Диссертация (1139576), страница 32
Текст из файла (страница 32)
aureus (1 штамм), тоесть у 3 из 30 штаммов (частота 10%), а у пародонтопатогенных видов — Т.forsythia (1 штамм), P. gingivalis (1 штамм), то есть у 2 из 36 (частота 5,5).Различия почти в 2 раза также были статистически достоверны (р = 0,031).К-6566677690К+91929394Рис.
56. Ген резистентности CTX-M-2 к цефалоспоринам -1Обозначения:93 — E. faecalis CTX-M-2+101196К- 65 66 67 7690 К+ 91 92 93 94 101А. Ген Mec-1резистентности кцефалоспоринам-2:92 — P.gingivalisБ. Ген VIMрезистентности ккарбапенемам -1:91 — P. micraК- 6566 67 76К+ 90 91 92 93 94 101Рис. 57. Ген резистентности Mec-1 к цефалоспоринам-2 (А) и VIM — ккарбапенемам-1 (B)Как известно, более высокий уровень устойчивости возбудителей связан сгенами резистентности к карбапенемам, которые можно разделить на несколькогрупп. Так, ген VIM (рис.
57Б) был выявлен у 1 штамма Pseudomonas aeruginosae(частота для резидентной флоры — 3,3%) и 1 штамма P. micra (частота дляпародонтопатогенной флоры — 2,8%).Другой ген, кодирующий резистентность к карбапенемам 2 типа, — NDM(рис. 58) — выявлен у 1 штамма K. pneumonia (частота для резидентной флоры— 3,3%) и ни в одном случае — у пародонтопатогенных бактерий.И, наконец, третий ген этой группы — OXA-48 — не выявлен ни в одномслучае (рис.
59). Таким образом, обсуждая устойчивость к карбапенемам, можносделать заключение о единичных находках генов резистентности.197K-6566677690К+91929394101Рис.58. Ген резистентности NDM к карбопенемам-2Обозначения:101 — K.pneumoniae NDM+.К-6566677690К+91929394101Рис. 59 Ген резистентности OXA-48 к карбопенемам-3.Отрицательный результат ПЦР (контроль положительный).Резистентностькгликопептиднымантибиотикам(ванкомицину,тейкопланину) кодируется генами VanA и VanB (рис.
60). Среди резидентнойфлоры выявлен 1 штамм E. faecalis с геном VanB, кодирующим устойчивостьэнтерококков к ванкомицину (частота 3,3%). Среди пародонтопатогенных видовданный ген не обнаружен, но выявлен 1 штамм P. intermedia с геном VanA,кодирующим расширенный спектр как против ванкомицина, так и противгликопептидного препарата нового поколения — тейкопланина (частота 3,3%).Таким образом, обсуждая устойчивость к гликопептидам, можно сделатьзаключение о единичных находках генов резистентности.198К-6566677690К+К+VanAVanB91929493Рис. 60. Гены резистентности VanA и VanB к гликопептидамОбозначения:76 — E. faecalis VanB+;93 — P.
intermedia VanA+.Ген Erm, кодирующий резистентность к макролидам, был выявлен у 5штаммов резидентной флоры из 30 и у S. sanguis (1 штамм), S. salivarius (1штамм), S. aureus (1 штамм), Enterococcus faecalis (1 штамм), Klebsiellapneumonia (1 штамм), то есть с частотой 16,6%. У пародонтопатогенов несколькореже — P. gingivalis (1 штамм), P. micra (1 штамм), S.
intermedius (2 штамма), тоесть с частотой 11,1%. Различия в 1,5 раза были статистически достоверны (p =0,05).Ген Tet, кодирующий резистентность к тетрациклинам, был выявлен у 7штаммов резидентной флоры из 30: у S. sanguis (1 штамм), S. epidermidis (1штамм), S. aureus (1 штамм), Klebsiella pneumonia (1 штамм), Pseudomonasaeruginosae (1 штамм), Veillonella parvula (2 штамма), то есть с частотой 23,3%.У пародонтопатогенов несколько реже — у 4 штаммов: Tannerella forsythia (1штамм), P. gingivalis (1 штамм), P. micra (1 штамм), S. intermedius (1 штамм), тоесть с частотой 11,1%.
Различия в 2 раза были статистически достоверны (p =0,025).Плазмидная резистентность к фторхинолонам QnrB (но не QnrА, QnrS)выявлена у 4 штаммов резидентных бактерий: у S. sanguis (2 штамма), Klebsiellapneumonia (1 штамм), Veillonella parvula (1 штамм), то есть с частотой 13,3% , вто время как среди пародонтопатогенных видов — только в 2 случаях: P.199gingivalis (1 штамм), S. intermedius (1 штамм), то есть с частотой 5,5%.
Различияболее чем в 2 раза были статистически достоверны (p = 0,025).Примечательно, что, среди выделенных нами культур были штаммы смножественной резистентностью к антибиотикам: Klebsiella pneumonia — к 5, S.aureus, S. sanguinis, P.gingivalis — к 4, Enterococcus faecalis, S. intermedius — к 3препаратам.Причемчастотавыявленияштаммовсмножественнойустойчивостью среди резидентных видов составила 13,3% (4 штамма), апародонтопатогенных — 5,5% (2 штамма).
