Диссертация (1139576), страница 28
Текст из файла (страница 28)
Это, в свою очередь, позволило намв дальнейшем проанализировать полученную базу данных с точки зрениявыявлениявозможныхвзаимосвязейсмикробиологическимиииммунологическими параметрами.4.2. Сравнительная микробиологическая характеристика пациентов понозологическим формам (хронический гингивит, хронический пародонтит,кандида-ассоциированный пародонтит)Известно, что воспалительные заболевания тканей пародонта связаны сраспространением пародонтопатогенной и изменением качественного иколичественного состава представителей резидентной микрофлоры [57, 100, 136,139, 167, 242, 410].Поэтому,микроскопии,используямыпровеливозможностисканирующейцитоморфологическиеэлектроннойисследованиясоставаподдесневой биопленки при разных нозологических формах воспалительныхзаболеваний пародонта и у пациентов контрольной группы.1714.2.1.
Микроскопическая характеристика смешанной микробнойбиопленки пародонта в нормеОсновное содержание данного фрагмента исследования состояло в оценкецитоморфологической картины смешанной биопленки пародонта пациентов синтактным пародонтом (условно здоровые) и основными нозологическимиформами воспалительных заболеваний пародонта по данным различных видовмикроскопического исследования.Микроскопическая характеристика биопленки интактного пародонтапредставлена на рис. 45а, б и в.На рис. 45а при увеличении 200× представлен общий вид смешанноймикробной биопленки, которая структурирована. Отчетливо видны отверстия,выполняющие дренажную функцию, тяжи, укрепляющие матрикс, при данномувеличении слабо прослеживаются контуры бактерий, прикрытые мантией.На рис.
45б при увеличении 100× виден разрыв пролиферирующейбиопленки с выходом микробной массы в виде бугра. Подобные образования,которые формируются при росте однородной биопленки, получили название«монады». Они представляют собой способ пролиферации микробногосообщества и выхода его за пределы первоначальной локализации. Очевидно,что этот механизм имеет место и в случае смешанной биопленки в клиническихусловиях.На рис. 45в при большом увеличении (16 000×) видна поверхностьсмешанной биопленки интактного пародонта. Отчетливо видны контурымикробных клеток под мантией (кокки и палочковидные или бациллярныеклетки). Величина клеточных элементов микробной биомассы составляетпримерно от 250 до 850 нм для кокковидных и палочковидных формсоответственно.172абвРис.
45. Общий вид биопленки интактного пародонта.А — видны холмообразные скопления симбионтов и отверстия, выполняющиедренажную функцию. 200×.Б. Пролиферирующая биопленка интактного пародонта. Виден разрыв мантии свыростом микробной биомассы. 100×.В. Поверхность смешанной биопленки интактного пародонта. Видны контурыбактерий под мантией. Указаны размеры структурных компонентов.
16 000×.1734.2.2. Микроскопическая характеристика смешанной микробнойбиопленки пародонта при хроническом гингивитеИзвестно, что при хроническом (катаральном) гингивите наблюдаютсявоспалительная инфильтрация и отек слизистой десны (пародонта), а микробныйсоставпредставленпреимущественноальфа-ибета-гемолитическимимикроаэрофильными стрептококками, что наиболее полно отражено висследовании И. М. Шишкиной (2007) [108].Нам удалось получить электронно-микроскопическую картину смешаннойбиопленки слизистой оболочки десен при катаральном гингивите (рис.
46). Напредставленной фотографии (6000×) видно доминирование кокковых форм счеткой морфологической картиной стрептококков и единичных клетоксахаромицетов.Рис. 46. Фрагмент смешанной биопленки (преимущественнококковый морфологический вариант) при хроническом катаральномгингивите.
6000×1744.2.3 Микроскопическая характеристика смешанной микробнойбиопленки пародонта при хроническом пародонтитеПринципиальноинуюкартинумынаблюдалиприхроническомпародонтите (рис. 47). При увеличении 6000× отмечается наличие как кокковых,так и палочковидных или бактероидных форм, главным образом за счетпредставителейродовпародонтопатогенныхбактерийPorphyromonas,Prevotella.Рис. 47. Фрагмент смешанной биопленки (преимущественнобактероидный морфологический вариант) при хроническом пародонтите.6000×При использовании трансмиссионной электронной микроскопии (рис. 48)можноотметитьособенностистроенияграмположительныхкокковиграмотрицательных бактероидных форм, а также извитых (трепонемы), которыепозволяют провести их ориентировочную идентификацию. Представленный нафотографияхклеточныйсоставхарактерендляпредставителейпародонтопатогенных видов бактерий, относящихся к родам Porphyromonas,Prvotella и Treponema.175Микрофлора содержимого пародонтального кармана по данным трансмиссионнойэлектронной микроскопииБиопленкакокковидные ↑ ипалочковидные бактерии →спирохетоподобныебактерии ↑↑Рис.
