Диссертация (1139576), страница 34
Текст из файла (страница 34)
HNP 1–3 синтезируются тольконейтрофилами и составляют 99% всех антимикробных пептидов данного типа.Поэтомуихможносчитатьспецифическимиклеточнымимаркераминейтрофилов.Внашемисследованиипроведеноколичественноеопределениеантимикробных пептидов из группы α-дефензинов (HNP 1–3) в субгингивальнойбиопленке (десневой жидкости) и плазме периферической крови в группахсравнения.Количество отбираемой десневой жидкости зависело от участкалокализации зуба и степени воспалительных реакций в тканях пародонта.
Упациентов с интактным (здоровым) пародонтом, а также страдающих210воспалительными заболеваниями пародонта, в области 1–4 зубов каждогоквадранта забирали от 3–4 до 8–9 мкл. В участках 5, 6 зубов в каждом квадрантеколичество взятой жидкости составляло от 10 до 30 мкл в контрольной группе иот 5 до 25 мкл у больных ХП и у пациентов с КАП.
Среднее количество почетырем зубам в каждом квадранте различалось незначительно у пациентовразных групп. Данные представлены в таблице 29.Образцы исследуемого материала разводили буферным раствором в 2000раз непосредственно перед проведением ИФА. Учет результатов проводилиспектрофотометрически с помощью аппарата Stat Fax мод. 3200 Readers (США).Данные по группам сравнения представлены в таблице 30.Таблица 29Количество десневой жидкости, взятой у пациентов с воспалительнымизаболеваниями тканей пародонта и в контрольной группе (М ± Δ)Группы сравненияКонтрольная1а1б1в23Средний объем, мкл11,85 ± 2,8012,25 ± 3,3710,50 ± 4,8512,05 ± 2,4011,35 ± 2,1610,88 ± 3,96ДИ9,05–14,648,87–15,635,65–15,349,65–14,459,19–13,515,93–14,85Таблица 30Количество антибактериальных пептидов (α-дефензинов) в десневойжидкости у пациентов с воспалительными заболеваниями тканейпародонта и в контрольной группе (М ± Δ)Группы сравненияКонтрольная1а1б1в23Концентрация HNP 1-3,ng/ml1047,0 ± 285,51079,0 ± 241,05534,1 ± 915,6*6256,2 ± 823,4*1596,0 ± 253,0*3459,4 ± 632,2*ДИ,ng/ml761,9–1333,0837,8–1320,04618,5–6449,75432,8–7079,61343,0–1849,02837,2–4091,6211Мы наблюдали значительные вариации содержания α-дефензинов вдесневой жидкости у отдельных индивидуумов в каждой из обследованныхгрупп пациентов.
При этом содержание α-дефензинов в десневой жидкости былов 4–5 раз выше, чем в плазме периферической крови как у здоровых людей, таки у больных с воспалительными заболеваниями тканей пародонта.Так, содержание α-дефензинов в десневой жидкости у пациентов синтактным пародонтом варьировало в диапазоне от 10 ng/ml до 4000 ng/ml, асреднее количество составляло 1047,0 ± 285,5 ng/ml; в группе 1а — от 1 ng/mlдо 4000 ng/ml, среднее количество — 1079,0 ± 241,0 ng/ml; в группе 1б — от 575ng/ml до 14000 ng/ml, среднее количество — 5534,1 ± 915,6 ng/ml; в группе 1в —от 5432,8 ng/ml до 7079,6 ng/ml, среднее количество — 6256,2 ± 823,4 ng/ml; вгруппе 2 — от 1343,0 ng/ml до 1849,0 ng/ml, среднее количество — 1596,0 ± 253,0ng/ml и у больных группы 3 — от 2837,2 ng/ml до 4091,6 ng/ml, среднееколичество — 3459,4 ± 632,2 ng/ml (табл.
30).При проведенном ранжированном анализе данных установлено, что у 13человек в контрольной группе (18,6%) концентрация α-дефензинов в десневойжидкости была меньше 100 ng/ml, еще у такого же числа респондентов (18,6%)она достигла 1000 ng/ml, еще по 22 респондента (31,4%) отличались болеевысоким уровнем α-дефензинов — до 2000 ng/ml и 3000 ng/ml соответственно.В основных группах/подгруппах были получены следующие результаты(рис.
