Диссертация (1139664), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Такой подход является более информативным при диагностикевнутриклеточных паразитов (малярия, лейшманиозы, токсоплазмоз и др.), плохокультивируемых на питательных средах [70, 71].Различные варианты оборудования для ПЦР позволяют работать как вусловиях полной автоматизации процесса, так и при чередовании ручных иавтоматизированных этапов, что делает ПЦР доступной не только научнымучреждениям и крупным медицинским центрам, но и клиническим ипаразитологическим лабораториям системы Роспотребнадзора и первичного звеназдравоохранения.Широкое внедрение ПЦР в клиническую лабораторную диагностикутребует повышения уровня информированности медицинских работников отеоретических основах и возможностях современных методических подходов иинтерпретации результатов анализа.Внедрению молекулярной диагностики, индикации и идентификациифрагменов геномов паразитов в практику может способствовать существованиеПЦР-лабораторий в крупных медицинских центрах, осуществляющих ПЦРдиагностику возбудителей других инфекционных болезней: вирусов гепатита,иммунодефицита человека, микоплазмы и др.

Диагностика паразитозов нетребует специальной дополнительной подготовки персонала, а имеющиесястандартные наборы реактивов могут быть дополнены лишь специальносинтезированными праймерами.Цель диссертационной работы: Разработка методологии мониторинга засоциально значимыми паразитозами с применением методов молекулярнойпаразитологии.7Задачи исследований:1. Проанализировать существующие в настоящее время молекулярнобиологические методики и оценить возможности их применения в медицинскойпаразитологии.2. Адаптировать и оптимизировать молекулярно-биологические методы сучетомуникальнойстадийностиразвития,свойственнойисключительновозбудителям паразитарных болезней с различным патогенезом, определяющимлокализацию возбудителя в организме больного и в среде обитания человека, гденаиболее вероятно обнаружение патогена или фрагментов его генома.3.

Оптимизироватьмолекулярно-биологическиеметодыдиагностикипаразитозов с учетом разнообразия механизмов передачи их возбудителей.4. Сравнитьэффективностьмолекулярно-биологическихметодовстрадиционными методами диагностики паразитарных заболеваний.5. Разработать методические подходы к дифференциальной диагностикекишечных протозоозов.6. Оценить возможность использования оптимизированных молекулярнобиологических методик для лабораторной, клинической и эпидемиологическойдиагностики, а также для санитарной паразитологии.Научная новизна результатов исследований:1. Оценена возможность применения методов молекулярной биологии вмониторингепротозойныхзапаразитозами,инфекцийвызываемыми(малярия,различнымилейшманиозы,возбудителямикриптоспоридиоз),гельминтными инвазиями и за комарами-переносчиками (дирофиляриозы),которая показала их значительную эффективность как в клинических, так и впопуляционных исследованиях.2. Выявленывнутривидовыефено-игенотипическиеразличиямалярийных паразитов P.

vivax, определяющие географическое происхождениеслучаев малярии и продолжительность инкубационного периода в организмечеловека.83. Комплексом лабораторных методов (микроскопия, экспресс-тесты иПЦР)подтвержденадостоверностьотсутствияисточниковинфекциивоздоровленных очагах малярии в Республике Таджикистан и КыргызскойРеспублике,чтоподтвердилофактэлиминациималяриивуказанныхгосударствах согласно регламенту ВОЗ.4. Оптимизирована методика ПЦР-диагностики криптоспоридий в водныхобъектах окружающей среды, что существенно увеличило эффективность ичувствительность санитарно-паразитологических исследований, необходимых дляопределения гигиенических стандартов и биологической безопасности.5. Показана возможность применения ДНК-диагностики в деятельностиРеференс-лабораторий при проведении контрольных исследований с цельюопределения качества работы клинико-диагностических и паразитологическихлабораторий.6. Разработаны методики ПЦР-диагностики единственного на территорииРоссийской Федерации трансмиссивного гельминтоза человека – дирофиляриоза,а также висцерального лейшманиоза в очагах Республики Узбекистан.Практическая ценность работы:Внедрениевпрактикуотечественногомолекулярнойпаразитологиипозволяетдостоверностьдиагностикисоциальноздравоохраненияоптимизироватьзначимыхиметодовповыситьпаразитозовиусовершенствовать мониторинг паразитологической ситуации в стране.Применение этих методов в Референс-лабораториях помогло сократитьтрудозатраты при контроле диагностики паразитозов, что наглядно доказаларабота Референс-лаборатории НИИ медицинской паразитологии и тропическоймедицины им.Е.И.Марциновского по диагностике малярии, лейшманиозов ифиляриозов.Материалы исследований используются в виде лекций, семинарских ипрактических занятий:9Кафедрой тропической медицины и паразитарных болезней медико-профилактического факультета ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.

И.М. СеченоваМинздрава России (Сеченовский Университет)по специальностям 03.02.11 -«паразитология» и 03.02.05 – «энтомология»;НИИ МПиТМ им. Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого МГМУ им.И.М.Сеченова Минздрава РФ в проведении учебных курсов ВОЗ и Минздрава РФпо эпидемиологическому надзору за паразитарными болезнями.Проведенные исследования являются результатом многолетнего научногосотрудничества медицинских учреждений стран СНГ: Российской Федерации,Кыргызской Республики, Республики Узбекистан и Республики Таджикистан.Внедрение материалов исследований в практику:Разработанный метод ПЦР-диагностики малярии внедрен в практикуРеференс-центра по мониторингу за малярией, лейшманиозам и филяриозам(приказ Министерства здравоохранения РФ от 17.03.2008 №88) по паразитарнымзаболеваниям, функционирующего на базе НИИ МПиТМ им.

