Диссертация (1139576), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Поэтому методы диагностики и лечения данногозаболевания, безусловно, требуют дальнейшей разработки.В связи с этим при комплексном лечении пародонтита всё большеевнимание уделяют применению препаратов — пробиотиков и эубиотиков,которые способствуют укреплению колонизационной резистентности организмачеловека [19, 26, 45, 75, 78]. В отечественной и зарубежной литературе описаныпопытки применения лактококков и лактобактерий для лечения пародонтита ипрофилактики рецидивов, основанные на использовании принципа микробногоантагонизма [104, 157, 441].К стабилизирующей микрофлоре полости рта относятся также вейлонеллы(Veillonella parvula) и слюнные стрептококки (Streptococcus salivarius), однако ихэффективность при воспалительных заболеваниях в пародонте не изучена [93],что и послужило основанием для проведения данного экспериментальногоисследования.Для проведения исследования мы использовали модель лигатурногопародонтита у крыс, которых после развития воспалительного процесса в деснепоили взвесью эубиотических штаммов вейллонелл (рис.
34) и стрептококков(рис. 35).Рис. 34. Взвесь Veillonella parvula в среде АС 108 CFU/ml (ув. 90 × 10)151Рис. 35. Взвесь Streptococcus salivarius в среде АС 108 CFU/ml (ув. 90 × 10)В обеих группах исследовали микробную колонизацию слизистой оболочкидесны для выяснения возможности колонизации, а также ее продолжительностипосле завершения приема эубиотической взвеси V+S .Крыс, взятых в эксперимент, обследовали бактериологическим методом сиспользованием техники анаэробного культивирования.
Материал забирали иззоны предполагаемого наложения лигатуры (фоновые данные) в транспортнуюсреду Стюарта, доставляли в лабораторию и выполняли количественный посевпо Гольду на 5%-ный кровяной агар с гемином. Чашки Петри с посевамиинкубировали в анаэростате 7 суток при 37 оС. До и после снятия лигатуры на10-е и 20-е сутки у крыс обеих групп проводили исследование состава основныхпредставителей микрофлоры в гнойном отделяемом из очага воспаления сиспользованиембактериологическогометодаитехникианаэробногокультивирования.Далее проводили контрольные бактериологические исследования на 10-е и20-е сутки, как в опытной, так и в контрольной группах. На 20-е суткипрекращали прием экспериментального препарата V+S, после чего на 28-е суткипроводили контроль колонизации исследуемыми штаммами.Животных выводили из опыта, используя гексеналовый наркоз послезавершения серии экспериментов, выделяли нижние челюсти, фиксировали их в15210%-ном растворе формальдегида, осуществляли декальцинирование в трилонеБ по стандартной методике и заливали целлоидином.
Для проведения световоймикроскопииготовилисрезы7–8мкм,которыеокрашивалидляцитоморфологического исследования (гематоксилин/эозин).Микробную обсемененность слизистой оболочки выражали черездесятичный логарифм колониеобразующих единиц на 1 тампон (КОЕ).Результаты исследований обрабатывали методом вариационной статистики сопределением вероятности различий Р (за достоверную разницу принимализначения Р < 0,05).Результаты исследования представлены в таблице 14, из которой видно, чтологарифмическое микробное число слизистой десны у крыс до началаэксперимента составляло 7,0 + 0,3, причем доминировали (в 100% случаев)стафилококки и энтерококки (5,5 + 0,3). Интересующие нас с точки зренияпоследующей колонизации виды S.
salivarius и V. parvula определены у 20%животных в количестве 4,0. При исследовании материала из области воспалениядесны (гнойного экссудата) определяли смешанную флору, представленнуюкокковидными и нитевидными формами бактерий (рис. 36).На фоне лигатурного пародонтита обсемененность и представительствостафило-энтерококковой ассоциации достоверно не изменилось. Ни у одногоживотного не выделены V. parvula, и только у одного — S. salivarius в количестве5,0.
Пародонтопатогенные виды группы превотелл и порфиромонад невыявлены.Через 10 суток эксперимента по колонизации животных опытной группыустановлено следующее. Уровень индигенной микрофлоры достоверно снизилсядо 5,0 + 0,3. Это свидетельствует об улучшении гигиенического состоянияполости рта животных. Изменился также качественный состав флоры. Исчезлистафилококки, а энтерококк выделяли у 100% животных в количестве 5,0 + 0,4.(рис. 37). Увеличились количество и частота обнаружения колонизирующейфлоры: S. salivarius выделяли у 80% животных, а V. parvula — у 20% в количестве4,5–4,0.153Таблица 14Результаты эксперимента in vivo по микробной колонизациипародонта у крыс с лигатурным пародонтитомСрокиИндигеннаяУсловноисследованияфлорапатогеннаяколонизациифлора:пародонтаEnterococcus+StaphylococcusКОЕ / %КОЕ / %lg КОЕ+mlg КОЕ+m7—До10 100%105 — 100%исследования7,0 + 0,35,5 + 0,57—Лигатурный10 100%106 — 100%пародонтит7,0 + 0,46,5 + 0,45—Колонизация,10 100%105 — 100%*10 суток5,0 + 0,35,0 + 0,3*5—Контроль,10 100%105 — 100%10 суток4,5 + 0,45,0 + 0,43—Колонизация,10 100%103 — 100%20 суток3,0 + 0,53,0 + 0,3*3—Контроль,10 100%106 — 100%20 суток3,0 + 0,56,0 + 0,54—Колонизация,10 100%103 — 100%28 суток4,0 + 0,53,0 + 0,3*5—Контроль,10 100%104 — 100%28 суток4,0 + 0,54,0 + 0,3*StreptococcussalivariusVeillonellaparvulaКОЕ / %lg КОЕ+m104 — 20%4,0 + 0,5105 — 10%5,05—10 80%4,5+0,4103 — 20%3,0+0,5103 — 60%3,3+0,30—0КОЕ / %lg КОЕ+m104 — 20%4,00—0103 — 40%3,0 + 0,50—0104 — 20%4,03—10 10%3,03—10 80%3,2 +0,5102 — 10%2,03—10 60%3,0+0,5102 — 20%2,0* — без Staphylococcus в составе ассоциации.Рис.