62). В группе 1а количество α-дефензинов в десневой жидкости непревышало 300 ng/ml: причем у 9 респондентов (12,8%) оно было в пределах 10ng/ml, у 24 респондентов (34,2%) — в пределах 200 ng/ml — 300 ng/ml, у 31респондентов (44,2%) — в пределах 1000 — 2000 ng/ml и высокое содержание αдефензинов определяли у 5 (7,1%) — в пределах 4000 ng/ml.В тоже время у пациентов группы 1б минимальное количество αдефензинов в десневой жидкости составило 575 ng/ml. При этом у 33респондентов (42,7%) оно составило 1000 — 2000 ng/ml, у 12 респондентов(12,7%) — 3000 ng/ml и у 22 респондентов (31,4%) выявлены крайне высокиепоказатели — от 10 000 до 14 000 ng/ml.212В группе 1в у 5 респондентов (7,1%) уровень α-дефензинов составил 200ng/ml, у 13 респондентов (18,6%) — 201–300 ng/ml, у 18 респондентов (25,7%)— 301–1000 ng/ml, у 17 респондентов (23,8%) — 1001–2000 ng/ml, у 11респондентов (15,7%) — 2001–3000 ng/ml и у 5 (8,6%) также определялись403530031200051в240001030001б20001510001а30020200контрольная группа1002510относительная частота, %крайне высокие показатели содержания α-дефензинов — 4000–12000 ng/ml.концентрация HNP 1-3 ng/mlРис.
62. Распределение пациентов по частоте обнаружения в десневойжидкости разных количественных уровней HNP 1–3, %.У 12 респондентов (24%) с ХГ (группа 2) содержание α-дефензинов непревысило 300 ng/ml, у 19 (38%) — находилось в пределах 301 — 1000 ng/ml, у13 (26%) — в пределах 1001 — 3000 ng/ml, у 4-х (8%) — в пределах 3001 — 4000ng/ml, у 2-х (4%) — выявляли крайне высокие цифры до 12000 ng/ml.У респондентов с КАП (группа 3) у 6 (15%) содержание α-дефензиновсоставило 300 ng/ml, причём у 10 (25%) — находилось в пределах 301 — 1000ng/ml, у 9-и (23%) — в пределах 1001 — 2000 ng/ml, у 6-и (15%) —2001 — 3000ng/ml, еще у 6-и (15) — 3001—4000 ng/ml, у 4-х (10%) — также выявляли крайневысокие цифры до 12000 ng/ml.213Таким образом, по содержанию α-дефензинов в десневой жидкости невыявлено достоверных различий у респондентов контрольной группы и группы1а (ХПЛ), однако в других группах/подгруппах выявлена статистическидостоверная тенденция к выраженному увеличению количества α-дефензинов: в5 раз — при ХПС, в 6 раз — при ХПТ, в 3,3 раза — при КАП, и в 1,5 раза вышепри ХГ по сравнению с контрольной группой (интактный пародонт).При сопоставлении полученных данных с выявлением молекулярныхмаркеров пародонтопатогенных бактерий установлено, что у 14 респондентовконтрольной группы (20%) с помощью ПЦР-диагностики выявлена маркернаяДНК одного пародонтопатогенного вида и у 3 респондентов (4,3%) — двух видовпародонтопатогенов.
Это совпало с определением высоких уровней содержанияα-дефензинов в области исследуемых нами участков зубодесневой борозды. Вмассиве респондентов, с отрицательным результатом ПЦР-диагностикипародонтопатогенов, среднее содержание α-дефензинов в десневой жидкостибыло почти в 2 раза ниже, чем в целом по группе (составляло 536,2 ± 222,8 ng/ml).Приранжированииповыявленнымвидампародонтопатогеновустановлена умеренно выраженная корреляционная зависимость содержания αдефензинов и определением P.
gingivalis в пародонтальных карманах (R = 0,596),T. forsythia (R = 0,673), T. denticola (R = 0,612), а также числом видовпародонтопатогеннойгруппывассоциациях(R=0,447)ичисломинфицированных участков пародонта (R = 0,396). Отмечены также умеренныекорреляции с наличием кариозных полостей (R = 0,506), значениямипародонтального индекса PI (R = 0,397), индекса API (R = 0,269), величинойпародонтального кармана (R = 0,392) и возрастом респондента (R = 0,412).Показано также наличие прямой корреляции с распределением пациентов понозологическим группам (R = 0,447) и наличием сопутствующих заболеванийсердечнососудистой системы (R = 0,394).Умеренная отрицательная корреляция установлена между содержанием αдефензинов в десневой жидкости, различиями по полу (R = –0,269) и привычкойкурения (R = –0,337) (таблица 31).214Таблица 31Корреляционная матрица α-дефензинов и клинико-лабораторныхпоказателей по группам сравненияПеременная величинаГруппа по нозологииα-дефензины в плазмекрови0,494α -дефензины вдесневой жидкости0,447Возраст пациента0,4720,412Глубина ПК0,4560,392Индекс КПУ–0,1900,017Кариес0,4490,506ОНI-s0,0260,134PMA0,1060,029PI0,2280,397API0,1870,269P.
intermedia0,1340,125T. forsythia0,3880,673T. denticola0,2030,612A. actinomycetemcomitansP. gingivalis0,0510,1790,3970,596Количество видов вассоциацииКоличествоинфицированныхучастковПол0,2360,4470,1750,396–0,369–0,269Курение0,167–0,337Сердечно-сосудистыезаболеванияЗаболевания ЖКТ0,1890,3940,2680,014Примечание: в таблице представлены статистически достоверно значимые величиныпри р < 0,05, «–» — отрицательна корреляция признаков.215Нами также было установлено, что уровни α-дефензинов в плазмепериферической крови были в 4–5 раз меньше, чем в десневой жидкости как уздоровых людей с интактным пародонтом, так и у больных с воспалительнымизаболеваниями тканей пародонта.