48. Микробный состав биопленки при хроническом пародонтитепо данным световой и трансмиссионной электронной микроскопии.Обозначения:1 — верхний левый квадрант — общий вид фрагмента биопленки при световоймикроскопии;2 — нижний левый квадрант — трепонема T. denticola;3 — правое поле — палочковидные (бактероидные) и кокковые формы. Видны различиямежду пептидогликановым слоем грам+ — кокков и стенкой грам- -бактерий.4.2.4 Микроскопическая характеристика смешанной микробнойбиопленки пародонта при кандида-ассоциированном пародонтитеПрикандида-ассоциированномпародонтитеструктурабиопленкиотличалась доминированием дрожжевых грибов Candida.
При большомувеличении (12 000×) на фотографии, сделанной с помощью сканирующегоэлектронного микроскопа, видны фрагменты биопленки, заключенные в мантию(рис. 49). Клеточный состав представляет собой типичные бластоспоры грибаCandida albicans.176Рис. 49. Фрагмент биопленки дрожжевых грибов Candida albicans изпародонтального кармана при кандида-ассоциированном пародонтите.12 000×Рис.
50. Биопленка дрожжевых грибов рода Candida albicans наслизистой пародонта при кандида-ассоциированном пародонтите. 2500×На рис. 50 при увеличении 2500× видна типичная биопленка с мантией,покрывающая фрагменты псевдомицелия грибов Candida albicans. В пользувидовой принадлежности данного штамма говорит наличие единичныххламидоспор на концах нитей псевдомицелия.1774.3. Результаты исследования биопленки на наличие молекулярныхмаркеров пародонтопатогенных бактерийСпомощьюмолекулярно-биологическихметодовмыисследовалисодержание пародонтопатогенных видов бактерий в области зубодесневойборозды и пародонтальных карманов у обследованных пациентов.
Приидентификации пародонтопатогенных видов бактерий мы использовалиотечественную рабочую классификацию, предложенную В. Н. Царёвым с соавт.(2011), предполагающую выделение пародонтопатогенных видов 1 и 2 порядкав зависимости от их приоритетной значимости в развитии патологии пародонта(вертикальнаяигоризонтальнаяпередачаинфекционногоагента,внутриклеточный паразитизм, высокий уровень выработки токсинов).Соответственно, объектом нашего исследования явилось определениегенетическихмаркеров(Aggregatibacterтрех(Actinobacillus)пародонтопатогенныхвидовactinomycetemcomitans,1порядкаPorphyromonasgingivalis, Tannerella (Bacteroides) forsythia), что соответствует «красномукомплексу», а также 2 порядка (Prevotella intermedia, Treponema denticola,Fusobacterium nucleatum и др.), что соответствует «оранжевому» и «желтомукомплексу» по классификации Sochransky [431].Относительная частота выявления всех исследованных нами видовпародонтопатогенов 1 порядка у больных с воспалительными заболеваниямитканей пародонта и людей контрольной группы статистически достоверноотличались друг от друга, p = 0,0001.
Так, только у 4 (5,7%) из 70 человек создоровым пародонтом с помощью системы «Мультидент-5» была выявлена ДНКA. actinomycetemcomitans (А. а.) и P. intermedia (P. i.), у 6 (8,6%) человек — T.forsythia (T.f.), у 3 (4,3%) ‒ T. denticola (T. d.). P. gingivalis (P. g.) в норме неидентифицировали (рис. 51).Частота выявления этих видов бактерий у больных катаральнымгингивитом была в 1,4–5,0 раз выше, чем у представителей контрольной группы.Так, ДНК P. intermedia и P.
gingivalis определили у 5 (10,0%) человек, T. denticola— у 3 (6,0%), A. actinomycetemcomitans — у 4 (8,0%) и чаще всего T. forsythia —178у 18 (36,0%) пациентов. При этом статистически достоверная разница былаустановлена в частоте определения T. forsythia (χ2кор. = 13,7, p = 0,0001) и P.gingivalis (χ2кор. = 7,3, p = 0,007).Принципиально иная картина получена у пациентов с хроническимпародонтитом.
Из 210 больных ХП ДНК P. intermedia выявили у 112 (53,3%)человек, T. denticola — у 126 (60,0%), T. forsythia — у 155 (73,8%), A.actinomycetemcomitans — 100 (47,6%) и P. gingivalis — у 136 (64,8%) пациентов.При заболевании КАП частота выявления пародонтопатогенов быластатистически достоверно в 5–30 раз выше, чем у людей со здоровымпародонтом, но в 1,34–1,99 раза ниже, за исключением A. actinomycetemcomitans,чем у больных ХП. Так, ДНК P.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
