Диссертация (1139679), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Биологическуюпробу (экспериментальная оценка in vivo) ставили на 60 нелинейных мышах(Mus musculus albus) и 60 хлопковых крысах (Sigmodon hispidus). Дляэкспериментов использованы нелинейные мыши обоего пола в возрасте 1,5-2месяца и массой 20 – 25 г, а также хлопковые крысы обоего пола массой 200 г.Зародышевый материал для эксперимента брали интраоперационно путемпункции и полной аспирации гидатидной жидкости из кисты печени CE1-типаразмерами 8-12 см (живые кисты или кисты в первой фазе развития поИ.Г.Ахмедову [10]) с хорошо выраженным осадком гидатидного песка.
Забор,хранение и транспортировка материала проводились в стерильных 20граммовыхшприцах.Всегодляэкспериментабылиспользованинтраоперационный материал 14 пациентов в возрасте 32-46 лет. Из нихматериал 4 пациентов пошел на подготовку ацефалоцист.82АцефалоцистыгидатидозногоэхинококкаполучалипометодикеФ.П.Коваленко [58-60] у экспериментально зараженных белых мышей через 4месяца после заражения внутрибрюшинным инъекционным введением взвесипротосколексов.
После забоя животных из брюшной полости выделяликонгломераты ацефалоцист, покрытых тонкой соединительнотканной капсулой.Стерильными инструментами тупым путем нарушали целостность тонкойфибрознойкапсулывфизиологическомраствореивысвобождалиацефалоцисты из конгломератов. Ацефалоцисты промывали физиологическимраствором с антибиотиками (2000 ед/мл пенициллина + 0,3 мг/мл гентамицина)и использовали для определения антипаразитарной активности тестируемыхрастворов. В эксперименте использовали ацефалоцисты диаметром 300 - 3000мкм.Огубительномдлязародышевыхэлементовэхинококкадействиигермицидов судили по соотношению живых и погибших протосколексов иацефалоцист в опытных образцах по сравнению с контролем.О жизнеспособности протосколексов судили по их двигательной активностив физиологическом растворе при 36 - 38°С, состоянии структуры паренхимы,короны крючьев, количеству известковых телец.
Показателями гибелипротосколексов являлись отсутствие подвижности, уменьшение количества илиисчезновение известковых телец и появление деструктивных изменений, такихкак сглаженность структуры паренхимы протосколекса, деформация короныкрючьев или ее отпадение у вывернутых форм, набухание, отслоение инарушение целостности тегумента, выход жидкого содержимого из паренхимыпротосколексов наружу через дефекты тегумента (рис.
16-21). В сомнительныхслучаях оценивалось способность мертвых протосколексов окрашиваться 0,1%раствором эозина в нативном препарате [319].83Жизнеспособность ацефалоцист оценивали по их тургору и целостностикутикулярной оболочки [317]. Критерием гибели ацефалоцист служил коллапси нарушение целостности кутикулярной оболочки, сглаженность структуры,потемнение, зернистость и отслоение герминативной оболочки от кутикулярной(рис. 22).Рис. 16.
Нарушение целостности тегумента у протосколексов.84Рис. 17. Сглаженность структуры паренхимы, потеря известковых телец иотслоение тегумента у погибших протосколексов, их сморщенность.Рис. 18. Нарушение целостности протосколексов, их агрегация (с потерейподвижности), уменьшение количества или исчезновение известковых телец.85Рис. 19. Деформация короны крючьев и ее отпадение у вывернутых форм.Рис. 20.
Отпадение короны крючьев с другими признаками гибели увывернутых форм протосколексов.86Рис. 21. Протосколексы с различными признаками гибели.Рис. 22. Коллапс и нарушение целостностиацефалоцист и погибшие протосколексы.кутикулярнойоболочки87Эксперимент in vitro состоял в следующем. По 0,5 мл свежей взвесизародышевых элементов в гидатидной жидкости (1000 - 5000 протосколексов и500 - 1000 ацефалоцист) помещались в пробирки с испытуемым раствором.Пробирки помещались в термостат при температуре 36 градусов. Первуюоценку жизнеспособности зародышевых элементов проводили через 5 минутинкубации, вторую – через 10 минут.
Микроскопию делали при маломувеличении (х56). Всего было 14 серий экспериментов (в каждой сериииспользовали зародышевый материал от одного пациента).Результаттестирования«положительный»–нежизнеспособностиприоценивалипобезупречностизародышевыхэлементовтрехбалльнойдостигнутых(нетшкале:критериевжизнеспособныхзародышевых элементов), «отрицательный» – при отсутствии искомыхкритериев у существенной части зародышевых элементов, «сомнительный» –когда однозначно оценить результат тестирования невозможно.Для подтверждения инвазивных способностей зародышевых элементов послеобработки гермицидным раствором проведены биологические пробы in vivo,основанные на внутрибрюшном инъекционном введении взвеси протосколексовиацефалоцист.
