Диссертация (1139719), страница 53
Текст из файла (страница 53)
138).274Рис. 138. Влияние полярности системы на разделение хлорофиллов а и bИдентификацию БАВ листьев крапивы двудомной можно проводить в системах № 1-4.Однако, лучшим элюентом по совокупности изученных параметров является система № 2, которая может быть рекомендована для включения в современную НД.6.1.3. Исследование состава пигментов листьев и масляного экстрактакрапивы двудомнойМЭ, полученные на основе ЛРС, широко применяются в фармации в качестве ЛП и БАД.Содержание БАВ в МЭ фармацевтического назначения в настоящее время, согласно требованиям НД, не нормируется. Для оценки качества МЭ рекомендуется использовать нормативыСанПин 2.3.2.1078-01 [244] для БАД на основе растительных масел.
Физико-химическиепоказатели, а также нормативы безопасности МЭ (ТМ, РН и ОП), по которым определяют ихкачество, не дают полной информации об их фармакологических свойствах и качественном иколичественном составе БАВ. Поэтому, интересным являлось проведение сравнительного качественного и количественного определения пигментов (хлорофиллов и каротиноидов) в листьяхи МЭ листьев крапивы двудомной для нормирования данных показателей и усовершенствования действующей НД.Извлечения из исследуемого ЛРС готовили, как описано выше (п.
6.1.1). Для исследования влияния вида экстрагента на состав БАВ получаемого извлечения использовали 95% этаноли ацетон. Как видно из рис. 139, при использовании ацетона в качестве экстрагента наблюдается больший выход изучаемых пигментов, особенно каротиноидов. Поэтому данный растворитель был выбран для получения вытяжек из ЛРС [283].Для анализа спектральных характеристик МЭ использовали метод диффeрeнциальнойспектрофотометрии.
Спектры поглощения исследуемого МЭ в растворителях с различной полярностью снимали на СФ-2000-01 (Россия) относительно раствора подсолнечного рафиниро-275ванного масла в соответствующем растворителе. Выбор раствора сравнения объясняется особенностями технологии производства МЭ. В работе использовали растворители марки х.ч. вдиапазоне полярности от 0 до 5,4 ед.оптическая плотность1,5Ряд21,20,9Ряд10,60,30400450500550600650700длина волны, нмРис. 139.
Вид спектра поглощения извлечений из листьев крапивы в различных растворителях:1 – ацетон; 2 – 95% этанолВ результате обнаружены характеристические полосы поглощения МЭ в различных растворителях, свойственные различным группам БАВ (таблица 177).
На рис. 140 представлен виддифференциальных спектров поглощения МЭ листьев крапивы двудомной в изученных растворителях в интервале длин волн 300-770 нм [330].Таблица 177Положения максимумов поглощения на спектрах поглощения МЭ листьев крапивы двудомнойв растворителях различной полярностиВеличина λmax в растворителях различной полярности№БАВп/пгексанн-бутанолэтилацетатхлороформацетон1234РФенольные соединения – 320360 нм03173,93084,33204,4314; 3205,4310Каротиноиды иЖК420;440-455;480539611;672422;442-456;472-486542615;671420;444-456422;452;478-490542;612; 671420; 442454; 474480540;669АЦХлорофилловыесоединения539-Полученные на спектах полосы поглощения соответствуют следующим группам БАВ: кспектрам поглощения каротиноидов близки максимумы при 420, 440-456, 472-490 нм; для АЦ -276характерны полосы в диапазоне 539-542 нм; хлорофилловые соединения дают пики при 653-672нм [283].Основным идентификационным критерием спектра поглощения хлорофиллов a и b является наличие двух выраженных полос: при 660 и 640 нм - в красной и при 420 и 450 нм - в синефиолетовой областях спектра [313].
Максимум поглощения в красной области обусловлен сопряженной системой двойных связей циклической тетрапирольной структуры.Оптическая плотность1,210,80,60,40,2030041352350400450500550600650700750Длина волны, нмРис. 140. Дифференциальные спектры поглощения МЭ листьев крапивы в различных растворителях (1 – гексан; 2 – н-бутанол; 3 – этилацетат; 4 – хлороформ; 5 – ацетон)Главная циклическая система коньюгиованных двойных связей, образующая делокализованную π-орбиталь, имеет дополнительные сопряжения (винильнaя группа в 1-м цикле, вторая полуизолированная связь во 2-м кольце, карбонильная группа в 5-м ядре).
Образуетсясложная разветленная коньюгированная система, обеспечивающая максимум поглощения вэтой области [330]. Центральный атом магния в структуре из четырех пиррольных гетероциклов объясняет наличие второго максимума при 420 и 450 нм.