Действительно, концентрация α-дефензинов вплазме крови практически здоровых людей с интактным пародонтом(респондентов контрольной группы) варьировала в пределах от 40 до 60 ng/ml; уреспондентов с ХП группы 1а — от 30 до 150 ng/ml; группы 1б — от 50 до 1100ng/ml, группы 1в — от 320 до 400 ng/ml, респондентов группы 2 с ХГ — от 120до 140 ng/ml и респондентов группы 3 с КАП — от 140 до 220 ng/ml (таблица 32).Таблица 32Содержание α-дефензинов в плазме периферической крови (М ± Δ)ГруппаКонтрольная1а1б1в23Концентрация α —дефензинов, ng/ml50,96 ± 8,94105,00 ± 4,79*260,00 ± 55,60*359,20 ± 40,34*128,56 ± 12,63*178,35 ± 38,78*ДИ42,02–59,90100,10–109,70204,60–315,80318,86–399,54115,93–141,19139,57–217,13Если в контрольной группе содержание α-дефензинов ниже 20 ng/mlвыявлено у 22 респондентов (31,4%), от 20 до 50 ng/ml — у 28 респондентов в(40,0%), от 51 до 100 ng/ml у 20 респондентов (28,6%), то при воспалительныхзаболеванияхпародонтавысокийуровеньα-дефензиновопределялсязначительно чаще.Так, при ХПЛ у 11 респондентов (15,7%) концентрация α-дефензиновсоставляла от 20 до 50 ng/ml, у 8 респондентов (11,0%) — от 51 до 100 ng/ml и убольшей части — у 51 респондента (72,8%) — от 101 до 150 ng/ml.
При ХПС у 6респондентов (8,6%) содержание α-дефензинов составило от 20 до 50 ng/ml, у 12респондентов (17,1%) — от 51 до 100 ng/ml, у 23 респондентов (33,3%) —находилось в пределах 101— 200 ng/ml, у 23 респондентов (33,3%) — в пределах216210 —350 ng/ml и у 6-и респондентов (8,4%) — в пределах 357 — 1000 ng/ml.При ХПТ у 8 респондентов (11,4%) концентрация HNP 1–3 составляла 100 ng/ml,у 19 респондентов (27,1%) — от 101 до 150 ng/ml, у 24 респондентов (34,3%) —от 151 до 200 ng/ml, у 9 респондентов (12,9%) — от 201 до 350 ng/ml и у 10респондентов (14,3%) — от 351 до 1000 ng/ml.При ХГ уровень α-дефензинов в плазме периферической крови у 17респондентов (33%) достигал 200 ng/ml; у 5 респондентов (10%) — 50 ng/ml; у6 респондентов (12%) — от 51 до 100 ng/ml; у 9 респондентов (18%) — от 151 до200 ng/ml; у 7 респондентов (14%) — от 351 до 1000 ng/ml.При КАП уровень α-дефензинов составлял 200 ng/ml у 13 респондентов(33%); 100 ng/ml — у 6 респондентов (15%), у 8 респондентов (20%) — от 101 до150 ng/ml; у 10 респондентов (24%) — от 201 до 350 ng/ml и у 3 респондентов(7,5%) — 1000 ng/ml (рис.
63).относительная частота, %807060контрольная группа501а401б30201в2103020 50 100 150 200 350 1000концентрация HNP 1-3, ng/mlРис. 63. Распределение пациентов по частоте обнаружения в плазмепериферической крови разных количественных уровней HNP 1–3, %.217Такимобразом,уровеньα-дефензинов(HNP1–3)вплазмепериферической крови больных воспалительными заболеваниями тканейпародонта был статистически достоверно выше в 2–7 раз, чем у практическиздоровых людей с интактным пародонтом. При этом у больных ХП уровни αдефензинов были статистически достоверно выше в зависимости от степенитяжести пародонтита (ХПТ в 1,4 раза > ХПС в 2,5 раза > ХПЛ).Содержание α-дефензинов (HNP 1–3) в плазме периферической кровистатистически достоверно умеренно коррелировало с формой воспалительногозаболевания тканей пародонта (группа) (R = 0,494), возрастом (R = 0,472) иполом пациента (R = –0,369), а также с величиной пародонтального кармана (R= 0,456), числом кариозных полостей (R = 0,449); слабо коррелировало синдексами API (R = 0,187) и индексом КПУ (R = –0,190).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