Дляэтогоиспользовалитолстые(диаметром 3мм)инъекционные иглы. Доза взвести инвазионного материала на каждое животноесоставляла 500-100 протосколексов и 30 - 50 ацефалоцист.Инвазивный материал от одного больного использовали в одной серииэкспериментов. В каждой серии на каждый испытуемый раствор брали по дваживотных на один испытуемый раствор: физиологический раствор; 30%гипертонический раствор хлорида натрия; 80% раствор глицерина, 3%гипертонический раствор хлорида натрия, 0,04% раствор хлоргексидина,раствор цетримид-хлоргексидин, разбавленный в соотношении 1:1000.88Кроме этого, проведена экспериментальная оценка противорецидивнойхимиотерапии Альбендазолом при прорыве эхинококковой кисты в брюшнуюполость.
Для этого в каждой серии экспериментов еще двум животнымвнутрибрюшинновводилиинвазивныйматериал,обработанныйфизиологическим раствором. Причем, этим животным в пищу добавлялипорошок Альбендазола в течение 2 месяцев из расчета по 13 мг препарата на 1кг массы животного в сутки.Проведено 10 серий экспериментов. Результаты учитывались лишь в тойсерии экспериментов, где хотя бы у одного животного наступило заражение, и вбрюшной полости сформировались кисты. В 2 сериях экспериментов заражениене наступила ни у одного из лабораторных животных. В 8 сериях наступилозаражениеулабораторныхживотных,инвазированныхзародышевымиэлементами, обработанными хотя бы одним из тестируемых растворов:физиологическим раствором, 3% раствором хлорида натрия, 0,04% растворхлоргексидина и раствором цетримид-хлоргексдина в разведении 1:1000.Контролем служили 0,9% физиологический раствор хлорида натрия, 30%раствор хлорида натрия и 80% раствора глицерина.Предварительный контроль над процессом развития внутрибрюшинногоэхинококкоза проводили путем ультразвукового исследования.
Использовалиультрасонограф GE Vivid S5 с линейным датчиком с частотой озвучивания до7,5-12 МГц. Контроль осуществляли через 4-6 месяцев после заражения.Окончательный вывод о развитии кист делали после забоя животного, прикотором брюшную полость вскрывали и искали эхинококковые кисты. Поисквыполняли с помощью лупы с увеличением в 5 раз. Вскрытие производилосьпосле умерщвления животных передозировкой ингаляционного наркоза.Наличие хотя бы одной кисты расценивалось как недостаточная сколециднаяактивность испытуемого раствора.89Результатыоценкивлиянияпротивоэхинококковыхгермицидов,используемых для санации брюшной полости, на гибель зародышевыхэлементов цистного эхинококка in vitro, представлены в табл.
4.Табл. 4Результаты тестирования антипаразитарной активности растворов приэкспозиции зародышевых элементов цистного эхинококка в течение 5 и 10минут.Тестируемый агентпротосколексымикроацефалоцисты5 мин10 мин5 мин10 минФизиологический растворотрицате отрицате отрицате отрицате(контроль)льныйльныйльныйльный80% глицерин (второй контроль) безупреч безупреч безупреч безупречныйныйныйный30% раствор хлорида натрия безупреч безупреч безупреч безупреч(третий контроль)ныйныйныйный0,04% хлоргексидинсомнител сомнител отрицате отрицатеьныйьныйльныйльныйЦетримид-хлоргексидин,сомнител сомнител отрицате отрицатеразбавленный в соотношенииьныйьныйльныйльный1:10003% хлорид натриясомнител сомнител отрицате отрицатеьныйьныйльныйльныйЭкспозиция тестируемого раствора в течение 5 и 10 минут не привела кбезупречному результату ни в одном из случаев кроме 80% глицерина и 30%раствора хлорида натрия, использованных в эксперименте в качествеконтрольных растворов, сколецидная активность которых нами не подвергаласьсомнению.Так, глицерин в концентрации 80% и 30% раствор хлорида натрия во всехсериях эксперимента приводил к полной гибели всех протосколексов иповреждению ацефалоцист (рис.
23-24). Ни в одном из полей зрения не былиобнаружены целые и подвижные протосколексы.90Рис. 23. Отмытые в физиологическом растворе протосколексы после 5минутной экспозиции в 30% NaCl.После экспозиции зародышевых элементов в термостате в течение 10 минутни в одной из пробирок физиологический раствор не привел к существенномуповышению числа мертвых протосколексов. В поле зрения наблюдалисьпреимущественноцелыеиподвижныепротосколексы.Ацефалоцистыпрактически не изменились. Ни в одном из полей зрения не были обнаруженыповрежденные экземпляры. Результаты признаны отрицательными.91Рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