36. Смешанная флора в мазке из воспалительного очага в пародонте укрысы с лигатурным пародонтитом на 10-й день (ув. 90 × 10)154Рис. 37. Энтерококки в мазке из воспалительного очага в пародонте укрысы с лигатурным пародонтитом на 20-й день (ув. 90 × 10)В контрольной группе уровень индигенной флоры был аналогичным, ностафило-энтерококковая ассоциация выделялась у 100% животных. S. salivariusи V.
parvula определяли как единичные находки в количестве 3,0.Через 20 суток эксперимента по колонизации животных опытной группыуровень индигенной флоры был минимальным — 3,0 + 0,5, что подтверждалохорошее гигиеническое состояние полости рта животных. Стафилококки невыделялись в значимых количествах, а энтерококки составляли 3,0 + 0,3 у 100%животных. Колонизирующую флору — S. salivarius выделяли у 60% животных,а V. parvula — напротив, у предельно большого числа крыс — 80% в количестве3,3 и 3,2 соответственно. В контрольной группе уровень индигенной флоры былдостоверно выше (на 3 порядка!), стафило-энтерококковая ассоциациявыделялась у 100% животных, также в значительном количестве (6,0 + 0,5).
S.Salivarius не выделялся, а V. parvula выявили у одного животного в низкомколичестве (2,0).Для оценки стабильности колонизации слизистой экспериментальноймикробной взвесью V+S проводили исследование колонизации на 28-е сутки. Вопытной группе сохранялся низкий уровень колонизации индигенной флорой155без стафилококков (4,0 + 0,5). Энтерококки выделяли у 100% животных вколичестве 3,0 + 0,4. Колонизирующая флора сохранялась у значительной частиживотных — S. salivarius у 40%, а V.
parvula — у 60% животных на уровне 3,0.В контрольной группе также отмечено снижение обсемененности (видимо,связанное с регрессом воспалительного процесса в пародонте) до 5,0 + 0,5,однако доминировала стафило-энтерококковая ассоциация. Индигенные V.parvula выявлены у единичных животных, а S. salivarius не определялся.Контрольколонизациикандидатнымипробиотическимиштаммамипроводили с помощью масс-спектрометрии по белковому профилю выделенныхкультур, что позволило подтвердить на молекулярном уровне персистенциюименно кандидатных штаммов стрептококков и вейлонелл (рис. 38).В то же время одновременно были выделены штаммы вейлонелл, имеющихиной белковый профиль (рис. 39).Контроль за стоянием тканей воспалительного очага выполняли с помощьюцитоморфологических исследований (световая микроскопия под иммерсией,окраска по Романовскому, 90 ×). При этом были получены следующиерезультаты.Рис.
38. Белковый спектр кандидатного пробиотического штаммаVeillonella parvula, выделенного на 28-е сутки у крысы с модельюлигатурного пародонтита156Рис. 39. Несовпадение белкового спектра двух штаммов вейлонелл V.parvula, выделенных у крысы на 28-е сутки эксперимента, — кандидатногои «дикого» штаммовКонтрольная группа. Через 10 дней после снятия лигатуры в пришеечнойзоне обнаруживались выраженные воспалительные изменения, которыесопровождались массивным инфильтратом, состоящим в основном изсегментоядерных лейкоцитов и макрофагов.
Как и в зоне инфильтрата, так и вприлежащих к нему участках обнаруживались деструктивные изменения,особенно в пришеечной части периодонта и в расположенной здесь костнойткани. Они проявлялись в резорбтивных процессах при участии остеокластов,которые располагались в лакунах, тесно контактируя с костной тканью.Степень выраженности резорбции варьировала. В зоне воспалительныхизменений эпителий десны выглядел утолщенным, вместо рогового слояобнаруживались явления паракератоза. Нижняя поверхность эпителия имеласосочки, глубоко внедряющиеся в подлежащую соединительную ткань. Какправило, эпителиальное прикрепление было нарушено с образованием десневогокармана.
В некоторых случаях отмечены явления некроза, затрагивавшие какткани десны, так и костную ткань альвеолы. В зоне некроза ткани имели157однородный вид, клеточные элементы в кости отсутствовали.Эти изменения затрагивали области, непосредственно граничащие сдесневым карманом.
В одном случае при резком распаде тканей деснынекротизированные костные фрагменты оказывались лежащими на поверхности.В то же время в глубоких отделах периодонта, расположенных ближе к верхушкекорня, воспалительные изменения были значительно слабее. Это же относилосьи к деструкции костной ткани.На 20-е сутки опыта, как и в предыдущем сроке, в пришеечной зонесохранялась выраженная воспалительная реакция. Воспалительный инфильтратсостоял из сегментоядерных лейкоцитов, макрофагов и молодых фибробластов.Расположенный здесь эпителий десны по-прежнему был утолщен с явлениямипаракератоза на поверхности.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