Различия почти в 2,5 раза былистатистически достоверны (p = 0,025).Основное содержание дальнейшего исследования в этом направлениисостояло в сравнении результатов фенотипического определения резистентностик антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом и детекциисоответствующих генов резистентности с помощью ПЦР, что позволилопроследить связь между частотой встречаемости отдельных генетическихмаркеров резистентности и результатами стандартного метода определениячувствительностиумикроорганизмов,формирующхбиопленкидесен(пародонтальных карманов) при воспалительных заболеваниях пародонта.Для этого использовали следующие диски: метронидазол, линкомицин,метициллин (ампициллин), амоксициллин + клавуланат натрия, спирамицин(эритромицин), ванкомицин, тетрациклин (доксициклин), имепенем, ципро- имоксифлоксацин (таблица 25).Очевидно, что наиболее часто применяемые (за последние 20–30 лет) встоматологической практике препараты — метронидазол и линкомицин —продемонстрировали самое высокое число устойчивых штаммов — 52,3 и 22,7%соответственно, причем чувствительных к метронидазолу штаммов было в 3,9раза меньше, чем устойчивых, а для линкомицина это соотношениеприближалось к 1:1.200Таблица 25Частота выделения резистентных и чувствительных штаммовпародонопатогенных бактерий (абсолютное число штаммов, %)Диски сЧастотаЧастотаCooтнопрепаратамирезистентныхчувствительныхшениеR/Sштаммов-Rштаммов-S(кол-во / %)(кол-во / %)Метронидазол2352,3613,63,9**Линкомицин1022,71227,30,8Метициллин511,42761,40,2*Амоксиклав12,34090,90,03*Спирамицин613,62454,50,3*Ванкомицин1022,72863,60,4*Доксициклин24,63781,80,06*Имепенем22,34195,50,02*Ципрофлоксацин613,62863,60,2*Моксифлоксацин24,63068,20,07*Обозначения:** — показатель резистентных штаммов достоверно выше, чем чувствительных;* — показатель резистентных штаммов достоверно ниже, чем чувствительных.Количество метициллин-резистентных штаммов составило 11,4%, чтокоррелировало с выявлением генов резистентности CTX-M-2 у 16,7% штаммов(r = 0,789; р = 0,032).
При использовании беталактамазо-защищенных препаратов(амоксиклав) показатель резистентных штаммов снижался до 2,3%, чтокоррелировало с выявлением гена резистентности Mec-1 у 5,5% штаммов (r =0,648; р = 0,022).Резистентность к карбопенемам (имепенем) выявлена только у 2,3%штаммов, а ген VIM — у 2,8%, то есть показана высокая прямая корреляционнаязависимость (r = 0,799; р = 0,01).201Резистентность к макролидам (спирамицин) выявлена у 13,6% штаммов, аген Erm — у 11,1% штаммов, то есть также показана высокая прямаякорреляционная зависимость (r = 0,764; р = 0,01).Резистентность к тетрациклинам (доксициклин) выявлена только у 4,6%штаммов, а ген Tet — у 11,1% штаммов, то есть статистически достовернаякорреляционная зависимость не выявлена (r = 0,234; р = 0,052).Резистентность к гликопептидам (ванкомицин) выявлена у 13,6% штаммов,а гены VanA и VanB — у 3,3% штаммов, то есть корреляционная зависимостьтакже не выявлена (r = 0,242; р = 0,056).Резистентность к фторхинолонам разных поколений — ципрофлоксацину имоксифлоксацину — выявлена у 13,6 и 4,6% штаммов соответственно, аплазмиды QnrB — у 5,5% штаммов, при этом установлена прямая высокаякорреляционная зависимость для моксифлоксацина (r = 0,785; р = 0,01).Такимпрепаратовобразом,длябольшинства(беталактамы,карбапенемы,изученныхантибактериальныхмакролиды,фторхинолоны)установлена достоверная взаимосвязь между наличием генов, кодирующихрезистентность,ирезультатамифенотипическогометодаопределениячувствительности.
Случаи ее отсутствия (тетрациклины, гликопептиды) могутбытьобъясненыналичиемдополнительныхгенетическихмаркероврезистентности, которые не учитывались в нашем исследовании, так как помимогенов Tet, VanA и VanB, отвечающих за устойчивость к данным антибиотикам,возможно ее кодирование другими хромосомными генами и плазмидами.Полученные данные позволяют сделать заключение о предпочтительномиспользовании ряда препаратов в комплексном лечении заболеваний пародонта.На наш взгляд, к ним могут быть отнесены те антибиотики внутриклеточногодействия, к которым определена минимальная частота выявления генетическихмеханизмов резистентности: макролиды, тетрациклины и фторхинолоны.Применение препаратов этих групп показано не только в качестве терапии вострой фазе заболевания, но и в фазе ремиссии, в качестве профилактическихкурсов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
