08156СФ-метод определения суммы ДВ с железотартратным реактивом в пересчете на танин0,061±0,00637СФ-метод определения суммы ДВ с железотартратным реактивом в пересчете на кислотугалловую0,150±0,0098Для идентификации и количественного определения в сумме ДВ отдельных представителей данной группы БАВ была использована разработанная ТСХ-методика (Глава 3, п.
3.2.4).232Результаты показали, в сумме комплекса ДВ плодов ОК высушенных лишь 3,5% приходится наидентифицированную методом ТСХ галловую кислоту (рис. 109).0,04076(галловаякислота)Доля галловой кислоты в комплексе ДВ плодов, %(в пересчете на абсолютно сухое вещество)Рис. 109. Доля галловой кислоты в сумме комплекса ДВ плодов высушенныхВалидационную оценку разработанной методики проводили, определяя такие характеристики, как линейность, предел определения (ПО), повторяемость и внутрилабораторная воспроизводимость.
Содержание суммы ДВ в пересчете на танин в образцах ЛPC составило1,14185±0,01940% (принятое опорное значение).Линейность определяли на семи уровнях концентраций. Критерий приемлимости - коэффициент корреляции не менее 0,995 (рис. 110).Оптическая плотность1,4y = 0,0607x - 0,0348R² = 0,99921,210,80,60,40,20161116Содержание ДВ в извлечении, г/мл ×10-621Рис.
110. Зависимость оптической плотности извлечения от содержания суммы ДВВнутрилабораторную воспроизводимость методики определяли в условиях, рекомендованных в литературе [21]. Результаты, полученные при статистической обработке, достоверныпри доверительной вероятности 95%, вычисленное значение RSD – 2,095% и SD – 2,392% непревышают критериев приемлемости - 5%, что свидетельствует о прецизионности методики в233условиях повторяемости (таблица 149). Другие характеристики линейности (наклон прямой,отрезок на оси ординат) приведены в таблице 149.Таблица 149Результаты валидации методики спектрофотометрического количественного определения суммы ДВ в плодах [332]Статистические характеристикиРезультатыОценка линейности методикиУравнение регрессииу=0,0607х-0,0348R20,9992Диапазон линейности (грамм БАВ в 1 мл раствора в1,041 – 20,837×10-6пересчете на танин)Оценка прецизионности методики по показателю сходимостьпробаОптическая плотностьСодержание ДВ, %10,33501,1576520,33701,1645630,32101,1092740,32701,1300050,33501,1576560,32201,11273Оценка прецизионности методики по показателю внутрилабораторная воспроизводимостьпробаHitachi U-1900 (Япония)СФ-2000 (Россия)Результаты количественного определения, %11,157651,174221,164561,168031,109271,118941,130001,1210251,157651,242661,112731,0861Валидационные характеристики1,14185±0,019401,1518±0,058121,10927 - 1,164561,0861 - 1,2426SD=2,392SD=5,540RSD=2,095RSD=4,810Предел определения, гКоличество грамм БАВ в 1 мл раствора1,041×10-6Согласно полученным результатам, разработанная методика валидна и пригодна для использования в целях стандартизации данного ЛРС.С целью исследования стабильности ДВ и обоснования выбора оптимального способаконсервации плодов облепихи, проводили количественное определение в свежих, замороженных и высушенных (цельных и измельченных) плодах (рис.
111) [176].Содержание ДВ в сырье, %2341,41,2091,210,80,60,5340,3680,40,2210,20свежиевысушенные цельныевысушенныеизмельченныезамороженные до 6мес.Рис. 111. Влияние способа консервации плодов на содержание ДВДанные рис. 111 показывают, что при высушивании и в процессе хранения в условияхзаморозки происходит снижение содержания ДВ в плодах. Полифенолы подвержены процессамокисления, происходящим при повышенных температурах и контакте с кислородом воздуха, засчет большого количестве фенольных гидроксилов в молекулах. На основании полученных результатов, можно отметить, что, вероятнее всего, основным местом концентрирования ДВ вплодах является косточка, так как ее измельчение способствует увеличению выхода ДВ в извлечение примерно в 4 раза по сравнению с высушенными цельными плодами [332].5.3.6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
