Диссертация (1139554), страница 44
Текст из файла (страница 44)
Истощение противоопухолевых механизмов иммунной системы у онкологических больных не позволяет231организму в полной мере реализовать преимущество, формирующееся при проведении специфической терапии новообразований. Соответственно не все методы ИТ, основанные на формировании и потенцировании собственного противоопухолевого иммунитета, могут быть адекватно эффективными в условияхпроведения терапии. Современный подход к активации противоопухолевой активности иммунной системы требуют дополнительного использования методовстимуляции лимфоцитов больного in vitro, что и является необходимым условием для проведения АИТ активированными лимфоцитами у онкологическихбольных и предметом наших исследований.Около 20% NK-клеток остаются «нелицензированными», т.е. они теряютрецепторы, которые распознают собственные молекулы МНС и становятся функционально гипореактивными.
Такие клетки могут активироваться под действиемэндогенных цитокинов и приобретать свойства аллореактивных после адоптивного переноса и гомеостатической пролиферации в условиях микроокружения реципиента. Это явление имеет место после адоптивного переноса АЦЛ как МНСсовместимому реципиенту, так и несовместимому по этим молекулам.Показано, что лимфоциты онкологических больных разных нозологических групп хорошо пролиферируют и активируются in vitro в ППС в присутствии комбинации цитокинов. Доказано, что добавление 250 МЕ/мл IL-2 в питательную среду повышает противоопухолевую активность культивируемыхлимфоцитов, что в свою очередь влияет на выработку ими ряда цитокинов иувеличение поверхностной экспрессии маркеров активации, начиная с 3 днякультивирования, что было нами показано ранее [8, 57].
Установлено, что популяция смешанной культуры АЦЛ характеризуется присутствием 70-80% эффекторных клеток (CTL, NK, NKT) и повышенной пролиферативной и цитотоксической активностью, а также отличается высоким уровнем экспрессии активирующих рецепторов CD38, CD25, CD69, NKG2D, HLA-DR и маркеров NКклеток (CD16 и CD56). При этом увеличение цитотоксической активности реализуется в основном за счет субпопуляции активированных NK-клеток, экс-232прессирующих ряд маркеров активации и рецептор NKG2D, а повышение пролиферативной и секреторной функции лимфоцитов отражают другие субпопуляции эффекторов.После того как в клинической практике были использованы ЛАК-клетки следующим подходом к увеличению противоопухолевой активности лимфоцитовстала разработка технологии получения цитокин-индуцированных клеток киллеров (ЦИК) [341].
Терапия ЦИК основана на стимулирующем эффекте множественных факторов, с этой целью кроме IL-2 применяются IL-12, IL-15 или IL-18и моноклональные антитела [30, 47, 241]. Некоторыми авторами было показано,что важную роль в противоопухолевой активности АЦЛ, как Т-лимфоцитов, так иNК-клеток играют IL-2 и IL-15 [30, 164, 211]. Добавление комбинации этих цитокинов в ППС способствует повышению жизнеспособности, пролиферативной активности и функциональной противоопухолевой активности культивируемыхлимфоцитов, а особенно NK-клеток. Предполагается, что цитокины, находящиесяв таком супернатанте (культуральной среде), должны положительно влиять на поверхностную экспрессию маркеров активации лимфоцитов [341, 379].Некоторыми авторами показано, что IL-15, в отличие от IL-2 обладаетболее широким спектром биологических эффектов не только на NK-клетки, нои на Т-клетки, увеличивая их пролиферацию и регулируя апоптоз Т-клеток памяти [255, 283, 317].
Показано, что по сравнению с ЛАК-клетками ЦИК-клеткиоказывают высокую противоопухолевую активность у мышей [379]. В одномиз зарубежных клинических исследований NCT01021059 показано, чтоименно IL-15 обладает увеличенной способностью к экспансии NK-клеток иCТL за счет чего обеспечивается противоопухолевый эффект [142].В настоящей работе представлена комплексная морфологическая, иммунофенотипическая и функциональная характеристика АЦЛ, используемых дляАИТ.