Влияние магния на вид спектрапроисходит через гетероатомы пиррольных колец. Спектральные характеристики БАВ в масляных и иных извлечениях связаны с влиянием экстрагента [283]. За счет межмолекулярных взаимодействий в растворах возникает изменение в состоянии электронов атомов в молекулах, чтоприводит к смещению полос поглощения в различных растворителях. Показано, что с ростомполярности растворителя, происходит батохромный сдвиг максимума, обусловленного присутствием каротиноидов (таблица 177), а также гиперхромный сдвиг полосы, свойственной хлорофилловым соединениям.
Смещение характеристической полосы (667 нм) в длинноволновуюобласть (670-672 нм) спектра подтверждает предположение об ассоциациии производных хлорофилла в МЭ до олигомеров (таблица 177). Вид спектра свидетельствует об образование олигомера как линейной, так и «сэндвичевой» структур и, по-видимому, является смесью этих ипромежуточных форм связи между молекулами олигомера. Построение олигомеров, предположительно, происходит за счет сложноэфирной группы хлорофилла.277Данные спектров использовали для оценки количественного содержания хлорофиллов икаротиноидов в исследуемых образцах по уравнению Хольма – Ветштейна [110,287,344]. Результаты представлены в таблице 178.Таблица 178Данные количественного содержания липофильных пигментов анализируемых образцах [330](в пересчете на абсолютно сухое сырье)№п/п123Анализируемый образец, мг/гБАВХлорофилл аХлорофилл bСумма каротинов (каротиноиды и ксантофиллы)МЭ листьев крапивыдвудомной0,014±0,0030,013±0,003Крапивы двудомнойлистья2,714±0,0691,007±0,0560,060±0,00035,096±0,038В изучаемом ЛРС в сумме хлорофиллов преобладает хлорофилл а.
При этом содержаниехлорофиллов а и b в МЭ находится примерно в равном соотношении (таблица 178), что связано,скорее всего, с особенностями выделения данных пигментов липофильными экстрагентами.Установлено, что содержание изучаемых БАВ в МЭ на два порядка ниже по сравнению с ЛРС.Низкий выход липофильных БАВ в ходе масляной экстракции объясняет длительность и многоступенчатость процесса.
Так, например, из мякоти высушенных плодов облепихи (при влажности 14 %) достаточно полно извлекаются ЖРВ и каротиноиды только при 4-кратной экстракции при 55 – 60°С [330,376].Сравнительное исследование качественного состава пигментов в изучаемых объектахпроводили по средствам хроматографического разделения каротиноидов и хлорофиллов в тонком слое сорбента. Ацетоновое извлечение из ЛРС в количестве 40 мкл наносили на стартовуюлинию хроматографических пластин марки «Sorbfil». МЭ готовили на ацетоне в соотношении1:1 и наносили на сорбент в количестве 20 мкл.
В работе использовали различные типы ТСХпластин (таблица 179).Таблица 179Характеристика хроматографических пластин, использованных для разделения пигментов изучаемых объектов [330]№Параметр пластины для ТСХПТСХ-АФ-АПТСХ-П-Вп/п1СиликагельСТХ-1АСТХ-1ВЭ2Тип подложкиАлюминиеваяПолимерная подфольгаложка3Размер частиц сорбента, мкм5-178-124Слой сорбента, мкм90-1201005Размер пластин, см10×156СвязующееСиликазоль278Элюирование осуществляли в ранее выбранной системе: петролейный эфир – этанол(16:1) [284]. Марка и тип пластин, как известно, оказывает существенное влияние на эффективность разделения зон БАВ на хроматограммах. С целью выбора наиболее эффективных, в работе проведен сравнительный анализ различных пластин для ТСХ.Эффективность процесса хроматографирования определяется величинами N, H и приведенной высотой, эквивалентной теоретической тарелке (ПВЭТТ).
На основании данных расчетауказанных параметров, возможно сравнить эффективность различных сорбентов. ВеличинаПВЭТТ дает возможность для двух любых пластин оценить качество сорбента, независимо отдлины пластины, зернения и природы сорбента [39].Для каждого исследуемого типа пластин (таблица 179) после элюирования на хроматограммах (рис. 141) были рассчитаны показатели эффективности разделения пигментов [39].
Результатыпредставлены в таблице 180.Применение выбранной элюирующей системы приводит к удовлетворительному разделению хроматографических зон изучаемых пигментов, так как величина селективности сорбции, больше 1,0 (таблица 180). Вместе с тем, показатели эффективности хроматографическогоразделения хлорофиллов и каротиноидов в тонком слое имеют большие значения при использовании пластин типа ПТСХ-П-В (таблица 180).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