Е.И.МарциновскогоГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава РФ.Материалы«Профилактикадиссертациидирофиляриоза»включеныМУвметодические3.2.1880-04,2004г.,указания:«Санитарно-паразитологический анализ воды» МУК 4.2.2314-08, 2008 г., Санитарнопаразитологическиеисследованияплодоовощной,плодово-ягоднойирастительной продукции МУК 4.2.3016-12, 2012 г., «Лабораторная диагностикагельминтозов и протозоозов» МУК 4.2.3145-13, 2014 г., «Профилактикаэнтеробиоза» Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.2.3110-13, 2014 г. и«Лабораторная диагностика малярии и бабезиоза» МУК 4.2.3222-14, 2014 г.Результаты диссертационного исследования опубликованы в разделесправочника «Методики клинических лабораторных исследований» том 3 подред.

В.В.Меньшикова, Москва, 2009 г. и в разделе практического руководства«Лабораторная диагностика опасныхинфекционных болезней» подГ.Г.Онищенко и В.В.Кутырева, Москва, 2013 г.ред.10Основные положения диссертации вошли в специализированный разделПрактическогоруководства«Стандартыиалгоритмымероприятийприинфекционных и паразитарных болезнях» Алма-Ата, Казахстан, 2008 г.Положения, выносимые на защиту:1. Формирование нового для Российской Федерации научного направления«молекулярная паразитология» открывает новые возможности для медицинскойнаукиипрактикиздравоохраненияигосударственногосанитарно-эпидемиологического надзора. Применение характерных для молекулярноймедицины, пока недостаточно используемых в медицинской паразитологии,молекулярно-биологических технологий позволяет получить новые научныеданные и существенно расширить научные знания в этиологии и патогенезепаразитарных болезней, в открытии истинных причин возникновения рядамассовых социально значимых заболеваний человека, пока относимых кнеинфекционным болезням.2.

Использованиеметодовмолекулярнойпаразитологиипозволилополучить объективные данные о распространении патогенов паразитарнойприроды, оценить и рассчитать уровень риска заражения возбудителямипаразитарных болезней за счет индикации, идентификации и количественногоопределения степени контаминации абиотических объектов среды обитаниячеловека (рекреационные водоемы, источники и системы хозяйственно-питьевоговодоснабжения, продукты питания, бытовые отходы, хозяйственно-фекальныесточныеводы),изараженностивозбудителямипаразитарныхболезнейбиологических объектов, играющих роль промежуточных хозяев и переносчиков.3.

Методы молекулярной паразитологии, применённые для изученияареалов комаров-переносчиков позволили доказать завоз и укоренение натерритории Российской Федерации экзотических видов комаров Aedes aegypti иAe. albopictus, способных передавать возбудителей вирусных лихорадок Денге,Чикунгунья и Зика. Указанными методами удалось доказать наличие и отсутствиепередачи малярии (Республика Таджикистан и Киргизская Республика), что11послужило основой для признания элиминации малярии на этих территориях, идирофиляриоза (Кировская область РФ).Апробация результатов исследованияОсновные положения диссертации были доложены на: Iмеждународнойконференции«Молекулярнаямедицинаибиобезопасность», Москва, 26-28 октября 2004 года IXсъездеВсероссийскогонаучно-практическогообществаэпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 26-28 апреля 2007 года VIIВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународным участием «Молекулярная диагностика – 2010», Москва, 24-26ноября 2010 года Всероссийской конференции «Актуальные аспекты паразитарныхзаболеваний в современный период», Ростов-на-Дону, 28-29 сентября 2011 года VIIIВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународным участием «Молекулярная диагностика – 2014», Москва, 18-20марта 2014 года Научно-практической«Современныевопросыконференциимедицинскойсмеждународнымпаразитологиииучастиеминфекционныхзаболеваний», Самарканд, Республика Узбекистан, 28-29 октября 2014 года II Всероссийской конференции с международным участием «Социальнозначимые и особо опасные инфекционные заболевания», Сочи, 02-05 ноября 2015года XIX форуме «Национальные дни лабораторной медицины – 2015»,Москва, 23-25 сентября 2015 года XXIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство»,Москва, 11-14 апреля 2016 года XVI семинаре-конференции проекта 5-100, Москва, 06-08 июня 2016года12 II Российском конгрессе лабораторной медицины, Москва, 12-14октября 2016 года IIIВсероссийскойконференциисмеждународнымучастием«Социально-значимые и особо опасные инфекционные заболевания», Сочи, 01-04ноября 2016 года IX Ежегодном всероссийском конгрессе по инфекционным болезням смеждународным участием, Москва, 27-29 марта 2017 года IX Всероссийской научно-практической конференции с международнымучастием «Молекулярная диагностика – 2017», Москва, 18-20 апреля 2017 года III Российском конгрессе лабораторной медицины, Москва, 11-13октября 2017 годаДиссертацияапробировананасовместномзаседанииинститутамедицинской паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеванийим.Е.И.Марциновского и кафедры тропической медицины и паразитарныхболезней МПФ ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.И.М.Сеченова Минздрава России(Сеченовский Университет) (протокол № 7 от 19 октября 2017 года).Личноеучастиеавторавполучениинаучныхрезультатов,изложенных в диссертацииАвтор лично сформулировал новое научное направление – молекулярнуюпаразитологию, широко пропагандировал его на различных, в том числе имеждународных, научных форумах, уточнил и апробировал подходы кэкспериментальному конструированию ПЦР-диагностикумов, спланировал иосуществил экспериментальную часть работы.Е.Н.Морозовым предложена и обоснована возможность применениямолекулярно-паразитологическихметодовнетольковстационарныхлабораторных условиях, но и в условиях мобильной паразитологическойлаборатории.

Характеристики

Список файлов диссертации