В экспериментальной системе показано, что добавление rhMICA к ЛАКклеткам не приводит к значимому снижению экспрессии NKG2D и подавлению литической способности NK-клеток. Это доказывает перспективность использования активированных in vitro ЦЛ для АИТ онкологических больных.233В результате исследования разработан метод длительного культивирования и активации лимфоцитов, выделенных из периферической крови, средикоторых доля NK-клеток после активации составляла от 30 до 98%.
Предлагаемый способ активации МНК является принципиально новым и основан на совместном применении IL-2 и IL-15 в низких концентрациях. Показано, что данный метод позволяет увеличить количество и эффекторную функцию цитотоксических Т-лимфоцитов и NK-лимфоцитов за счет длительного культивирования и может являться более эффективным и безопасным для проведения АИТу онкологических больных.Проведённые нами исследования свидетельствуют о перспективной возможности использования в питательной среде более низких концентраций IL-2за счет комбинации с IL-15 для активации лимфоцитов, что позволяет увеличитьдлительность культивирования до 14 дней и не уменьшает их эффекторнуюфункцию и жизнеспособность.
Подобные результаты описаны в работах зарубежных авторов [254]. Показано, что добавление IL-15 увеличивает жизнеспособность и степень активации NK-клеток, а IL-2 способствует дифференцировкеэффекторных цитотоксических NK-клеток и CD25+лимфоцитов, в то время как вменьшей степени влияет на жизнеспособность [154].Как правило, выявление онкологического процесса и лечение заболевания проводится на поздних стадиях опухолевой прогрессии, когда основные методы терапии уже неэффективны либо невозможно их применение. Однакоименно на поздних стадиях в силу развития иммуносупрессии со стороны опухоли эффективность ИТ существенно снижается, что побуждает проводить курсиммунологического лечения как можно раньше. Вероятно, неудачи АИТ связаны с анергией аутологичных лимфоцитов и преобладанием супрессивныхфакторов, вырабатываемых опухолевыми клетками, а также наличием большойопухолевой массы у онкологических больных на поздних стадиях заболевания.В данном случае физиологические резервы лимфоцитов не способны элимини-234ровать все клетки опухоли.
В случае неэффективности использования аутологичных лимфоцитов многие зарубежные исследователи рекомендуют использовать аллогенные лимфоциты [151].В данной работе проведено исследование по внедрению метода АИТ в клиническую практику. Оценена безопасность и переносимость применения АИТ сиспользованием АЦЛ у различных онкологических больных включая меланому.Показано, что АИТ активированными лимфоцитами хорошо переносится больными и характеризуется отсутствием побочных эффектов. Данный способ АИТу 6 пациентов меланомой позволил индуцировать высокий противоопухолевыйиммунный ответ, характеризующийся объективным ответом на лечение, выражающемся в регрессии опухоли и уменьшении размеров метастазов.
Считается, чтомеланома является одной из наиболее устойчивых опухолей к консервативнымметодам лечения, таких как ХТ и ЛТ [136]. Она составляет лишь 3% опухолейкожи, но проявляет высокую склонность к метастазированию и приводит к 65%смертей от рака кожи [40]. Метастатическая меланомой является весьма агрессивным заболеванием и в подавляющем большинстве случаев приводит к летальному исходу в ближайшие месяцы после выявления висцеральных метастазов[53]. Несмотря на различные подходы, разработанные для первичной профилактики меланомы, уровень заболеваемости продолжает расти во многих странах[136, 137, 162, 174]. Применение стандартных схем лечения меланомы кожи,включающих ЛТ и ХТ, при ограниченной их эффективности, часто сопровождается развитием нежелательных реакций и осложнений, приводящих к иммунодефицитным состояниям, что обуславливает необходимость разработки методовиммунокоррекции и реабилитации данных состояний [162, 177, 216].
Отдельныеклинические исследования демонстрируют определённую эффективность АИТ влечении меланомы, в частности, с применением ЛАК- или ЦИК-клеток [233].У пациентов без объективного ответа на АИТ отмечено увеличение продолжительности безрецидивного периода до 34 месяцев от начала АИТ. Контрольнад опухолью достигнут у 42 (53,2%) больных КРР и меланомой. Также большин-235ство больных отмечали уменьшение побочных эффектов от химиотерапии, которые ранее проявлялись наличием диспепсии, тошноты, рвоты, нарушением дефекации, депрессией и упадком сил.
Положительные отзывы всех пациентов и значимое снижение средних показателей статуса больных по ECOG после АИТ даютоснование полагать, что данный вид ИТ активированными лимфоцитами можетприменяться для улучшения качества жизни онкологических больных.Используя активированные лимфоциты для персонифицированного лечения онкологических больных было показано, что АИТ непосредственно воздействует на иммунитет онкологического больного и способствует профилактикетоксического действия, как самой опухоли, так и ХТ и ЛТ на организм в целом.Использование АИТ позволяет в комплексе с ХТ у части онкологических больных с распространенными формами злокачественных новообразований привестик увеличению эффективности лечения.Показано, что меланома и КРР могут являться хорошей мишенью дляАИТ NK-клетками и активированными Т-клетками, что представляет собойновую стратегию для ИТ [360, 394].
Из литературных источников можно заключить, что комбинированная ИТ, основанная на ХТ и других противоопухолевых агентах перспективна при лечении КРР и меланомы [355, 360]. Различная иммуногенность данных нозологических форм привлекает внимание сточки зрения ответа на АИТ, а также возможно повлияет на снижение иммуносупрессии у онкологических больных, вызванное увеличенным содержанием Treg, CD95 и MICA в сыворотке крови, как было показано нами ранее.В последнее время в литературе публикуются результаты клиническихисследований, основанные на введении активированных NK-клеток при различных злокачественных новообразованиях [242, 231, 276, 334] (таблица 33).Описаны случаи биотерапия с использованием аутологичных лимфоцитов длялечения рака молочной железы, ПКР, РЛ, рака желудка и кишечника, глиом,лимфом и меланомы.236Таблица 33Результаты клинических испытаний с использованием аутологичныхNK-клеток после активации МНКНозологияРК/РЛРКРак желудка/ РКМеланома/ПКРПКРРМЖРМЖМеланомаМеланомаМеланомаn11/113/77/110145232851Дни инкубации/вид активации4 / IL-2 с Hsp704 / IL-2 с Hsp7021 / стимулир.
Т-клеткии IL-2 с OKT43221 / с фидером и IL-2 сOKT313-21 / с фидером и IL-2IL-2Результатнет ответа на опухольпротивоопухолевая активность NK-клетокнет ответа на опухольнет ответа на опухоль,NK-клетки в кровиПО – 4, ЧО - 2нет улучшения выживаемостиоблучение ПМН как фи- ПО - 1, ЧО - 1, СБ - 2, ПБдер и IL-2-17-10 / с IL-2СБ - 7, ПБ - 1610-14 / IL-2 и IL-15СБ - 19, ЧО - 3, ПБ - 910-14 /с IL-2 и IL-15СБ - 24, ЧО - 4, ПБ - 27Источник[242][276][334][295][167][117][156][65][65][12]n – число пациентов;РК – рак кишечника, РЛ – рак легкого, ПКР – почечно-клеточный рак, РМЖ – рак молочнойжелезы, ПО – полный ответ, ЧО – частичный ответ, СБ – стабилизация болезни, ПБ – прогрессирование болезни.Одним из основных подходов является активация МНК в течение нескольких дней с применением фидерных клеток, белковых веществ, антителили цитокинов. Во многих случаях показано, что NK-клетки хорошо активируются и обладают повышенной противоопухолевой активностью in vitro.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
